Клонирование генов
Фрагменты DNA можно вырезать из генома эукариот специально подобранными рестриктазами и встраивать в DNA плазмиды или вируса вскрытую (разрезанную) теми же рестриктазами. Образуется гибридная плазмида или рекомбинантная DNA. Однако таким способом получается очень небольшое количество рекомбинантной DNA. Клонирование - это способ ее накопления. Для этого рекомбинантные плазмиды встраивают в бактерии и получают рекомбинантные бактерии, которые реплицируют, транскрибируют и транслируют «чужие» гены.
Получение рекомбинантной DNA Из бактериальной массы можно выделить достаточное количество рекомбинантной DNA.
Схема синтеза препроинсулина в трансформированных клетках E.Coli. Плазмиды кольцевые, двухцепочечные молекулы DNA, содержащиеся в бактериальных клетках и способные к репликации и транскрипции, независимо от клеточных хромосом. Обратная транскриптаза (RNA-зависимая DNA-полимераза) - фермент, катализирующий синтез DNA, используя в качестве матрицы RNA. Этот фермент необходим для получения последовательности DNA, комплементарной mRNA (kDNA), применяемой в генной инженерии. С помощью обратной транскриптазы можно получить kDNA- копии mRNA, в которой отсутствуют интроны. Следовательно, при включении в плазмиды эта молекула не подвергается сплайсингу. Рекомбинантные микроорганизмы нашли практическое применение как продуценты необходимых человеку веществ: белковых гормонов, биологически активных пептидов.
|
