Методика получения митотических хромосом
1) 1—2 мл венозной крови и добавить ее в смесь питательной среды с фитогемагглютинином (белок бобовых растений). Последний вызывает иммунологическую трансформацию лимфоцитов и их деление. Продолжительность культивирования составляет 48—72 ч. 2)Вводят колхицин, разрушающего веретено деления и останавливающего клеточное деление на стадии метафазы. Хромосомы в присутствии колхицина укорачиваются за счет продолжающейся конденсации, и, следовательно, в препарате они легче отделяются одна от другой. 3) Гипотонизация клеток (гипотонический шок). Обычно для 4) Клеточную суспензию фиксируют смесью метанола и уксусной кислоты (3:1), затем суспензию центрифугируют и меняют фиксатор. При нанесении такой суспензии на чистое предметное стекло метафазная пластинка расправляется и в ее пределах располагаются отдельно лежащие хромосомы. При высыхании фиксатора клетки прочно прикрепляются к стеклу. 5) Окраска препаратов. Все методы окраски препаратов можно разделить на три группы: простые, дифференциальные, флюоресцентные. Под дифференциальной окрашиваемостью хромосом понимают их способность к избирательному окрашиванию по длине без прижизненной модификации какими-либо воздействиями. При этом выявляется структурная дифференцировка хромосом по длине, выражающаяся в виде чередования эу- и гетерохроматических районов (темные и светлые полосы). Протяженность этих участков специфична для каждой хромосомы, соответствующего плеча и районаКаждая хромосома имеет свой рисунок исчерченности.
|
