Краткая история развития и задачи санитарной микробиологии.Конфликтом называют столкновение людей, групп или систем, причиной которого являются противоречия в целях и ценностях или желание получить ресурс, имеющийся в ограниченном количестве. Конфликт — неизбежное явление социальной жизни, а потому любой менеджер обязан знать, какие причины приводят к конфликтам, как конфликт протекает, какие последствия он имеет в жизни организации и каким образом можно разрешать конфликты. Ученые разработали специальную теорию конфликтов. Ниже мы остановимся на тех ее положениях, которые важны с точки зрения деятельности менеджера.
Краткая история развития и задачи санитарной микробиологии. Заслуга открытия микроорганизмов принадлежит голландскому натуралисту А. Левенгуку (1632-1723г.г.), создавшему первый микроскоп с увеличением в 300 раз. В 1695г. он издал книгу «Тайны природы» с рисунками кокков, палочек, спирилл. Это вызвало большой интерес среди естествоиспытателей. Состояние науки того времени позврляло только описывать новые виды (морфологический период). Начало физиологического периода связано с деятельностью великого французского ученого Луи Пастера (1822-1895г.г.). С именем Пастера связаны наиболее крупные открытия в облати микробиологии: исследовал природу брожения, установил возможность жизни без кислорода (анаэробиоз), отверг теорию самозарождения, исследовал причины порчи вин, пива. Предложил действенные способы борьбы с возбудителями порчи продуктов (пастеризация), разработал принцип вакцинации и способюы получения вакцин. Р.Кох, современник Пастера, ввел посевы на плотные питательные среды, подсчет микроорганизмов, выделение чистых культур, стерилизацию материалов. Иммунологический период в развитии микробиологии связан с именем российского биолога И.И. Мечникова, который открыл учение о невосприимчивости организма к инфекционным заболеваниям (иммунитет), явился родоначальником фагоцитарной теории иммунитета, раскрыл антагонизм у микробов. Одновременно с И.И. Мечниковым механизмы невосприимчивости к инфекционным болезням изучал крупнейший немецкий исследователь П. Эрлих, создавший теорию гуморального иммунитета. Гамалея Н.Ф. – основоположник иммунологии и вирусологии, открыл бактериофагию. Д.И. Ивановский впервые открыл вирусы и стал основоположником вирусологии. Работая в Никитском ботаническом саду над изучением мозаичной болезни табака, причинявшей огромный ущерб табачным плантациям, в 1892г. установил, что эта болезнь, распространенная в Крыму, вызывается вирусом. Н.Г. Габричевский организовал первый бактериологический институт в Москве. Ему принадлежат труды по исследованию скарлатины, дифтерии, чумы и других инфекций. Он организовал в Москве производство противодифтерийной сыворотки и успешно применил ее для лечения детей. П.Ф. Здродовский – иммунолог и микробиолог, известный своими фундаментальными работами по физиологии иммунитета, а также в области риккетсиологии и по бруцеллезу. В.М. Жданов – крупнейший вирусолог, один из организаторов глобальной ликвидации натуральной оспы на планете, стоявший у истоков молекулярной вирусологии и генной инженерии. М.П. Чумаков – иммунобиотехнолог и вирусолог, организатор института полиомиелита и вирусных энцефалитов, автор пероральной вакцины против полиомиелита. А.А. Смородинцев – автор гриппозной, паротитной, коревой и полиомиелитной вакцин. З.В. Ермольева – основоположник отечественной антибиотикотерапии Задачи: - Гигиеническая и эпидемиологическая оценка объектов внешней среды по микробиологическим показателям. -Разработка нормативов. -Разработка и экспертиза методов микробиологических исследований разнообразных объектов окружающей среды с целью оценки их санитарно-гигиенического состояния. - Разработка рекомендаций по оздоровлению объектов внешней среды, а также норм-ых документов и контроль за их соблюдением. -Изучение закономерностей жизнедеятельности микрофлоры окружающей среды как в самой экосистеме, так и во взаимоотношениях с человеком. 