У сеголетков; 2—у карпов старшего возраста

 

Взятую кровь используют для посева, приготовления мазков, гематологических и биохими­ческих исследований. Цельную кровь стабилизируют гепарином (1000 ЕД/мл) или лимоннокислым натрием. Сыворотку крови по­лучают общепринятым методом, помещают в стерильные запаян­ные ампулы, а летом консервируют 5%-ным раствором фенола (1—2 капли на 1 мл сыворотки) или тиомерсалом из расчета 10 мг препарата на 10 мл сыворотки. Отобранные жидкие материалы пе­ревозят в термосе со льдом.

 

 

Мазки крови для исследования на кровепаразитов, выведения лейкоцитарной формулы готовят обычным способом, высушивают, нумеруют, завертывают каждый в чистую бумагу и направляют в лабораторию.

Для биохимических исследований берут цельную кровь в пробирки, добавляют к ней лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 2 мг), раствор гепарина (1000 ЕД/мл), наклеивают этикетку и направляют в вете­ринарную лабораторию.

Сыворотку крови для биохимических и серологичес­ких исследований получают следующим образом. Кровь собирают в небольшие пробирки и оставляют при ком­натной температуре для свертывания. Отделившуюся от кровяного сгустка сыворотку отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и отправляют в лабораторию в запаянных ампулах. Сыворотку, предназначенную для серологических исследовваний, консервируют 2%-ной борной кислотой, или 0, 05%-ным фенолом (1—2 капли 5%-ного фенола на 1 мл сыворотки), или тиомерсалом 1: 10000. Цельную кровь и сыворотку транспортируют в термосе со льдом. Материал должен быть доставлен в те­чение суток после взятия.

У крупных рыб извлекают пораженные паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие ткани) и по­мещают в банки с консервирующей жидкостью (70%-ный этиловый спирт или 4%-ный раствор формалина). Паразитические организмы, а также кусочки органов и тканей, где обнаружены паразиты, помещают в пробирки или флаконы с консервирующей жидкостью. При подо­зрении на протозойные болезни из исследуемого матери­ала делают мазок и сразу опускают его на 15— 20 мин. в жидкость Шаудина (50 мл насыщенного раствора сулемы и 25 мл абсолютного спирта). Маленькие кусочки тканей и органов, пораженных паразитическими простейшими, фиксируют в указанной смеси 30—120 мин. Затем стек­ла промывают водой и спиртами возрастающей крепости (50—60—70%) и сохраняют в 70%-ном спирте до ис­следования. Влажные мазки, кусочки органов и тканей с паразитами можно фиксировать также в жидкости Буэна. Фиксация мазков 1—20 мин., кусочков 1—12 час.

Перед консервированием гельминтов тщательно про­мывают в физиологическом растворе и выдерживают в нем до гибели паразитов.

Моногенетических сосальщиков (дактилогирусы, гиродакгилюсы и др.) консервируют в 4%-ном растворе формалина или глицерин-желатине (под покровным сте­клом). Трематод и мелких цестод кладут на предметные стекла, накрывают покровным стеклом и помещают на несколько часов в бактериологическую чашку с 70%-ным спиртом. Затем при помощи кисточки гельминтов пере­кладывают в пробирку с 70%-ным спиртом.

Нематод и личиночные стадии цестод консервируют в жидкости Барбагалло (3%-ный раствор формалина на изотоническом растворе поваренной соли: 30 мл форма­лина, 9 г поваренной соли, 1000 мл дистиллированной воды). Для изготовления постоянных препаратов в канад­ском бальзаме живых нематод лучше консервировать в 70%-ном горячем спирте.

Крупных ленточных гельминтов после умерщвле­ния в физиологическом растворе помещают в 70%-ный спирт.

При консервировании скребней в 70%-ном спирте осторожно выдавливают хоботок из влагалища путем слабого прессования переднего конца скребней под по­кровным стеклом.

Паразитических рачков консервируют в 3%-ном рас­творе формалина и сразу же переносят для хранения в 70%-ный спирт.

Пиявок фиксируют в 4%-ном растворе формалина. При этом у них сохраняется пигментация, что облегчает диагностику вида.

Патологический материал, предназначенный для бак­териологического, паразитологического и других иссле­дований, снабжают этикеткой, где указывают вид и воз­раст рыбы, название органа, из которого взят материал. Если в одну посуду помешают несколько объектов ис­следования, этикетку прикрепляют к каждой рыбе или органу или отдельные кусочки органа завязывают вместе с этикеткой в марлю. Этикетки надписывают простым карандашом и опускают в посуду с материалом таким об­разом, чтобы можно было легко прочесть надпись.

Пробы воды берут в нескольких точках водоема с таким расче­том, чтобы собранные образцы отражали гидрохимическое состоя­ние водоема или загрязненность его отдельного участка (зоны гибе­ли рыб, места впадения ручья или сбросного канала, района интен­сивного поверхностного стока и т. д.), а также в незагрязненном участке (выше по течению). В прудах и других проточных емкостях берут пробы на вытоке воды.

