Ход работы. 1. Открытие уреазы в арбузных семечках

1. Открытие уреазы в арбузных семечках. 2 арбузных семечка очищают от кожуры и растирают в ступке с 5 мл воды. В опыте затем используют полученную суспензию уреазы.

В две пробирки наливают по 2 мл суспензии уреазы. Затем в одну пробирку приливают 2 мл раствора мочевины, а в другую - 2 мл раствора тиомочевины. В обе пробирки добавляют по 3 - 4 капли раствора фенолфталеина. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 - 15 минут. Наблюдайте, что происходит в пробирках. Запишите уравнение реакции, сделайте вывод.

2. Открытие амилазы в слюне. В две пробирки наливают по 5 мл картофельного клейстера и в одну из них - 5 мл воды, а в другую - 5 мл раствора слюны. Обе пробирки со стеклянными палочками, погруженными в них, одновременно помещают в водяную баню при 40⁰С. Через 1 минуту от каждой смеси отбирают с помощью стеклянной палочки по капле жидкости и смешивают их по отдельности с каплей йода, заранее нанесенной на пластинку. Повторяют взятие проб через 2, 4, 6 и 8 минут. Окраска с йодом проб из пробирки, содержащей слюну, меняется от синей к сине-фиолетовой, буро-красной, красной и, наконец, желтой.

К содержимому обеих пробирок добавляют 1 - 2 мл фелинговой жидкости и смесь нагревают до начала кипения. В пробирке с амилазой слюны образуется красный осадок оксида меди (I) за счет восстановления гидроксида меди (II) образовавшимися мальтозой и низкомолекулярными декстринами. Контрольная проба в тех же условиях не восстанавливает гидроксид меди (II) в оксид меди (I).

3. Открытие пероксидазы (донор: Н₂О₂ - оксидоредуктаза; КФ 1.11.1.7) в картофеле. Картофель натирают на терке. Небольшое его количество, не отжимая, переносят в пробирку, добавляют 1 - 2 мл 1%-ного раствора пирогаллола и 2-3 капли 2%-ного раствора пероксида водорода. При стоянии выпадает желто-бурый осадок пурпурогаллина. Образование пурпурогаллина выражает следующая схема:

Многократное дегидрирование (окисление) пирогаллола и ряда промежуточных продуктов на пути к пурпурогаллину осуществляется с участием пероксидазы, каждый раз передающей снятые атомы водорода на пероксид водорода.

4. Открытие тирозиназы (о-дифенол: О₂ - оксидоредуктаза; КФ 1.10.3.1.) в картофеле. Картофель натирают на терке, отжимают через несколько слоев марли и полученный экстракт немедленно фильтруют на воронке Бюхнера. В пробирку наливают 1 мл экстракта, 4 - 5 капель раствора тирозина, перемешивают и помещают пробирку в водяную баню, нагретую до 40⁰С. Время от времени пробирку встряхивают для лучшего соприкосновения жидкости в пробирке с воздухом. Окраска смеси становится розово-красной, затем бурой и через 1 - 2 часа - черной, так как под действием тирозиназы (монофенолоксидазы) тирозин превращается через окрашенные в красный цвет промежуточные продукты в черный азот, содержащий пигмент - меланин:

Сделайте вывод о классе, подклассе обнаруженных ферментов, субстратах и продуктах реакций. Сравните ферменты, относящиеся к классу гидролаз, по субстратной специфичности.

Работа 6. Свойства ферментов

Оборудование, реактивы: баня водяная, пробирки химические, пипетки на 1, 2 и 5 мл; палочки стеклянные, пластинки стеклянные, бюретки прямые с краном на 50 мл, крахмал (1%-ный, 0, 5%-ный, 1%-ный в хлориде натрия 0, 3%-ном), соляная кислота (10%-ная), йод (0, 3%-ный в йодиде калия 3%-ном), гидроксид натрия (10%-ный), сульфат меди (1%-ный и 3%-ный), тростниковый сахар (2%-ный), препарат дрожжевой сахарозы (1%-ный), фелингова жидкость, дигидрофосфат калия (115 М), гидрофосфат натрия (115 М).

Материалы: слюна разбавленная (см. работу 4), слюна неразбавленная профильтрованная.