3. Значение микробиологического контроля качества и безопасности продукции для науки, практики и охраны окружающей среды. Предмет и задачи дисциплины. Микробиологический контроль на пищевых производствах представляет собой все методы исследования и контроля, связанные с определением степени бактериальной обсеменённости контролируемого объекта, а также методы количественного учёта микрофлоры. Микробиологический контроль охватывает все этапы цикла жизни пищевого продукта: начиная с сырья и упаковочных материалов, далее по всем ключевым точкам технологического процесса, включая момент выпуска в реализацию; и вплоть до конца срока хранения. Мир микроорганизмов многочислен и разнообразен. Они повсеместно распространены в природе: в почве, водоемах, воздухе, находятся на продуктах питания и на всех предметах, окружающих человека. Микроорганизмы выполняют колоссальную по значимости биохимическую работу. Они разлагают растительные и животные остатки на поверхности планеты; используются в технологии производства многих пищевых продуктов, различных биологически активных соединений (например, витаминов, антибиотиков), в генной инженерии, а также различных отраслях народного хозяйства. Однако многие микроорганизмы наносят большой ущерб народному хозяйству, вызывая порчу продуктов сельскохозяйственного и промышленного производства. Среди микроорганизмов есть особая группа – патогенные микроорганизмы, которые вызывают заболевания человека, животных, растений. На современном этапе развития народного хозяйства страны, в условиях ускорения научно-технического прогресса, еще в большей степени возрастает роль микробиологической науки. В настоящее время микробиология дифференцирована на ряд самостоятельных дисциплин: общая, медицинская, сельскохозяйственная, ветеринарная, техническая (промышленная) и другие. Одним из разделов технической микробиологии является пищевая микробиология. Без знания микрофлоры пищевых продуктов, специфических свойств микроорганизмов, их биохимической деятельности, зависимости развития от окружающей среды нельзя успешно выполнить задачи, поставленные перед наукой и практикой в области контроля качества, производства, хранения, реализации пищевых продуктов и максимального сокращения их потерь. Значение: вопросам обеспечения мкб безопасности качеству ПП уделяется особое внимание, т.к. это основа- гарантии безопасности потребителя; сокращение потерь с/х сырья и готовой продукции; повышения эффективности производства; повышение конкурентноспособности продукции. Предмет: - строение и морфологические свойства м/о; - физиологические и культуральные признаки м/о; - закономерности жизнедеятельности м/о, роста, размножения и гибели; - методы выделения, идентификации, количественного учета м/о; - методы органолептического анализа качества ПП; - организация и проведение санитарно-микробиологической экспертизы ПП; Задачи: - дать общеобразовательные знания о м/о, особенностях их жизнедеятельности, отличительных морфологических, культуральных, физиологических признаках, необходимых для анализа ПП; - дать профессиональные навыки работы с м/о, познакомится со способами их выделения, идентификации и учета в ПП; - познакомить с организацией МКБ контроля на производстве правилами проведения санитарно-гигиенической экспертизы. 4. Размещение, конструкция, требования к оснащению помещений микробиологической лаборатории. Обеспечение асептических условий в микробиологической лаборатории. Работу с клеточными культурами проводят в специализированной лаборатории, оснащенной необходимым оборудованием, лабораторной посудой и др. средствами. Одним из главных условий при культивировании клеток является обеспечение стерильности на всех этапах работы, предотвращение возможной контаминации вирусами, бактериями, микоплазмами и грибами. Лаборатория должна располагать боксовыми помещениями, предназначенными для проведения работ в стерильных условиях. Стерильность боксов контролируют путем подсчета колоний микроорганизмов на плотных микробиологических средах МПА, Сабуро после 10 мин. выдерживания открытых чашек Петри. Отсутствие роста колоний в начале рабочего дня и рост 1 - 15 в конце работы свидетельствуют о достаточной чистоте помещений. При более массовом бактериальном загрязнении боксы подвергают дезинфекции распылением смеси, состоящей из КМnО4 с формалином. Работу в боксе проводят у пламени газовой горелки или спиртовки (не использовать спирт-денатурат). Горлышки всех флаконов и матрасов с питательными средами, сывороткой, растворами или клеточными культурами обжигают тампоном, смоченным в спирте, пробки прожигают в спирте. Все используемые в работе материалы должны быть стерильными и не оказывать токсического действия на клетки. Стеклянную посуду, резиновые изделия, инструменты