Реакции преципитации

Реакции преципитации (от лат. precipitation – стремительное падение вниз) основаны на формировании и осаждении (выпадении в осадок) комплекса растворимый молекулярный антиген – антитело в присутствии электролита.

Максимум преципитации достигается при смешивании растворимых антигена и антитела в эквивалетных или близких к эквивалентым количествах. Для получения реакции преципитации антиген в возрастающих концентрациях добавляют к раствору антитела. Количество осаждающихся иммунных комплексов вначале возрастает, а затем падает. В кривой преципитации можно выделит три зоны:

– избытка Ат (количество добавляемого антигена недостаточно для того, чтобы связать все антитела);

– эквивалентности (когда все Ат и Аг связаны в комплексы);

– избытка антигена (количество антигена превышает необходимое для связывания всех антител).

 

Рис. 18. Кривая преципитации

Различают несколько разновидностей реакций преципитации.

Реакции кольцепреципитации. В узкую пробирку наливают иммунную сыворотку, содержащую антитела, затем сверху осторожно наслаивают раствор, содержащий растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.

 

 

Рис. 19. Реакция кольцепреципитации

Радиальная иммунодиффузия по Манчини – метод, позволяющий количественно определять антигены и антитела.

Антитела смешивают с агаровым гелем, затем полученную смесь наносят на предметные стекла и оставляют для застывания. В застывшем геле вырезают лунки, вносят в них раствор антигена в различных концентрациях и оставляют не менее чем на 24 ч. Антиген диффундирует в гель, связывается с антителами, и при достижении точки эквивалентности происходит осаждение комплексов антиген – антитело в виде кольца, диаметр которого прямо пропорционален концентрации антигена. Таким способом получают калибровочную кривую, с помощью которой можно количественно определить исследуемый антиген.

 

Гель, содержащий антитела

Кольцо преципитации

	(Диаметр кольца)2

 

Рис. 20. Калибровочная кривая

 

Для количественного определения антител применяют этот же метод в обратной последовательности: в гель добавляют антиген, а в лунки – антитела.

 

Иммуноэлектрофорез представляет собой сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации. Смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью элекрофореза, затем в канавку параллельно зонам элекрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации.

 

1. Разделение антигенов (а, б, в)
+		−
2. Внесение иммунной сыворотки в канавку
3. Диффузия и преципитация

 

Рис. 23. Схема иммуноэлектрофореза