Жат сигналом для транспорта молекулы сквозь мембрану клетки. ЭтиАминокислоты отщепляются, и образуется проинсулин длиной 86 амино- Кислот. В 1980 г. Гилберт с коллегами выделили мРНК инсулина из опухоли β- Клеток поджелудочной железы крысы (в то время не разрешали манипу- лировать генами человека) (рис. 4.3). Полученную ДНК-копию мРНК Встроили в плазмиду pBR 322, в среднюю часть гена пенициллиназы (фермент ______в норме выделяется из клетки), которую транспортировали в Бактерию. Сконструированная плазмида, как оказалось, содержала ин- Формацию о структуре проинсулина, а не препроинсулина. При трансля- Ции мРНК в клетках E. coli синтезировался гибридный белок, содержащий Последовательности пенициллиназы и проинсулина. Гормон из этого бел- Ка выщепляли трипсином. Было доказано, что полученный таким образом Белок влияет на сахарный обмен аналогично гормону поджелудочной же- Лезы. В 1979 г. в США в течение трех месяцев синтезировали гены, коди- Рующие А- и В-цепи инсулина; гены были собраны из 18 и 11 олигонук- Леотидов соответственно. Далее гены были встроены, как и при получении соматостатина, в плазмиду в конце гена β-галактозидазы кишечной палочки. В клетках E. coli также осуществлен синтез проинсулина, а не только Его отдельных цепей. На выделенной матричной мРНК синтезировали ДНК-копию. Синтез проинсулина имеет определенные преимущества, так
|