моют, стерилизуют по методам, описанным в руководствах. Требования к обеззараживанию материала и уборке помещений, предусмотренные Санитарными Правилами «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами»: - дезинфекцию различных объектов при работе с ПБА III-IV групп патогенности проводят в соответствии с Санитарными Правилами [3]; - методы и средства обеззараживания определяются в каждом отдельном случае в зависимости от вида ПБА и характера обеззараживаемого материала; - в лаборатории должен храниться как минимум недельный запас дезинфицирующих средств; - вновь поступающие на склад серии дезинфицирующих средств необходимо контролировать на содержание действующего вещества; - дезинфицирующие растворы готовит лаборант или дезинфектор; - на емкости с дезинфицирующим раствором должно быть указано его название, концентрация и дата приготовления; - автоклавирование производится персоналом, имеющим свидетельство об окончании специальных курсов; - при наличии централизованной автоклавной ответственность за обеззараживание несет заведующий автоклавной; - контроль работы автоклавов осуществляют в соответствии с требованиями действующего законодательства и Санитарных Правил [3]; - перенос материала для обеззараживания внутри подразделения производится в специальных емкостях (баках, ведрах, биксах с крышками); - текущая уборка помещений проводится ежедневно влажным способом после окончания рабочего дня: в "чистой" зоне лаборатории с применением моющих средств, в "заразной" зоне с применением дезинфектантов; -уборочный инвентарь должен быть промаркирован отдельнодля "чистой" и "заразной" зон; - перенос его из зоны в зону не допускается; - в боксовых помещениях должна проводиться еженедельная генеральная уборка с применением дезинфицирующих средств путем протирания поверхности мебели, приборов, аппаратов, а также стен (на высоту до 2 метров); - после влажной уборки включают бактерицидные лампы; - стеклянные поверхности бактерицидных ламп следует протирать ветошью, смоченной спиртом, не реже 1 раза в неделю. 5.Оборудование и используемый инструментарий в микробиологической лаборатории. В микробиологической лаборатории проводится контроль качества и безопасности продукции по микробиологическим показателям. Основным направлением деятельности лаборатории является микробиологический контроль качества (стерильность или микробиологическая чистота) готовых изделий, сырья и упаковочных материалов, используемых при производстве пищевых продуктов. В соответствии с установившейся лабораторной практикой всю аппаратуру и оборудование содержат в чистоте и в хорошем рабочем состоянии. Перед использованием оборудование следует проверить в соответствии с инструкцией. Оборудование регулярно проверяют и проводят сервисное обслуживание, чтобы обеспечить безопасность и пригодность его к использованию. Оборудование проверяют согласно рабочим условиям и точности. Частота калибровки и проверок каждой единицы оборудования в большинстве случаев должна определяться каждой лабораторией в зависимости от типа оборудования и уровня активности лаборатории и в соответствии с инструкциями изготовителя оборудования. Аппаратуру и оборудование следует сконструировать и установить таким образом, чтобы облегчить работу персоналу и обеспечить выполнение технического обслуживания, очистки, дезактивации и калибровки. Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований. Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований (далее бокс) - это рабочее помещение, оснащенное установкой для горизонтального и вертикального ламинарных потоков воздуха, предназначенной для удаления пыли и других частиц из воздуха, в том числе микробов. b) Боксы биологической безопасности класса II защищают образец, оператора и окружающую среду. c) Ламинарные боксы с горизонтальным оттоком воздуха защищают работу от загрязнения, но выносят любые аэрозоли на лицо оператора. d) Ламинарные кабинеты с вертикальным потоком воздуха защищают продукт при помощи вертикального ламинарного потока воздуха. Очистка и дезинфекции. Рабочую зону очищают и обеззараживают после использования с помощью соответствующего, не обладающего коррозийными свойствами дезинфицирующего средства, руководствуясь инструкцией изготовителя. Регулярно обследуют защитные предфильтры проволочных сеток и вытирают их чистой, пропитанной дезинфицирующим средством тканью. Техническое