Метод внутрішньої нормалізації

Цей метод використовується за умови, коли всі компоненти аналізованої проби розділяються, потрапляють в детектор і дають там електричний сигнал. У методі сума площ всіх хроматографічних піків аналізованої суміші прирівнюється до 100% і за величинами площ окремих компонентів визначають їх відсотковий вміст у аналізованій суміші. Таким чином, цей метод дозволяє встановити лише відносний вміст компонентів в суміші.

Сума концентрацій всіх компонентів проби дорівнює 100 %. Для n -компонентної суміші можна записати:

.

З врахуванням рівняння , одержимо:

.

Концентрація і- того компоненту визначається за формулою:

.

Розділивши чисельник і знаменник дробу на калібрувальний коефіцієнт однієї з речовин, яку приймають за стандарт, одержимо:

.

Множники перед величиною піків окремих компонентів називаються нормувальними. Вони відображають різну чутливість детектора до цих речовин в порівнянні зі стандартом, тобто:

.

Нормувальний множник речовини, вибраної як стандарт, дорівнює 1.

Концентрацію будь-якого компонента аналізованої суміші визначають за формулою:

.

Нормувальні множники речовин відносно стандартної речовини знаходять експериментально, хроматографуючи штучні суміші з відомими концентраціями компонентів, за формулою:

Перевага методу внутрішньої нормалізації полягає у виключенні необхідності точного дозування проби. Недоліком методу є те, що всі компоненти суміші повинні розділятися, і для них всіх треба визначити нормувальні множники.

Порядок виконання аналізу. Для встановлення кількісного складу досліджуваної суміші готують з чистих індивідуальних речовин калібрувальну суміш. Для цього зважують на аналітичних вагах чисту і суху баночку з корком. По черзі вносять у неї визначену викладачем кількість індивідуальних речовин, зважуючи її після кожного додавання. Загальний об’єм суміші не повинен перевищувати 1 – 1,5 мл. Далі розраховують процентний вміст калібрувальної суміші і три рази вводять проби об’ємом 2-3 мкл у хроматограф, фіксуючи хроматограми.

Для розрахунку нормувальних множників (f) один з компонентів суміші за вказівкою викладача приймають як стандартний, для якого f=1. Для всіх інших компонентів нормувальні множники розраховують за формулою:

Кількісну характеристику хроматографічного піку Р (висоту чи площу) приймають за вказівкою викладача. Для розрахунку вмісту компонентів у досліджуваній суміші використовують формулу: