Типы микроскопических препаратов и методы их микроскопии
Приготовление фиксированного мазка проводится в несколько этапов: 1) исследуемый материал наносят на чистое, обезжиренное предметное стекло с помощью бактериологической петли и распределяют по площади в 1 см 2. Плотный (густой) материал или культуру из плотной среды вносят бактериологической петлей в каплю физраствора (или воды), тщательно размешивают и распределяют по стеклу на таком же пространстве, как и в предыдущем случае. Величина вносимого материала зависит от предполагаемого количества бактерий в нем. Препарат должен быть таким, чтобы наступило хорошее прокрашивание и обесцвечивание всех бактерий, а также чтобы была возможность наблюдать за единичными бактериями; 2) приготовленный мазок высушивают на открытом воздухе или в теплой струе воздуха (от газовой горелки или воздушного полотенца); 3) препарат фиксируют на стекле для обеспечения безопасности дальнейшей работы, прикрепления бактерий к стеклу, лучшего восприятия ими краски, поскольку структуры убитых бактерий легче и прочнее воспринимают красители; 4) фиксированные мазки окрашивают одним из простых или специальных методов, погружая мазок в краситель или наливая его на препарат так, чтобы вся поверхность препарата была покрыта сплошным слоем красителя, и хорошо просушивают на воздухе. Плохо высушенный препарат дает мутное изображение при иммерсионной микроскопии из-за образования эмульсии. Все методы окраски разделяют на простые и сложные. Простые методы основаны на использовании одного вида красителя (водный фуксин, кристаллический фиолетовый и проч.). В этом случае все микробы окрашиваются одинаково - в цвет красителя. При сложных методах окраски удается выявить тинкториальные свойства микробов (т.е. их отношение к окраске). Эти методы связаны с последовательным нанесением на препарат 2 и более красителей, чередующихся с какой-либо дифференцирующей жидкостью (спирт, кислота), вымывающей предыдущий краситель из бактерий и обесцвечивающий их. Примеры представлены в таблицах 4, 5, посвященных технике и механизмам окраски мазков сложными методами. 5) микроскопия мазка. Ценность бактериоскопического (микроскопического) метода состоит в простоте, доступности методик и быстроте получения результатов (30-60 мин и менее). Однако специфичность его в связи с близостью морфологии разных видов мала, чувствительность ограничена (около 105 бактерий в 1 мл), информация, полученная с его помощью, невелика. Результаты бактериоскопического метода обычно можно использовать как ориентировочные в основном для индикации высоких таксонов. Специфичность и разрешающая способность метода резко возрастают при использовании флуоресцентных и иммунофлуоресцентных методик (табл.3). Таблица 3.
|