обслуживание и контроль. Необходимо использовать боксы биологической безопасности, которые предназначены для применения в лаборатории в соответствии с существующей окр-щей средой. Квалифицированный оператор должен проверять эффективность бокса биологической безопасности при получении и затем с регулярными интервалами, как рекомендует изготовитель, а также после любого ремонта или модификации. Следует периодически выполнять проверку чистоты рабочей поверхности и стен бокса от любого микробного загрязнения. Весы и гравиметрические разбавители. Весы используют для взвешивания испытуемой пробы, компонентов питательных сред и реактивов. Гравиметрические разбавители - это электронные инструменты, состоящие из весов и программируемого дозатора жидкости, который применяют для приготовления исходных суспензий проб. Гомогенизаторы, смесители и миксеры. Это оборудование используется для получения исходной суспензии из испытуемой пробы для анализа нежидких продуктов. Необходимо использовать следующую аппаратуру: - перистальтический смеситель (stomacher) со стерильными пакетами, - ротационный гомогенизатор (блендер); - вибрационный миксер (вибратор) со стерильными пакетами; pH-метр применяют для измерения при определенной температуре разности потенциалов между измеряющим электродом и электродом сравнения, погруженными в продукт. pH-метр должен обеспечивать измерение с точностью до ±0,05 единицы pH. pH-метр должен быть оснащен ручным или автоматическим определителем температуры. Использование. pH-метр используют для измерения значения pH питательных сред и реактивов, а также для проверки их качества после стерилизации. Автоклав позволяет поддерживать в камере температуру насыщенного пара и используется для уничтожения (умерщвления) микроорганизмов. Автоклав должен быть оснащен: - как минимум, одним предохранительным клапаном, - сливным краном, - регулятором температуры для поддержания необходимой температуры в камере в пределах ±3 °C (с учетом неопределенности измерения, связанной с измерительной термопарой), - температурным датчиком или регистрирующим термоэлементом. Аппарат для приготовления питательных сред разработан преимущественно для стерилизации больших объемов сред. Он состоит из нагревающегося сосуда, водяной рубашки и устройства непрерывного перемешивания. Оборудование должно быть оснащено термометром, манометром, таймером и предохранительным клапаном. Термостат (инкубатор) состоит из изолированной камеры, которая позволяет удерживать постоянство температуры, однородно распределенной в камере в пределах максимально допустимой температурной ошибки, указанной в методе испытания Холодильник, холодная комната (помещение для хранения на холоде) представляют собой камеры, которые позволяют поддерживать хранение при пониженной температуре. Загрузку холодильников, холодных камер и холодных комнат проводят таким образом, чтобы поддерживалась необходимая циркуляция воздуха и возможность перекрестного заражения была сведена к минимуму. Баня термостатическая контролируемая заполненная жидкостью, с подогнанной крышкой или без нее или другим устройством, ограничивающим испарение, которое требуется, чтобы поддерживать необходимую температуру. Баню используют для: - поддержания температуры стерильных расплавленных агаровых сред для использования в определенных методах; - приготовления первичных образцов суспензий или растворов при контролируемой температуре; - обработки нагреванием первичных образцов суспензии при контролируемой температуре. Стерилизационный сушильный шкаф - это камера, которая способна поддерживать температуру от 160 °C до 180 °C для уничтожения (разрушения) микроорганизмов с помощью сухого горячего воздуха. Дозатор (устройство для разливки) питательных сред и реактивов. Дозатор - это инструмент или устройство, используемое для дозированной разливки питательных сред и реактивов в пробирки, флаконы или чашки Петри. Устройство для подсчета колоний. Ручные устройства подсчета колонии используют счетное устройство, приводимое в действие под давлением, и обычно дающее звуковой сигнал каждой единицы счета и цифровую индикацию общего количества колоний. Центрифуга - это механические устройства, в том числе управляемые с помощью электроники, которые используют центробежную силу для отделения взвешенных частиц, включая микроорганизмы, от жидкостей.
6. Техника безопасности при работе в микробиологической лаборатории. Действия при авариях и чрезвычайных ситуациях. Правила техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории установлены в Санитарных Правилах СП 17-129 РБ 2000. Правила техники безопасности в микробиологической лаборатории предусматривают: -работу с ПБА III-IY групп патогенности выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием, в соответствии с принятым каждым ведомством порядком замещения должностей, прошедшие соответствующую подготовку; - персонал допускается к работе с ПБА только после проведения инструктажа по соблюдению требований биологической безопасности; последующие инструктажи проводятся не реже 2 раз в год; - поименный допуск специалистов к работе с ПБА III-IY групп патогенности оформляется приказом руководителя учреждения; - посторонние лица в лабораторию не допускаются; - посещение "заразной" зоны лаборатории инженерно-техническим персоналом осуществляется с разрешения руководителя подразделения в сопровождении сотрудника лаборатории; - все ремонтно-технические работы проводятся после окончания работы с ПБА и проведения дезинфекционных мероприятий; - в лабораториях, работающих с ПБА III-IY групп патогенности должны быть: план-схема лаборатории и прилегающих помещений в масштабе 1:100 с обозначением дверей и окон, назначения помещений и их площади, расстановкой лабораторного и бытового оборудования и мебели, указанием путей движения патогенного материала инструкция по охране труда при работе с ПБА III-IY патогенности; - должностные инструкции на специалистов, утвержденные руководителем лаборатории (учреждения); - журнал регистрации инструктажа на рабочем месте; - помещения лаборатории должны использоваться по своему прямому назначению, в них запрещается проводить работы, не связанные с выполнением служебных обязанностей; - доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в специальных контейнерах, биксах или сумках-холодильниках; - доставляемые емкости с жидким материалом должны быть закрыты резиновыми или пластмассовыми пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортирования; - дно контейнеров, содержащих емкости с ПБА должно быть покрыто адсорбирующим материалом (марлевая салфетка, ткань, вата и прочее); - не допускается доставка материала в хоз-ых сумках, чемоданах, портфелях и других предметах личного пользования; - прием и разборка материала, доставленного на исследование, проводится с соблюдением мер предосторожности; - персонал диагностических лабораторий должен использовать маску и резиновые перчатки; - емкости с ПБА помещаются на поднос или лоток, покрытый многослойной марлевой салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором; - во время работы двери боксов и предбоксников должны быть закрыты; - выход из бокса во время проведения работы запрещается; - бокс должен быть оснащен средствами сигнализации на случай аварии; - при пипетировании необходимо пользоваться только резиновыми грушами или автоматическими устройствами; - пипетирование ртом в лабораториях строго запрещено; - бактериологическая петля должна быть замкнута в непрерывное кольцо и иметь плечо длиной не более 6 см; - перед использованием посуда, пипетки, оборудование, шприцы должны быть проверены на целостность и исправность; - во время работы все инструменты, имевшие контакт с ПБА III-IY групп патогенности, фламбируются в пламени горелки или сбрасываются в емкости с дезинфицирующим раствором или специальные емкости для последующего обеззараживания; - все емкости для обеззараживания ПБА III-IY групп патогенности, должны быть промаркированы; - автоклавирование проводится персоналом, имеющим свидетельство об окончании специальных курсов; - работы по автоклавированию ПБА III-IY групп патогенности, стерилизации питательных сред и лабораторной посуды, производящиеся в одном помещении (автоклавной), должны быть разделены во времени; - по окончанию работы все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы); - в обязательном порядке производится дезинфекция рабочих поверхностей столов; - рабочий стол по окончанию работ с ПБА III-IY групп патогенности, обрабатывается дезинфицирующим раствором или 70-ти процентным спиртом, или фламбируется горящим факелом; - в случае аварии во время работы с ПБА III-IY групп патогенности проводятся организационные и дезинфекционные мероприятия в соответствии с действующим законодательством; - использованные пипетки полностью (вертикально) погружаются в дезинфицирующий раствор, избегая образования в каналах пузырьков воздуха; - перенос ПБА и использованной посуды для обеззараживания должен осуществляться в закрывающихся емкостях, исключающих инфицирование во время транспортировки; - по окончании отдельных этапов исследования персонал обязан обработать руки 70-ти процентным раствором спирта и вымыть руки с мылом; - по окончании рабочей смены следует обработать и вымыть руки, снять специальную одежду и снова вымыть руки; - запрещается выходить из рабочих помещений в специальной одежде; - после завершения работы лаборатория запирается и опечатывается; - правила внутреннего распорядка лабораторий должны составляться на основании настоящих Правил и утверждаться руководителем учреждения; - прием посетителей, хранение пищевых продуктов, прием пищи разрешается только в специально отведенных местах в "чистой" зоне лаборатории; - вынос из лаборатории оборудования, лабораторной или хозяйственной посуды, реактивов, инструментов и других предметов производится только после их дезинфекции и с разрешения руководителя; - использование материалов и средств личной гигиены, раздражающих кожу, запрещается; - в "заразной" зоне лаборатории запрещается: оставлять после окончания работы на рабочих местах нефиксированные мазки или посуду с ПБА; пипетировать ртом, переливать жидкий инфекционный материал через край сосуда; хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, зонты, хозяйственные сумки, косметику, а также продукты питания; курить, пить воду, принимать пищу; оставлять без надзора рабочее место во время выполнения любого вида работ с ПБА; сливать жидкие отходы в канализацию без предварительного обеззараживания; содержать и выращивать цветы в вазонах; - при появлении у сотрудника симптомов, характерных для инфекционного заболевания, вызываемого возбудителем, с которым он работал, сотрудник обязан поставить в известность руководителя лаборатории. Детям вход в лабораторию запрещен. Должны проводиться текущая дезинсекция и дератизация лабораторных помещений. Необходимо обязательно немедленно сообщать руководителю лаборатории обо всех аварийных ситуациях, создающих угрозу биологической безопасности, и немедленно проводить все медицинские мероприятия для предотвращения последствий аварий. В лаборатории должна быть инструкция по технике безопасности, которую персонал должен знать и строго выполнять и периодически сдавать зачет, подтверждающий знание этой инструкции.
7. Питательные среды: классификация и характеристика. Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные (наилучшие) условия для жизнедеятельности микробов. Питательные среды классифицируют: - по консистенции — жидкие, полужидкие, плотные (твердые ); - по происхождению — животные, растительные, синтетические (приготовлены из определенных химически чистых соединений в точно указанных концентрациях); - по назначению — общеупотребительные (универсальные), дифференциальные, селективные и среды обогащения, специальные. Обычные (простые) среды. Пригодны для культивирования многих видов патогенных и непатогенных бактерий. К ним относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), мясопептонный желатин (МПЖ). Мясопептонный агар готовят из мясопептонного бульона путем добавления 1...2 % агар-агара, который придает питательной среде при охлаждении консистенцию плотного студня. Получают агар из некоторых видов водорослей. Дифференциальные среды. Служат для идентификации бактерии разных видов и родов по их культуральным и биохимическим свойствам. К ним относят мясопептонный желатин, среды Гисса, Эндо, кровяной агар, бактоагар Плоскирева (бактоагар Ж) и др. Элективные (избирательные) среды и среды обогащения. Благоприятствуют размножению бактерий определенных видов и подавляют рост других микробов. К ним относят яичные среды Петраньяни, Гельберга для выращивания микобактерий туберкулеза, среды Дюба — Смита в модификации А. П. Аликаевой для выращивания возбудителя паратуберкулеза и др. Специальные среды. Наиболее оптимальные для выращивания бактерий, не размножающихся на общеупотребительных средах. К ним относят кровяной агар, сывороточный агар, сывороточный бульон, среда Китта—Тароцци (МППБ), среда Сабуро и др. Требования, предъявляемые к питательным средам: 1) быть питательными, т. е. содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. Ими являются источники органогенов и минеральных (неорганических) веществ, включая микроэлементы. Минеральные вещества не только входят в структуру клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические свойства сред (осмотическое давление, рН и др.). При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать; Микроорганизмы, как все живые существа, нуждаются в большом количестве воды. 2) иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — рН, Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т. е. содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена; 3) быть изотоничными для микробной клетки, т. е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальна среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида; 4) быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды (состав, рН и др.); 5) плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию; 6) обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, т. е. соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны. Этот потенциал показывает насыщение среды кислородом. Желательно, чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.
8. Питательные среды: приготовление, стерилизация, хранение, контроль качества. Для приготовления используют сухую питательную среду или ингредиенты для приготовления питательной среды с неизмененным видом, консистенцией, в неповрежденной упаковке организации изготовителя или организации-поставщика. Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред, разбавителей и растворов, используемых в микробиологических испытаниях, должны соответствовать степени чистоты не ниже ЧДА. Сухие питательные среды (ингредиенты для приготовления питательных сред) с истекшим сроком годности не используются. Для приготовления питательной среды необходимо использовать чистую, неповрежденную стеклянную посуду и дистиллированную или деионизированную воду. При приготовлении питательной среды из сухой питательной среды необходимо строго соблюдать инструкцию по приготовлению организации-изготовителя. Для получения качественных, стабильных по составу питательных сред, необходимо соблюдать следующие дополнительные правила приготовления: - навеску сухой питательной среды (составных ингредиентов) помещают в подготовленную посуду, объем которой в 2-3 раза превышает окончательный объем готовой среды; - растворение сухой питательной среды (составных ингредиентов) осуществляют путем постепенного добавления небольших количеств воды при постоянном перемешивании; - в случае необходимости для полного растворения используют нагревание, избегая при этом продолжительного и чрезмерного нагрева, а также подгорании питательной среды. Приготовленные питательные среды разливают в стерильную посуду, которую закрывают пробками или другими приемлемыми способами, и стерилизуют согласно инструкции по приготовлению питательной среды. Введение термолабильных добавок в питательную среду, если они предусмотрены рецептурой, осуществляют сразу после стерилизации. Для этого жидкую питательную среду предварительно охлаждают до комнатной температуры, агаризованную питательную среду до +45(+50)0С и, соблюдая асептические условия, вносят необходимое количество добавки в емкость с питательной средой, после чего тщательно перемешивают для равномерного распределения добавки по всему объему питательной среды. Приготовленные в лаборатории питательные среды (питательная среда (ПС2) и питательная среда (ПС3)), а также питательная среда (ПС4) разливают в пробирки, флаконы или чашки Петри, соблюдая асептические условия. Во избежание появления обильного конденсата на крышках чашки Петри стерильные агаровые среды перед розливом должны иметь температуру +45(+50)0С. Допускается использование автоматических систем для приготовления и розлива питательных сред. На каждую единицу приготовленной питательной среды (ПС2,ПС3) или разлитой в лаборатории питательной среды (ПС4) наносят маркировку, содержащую наименование, дату приготовления (розлива) и срок годности. Допускается нанесение только групповой маркировки при условии одномоментного использования ПС2,ПС3 или ПС4 Каждая приготовленная питательная среда должна контролироваться испытательной лабораторией: - внешний вид готовой питательной среды; - рН готовой питательной среды; - стерильность (отсутствие контаминации) готовой питательной среды;
|