Пробы воды (не менее 2 л) отбирают батометром из поверхност­ных (на глубине 50 см) и придонных слоев в чистые стеклянные или полиэтиленовые бутылки. Перед заполнением посуду ополаскивают 2—3 раза исследуемой водой. В тех случаях, когда время транспортирования пробы составляет более 1 сут, их реко­мендуется фиксировать различными консервантами в зависимости от целей исследования. Зимой воду при транспортировании следует утеплять, чтобы исключить ее замерзание.

Пробы грунта (массой 2 кг) берут также из разных зон водоема дночерпателем Экмана или Кирпичникова. Грунт сушат на воздухе и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешки (рис. 2).

Бентосные организмы (хирономиды, олигохеты, моллюски) в ко­личестве 100—150 г отмывают от ила водой из водоема.

 

 

Рис. 2. Приспособления для взятия проб грунта и планктона: А — скребок; Б — дночерпатель; В — планктонная сетка

 

Планктон собирают планктонной сеткой, фильтруя такое коли­чество воды, которое необходимо для получения около 50 г живой массы планктона.

Отобранные материалы подробно описывают, этикетируют, упаковывают в водонепроницаемую тару, опечатывают и высылают с нарочным в ветеринарную лабораторию или другое учреждение, где имеются возможности для исследования. В сопроводительном письме сообщают данные обследования водоема, указывают пред­полагаемый диагноз и какие лабораторные исследования необходи­мо провести.

 

 

Тема«ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЫБ»

Цель занятия: научиться проводить патоморфологическое исследование рыб.

Задание для практической работы: провести патоморфологическое вскрытие исследуемых рыб и дать заключение.

Патологоанатомические вскрытие имеет важное диагностичес­кое значение. Его применяют при диагностике большинства болез­ней рыб. Вскрытию подвергают свежие трупы (жабры без призна­ков разложения) и живых рыб с клиническими признаками заболе­вания. С целью недопущения разноса заразного начала вскрытие рыб проводят в лаборатории или в другом помещении. Запрещает­ся вскрывать рыб на берегу водоема, скармливать вскрытых рыб со­бакам, кошкам и другим животным. Вскрытых рыб подвергают ути­лизации или закапывают в землю после обеззараживания их хлор­ной известью. Живых рыб перед вскрытием обездвиживают разными способами: усыпляют гипнодилом (5—10 мг/л), хлоралгидратом (2, 4 г/л), разрушают спинной мозг иглой или разрезом позвоночни­ка в области затылка.

Патологоанатомические вскрытие начинают с наружного ос­мотра, обращая внимание на те же изменения внешних покровов, плавников, глаз и других органов, что и при клиническом обследо­вании.

Вскрывают рыб в следующем порядке. Жабры обнажают удале­нием жаберной крышки ножницами. Отмечают степень ослизнения, изменения их окраски и рисунка, наличие кровоизлияний, очагов некроза, цист паразитов и т. д. Ножницами отрезают 2—3 дуги и просматривают их под лупой. Иногда готовят препараты от­дельных лепестков на предметном стекле. Накрыв их покровным стеклом, определяют толщину складок и патологические измене­ния.

Брюшную полость карповых рыб вскрывают двумя разрезами (рис. 1). Ножницами делают надрез брюшной стенки впереди анального отверстия, вставляют тупой конец ножниц в брюшную полость и делают первый разрез вдоль белой линии до области межчелюстного пространства. Вторым полулунным разрезом, проходящим по уровню боковой линии, отсекают брюшную стен­ку, обнажая внутренние органы. Разрезы делают осторожно, что­бы не повредить внутренние органы. Вначале осматривают брюш­ную и сердечную полости, обращая внимание на их содержимое, наличие жидкости (транссудат или экссудат, ее количество, цвет, запах, консистенция) или газа, крупных паразитов, внешний вид внутренних органов. У половозрелых рыб отделяют гонады, отме­чая стадию их зрелости, цвет, кровоизлияния, наличие мертвых икринок (белого цвета) и др. Затем, надрезав кишечник в области псевдодиафрагмы и ануса, извлекают комплекс внутренних орга­нов. Осторожно отделяют желудок, кишечник, печень с желчным пузырем и селезенку.

После отделения плавательного пузыря обнажают почки, лежа­щие вдоль позвоночника в виде ленты темно-красного цвета.

При осмотре плавательного пузыря определяют его форму, тол­щину и прозрачность оболочек, наличие кровоизлияний, пятен гемосидерина, экссудата в полости и т. д.

Состояние паренхиматозных органов (печени, почек, селезен­ки) оценивают по внешним признакам: размеру, консистенции, цвету, кровенаполнению, наличию кровоизлияний, очагов некро­за, рисунку на разрезе и др. Кишечник разрезают вдоль, промывают вводе, просматривают состояние слизистой, учитывают количество гельминтов и др.

При осмотре сердца отмечают его размер, форму, состояние ми­окарда, степень наполнения полостей кровью и ее свертываемости, наличие сгустков, кровоизлияний.

Вскрывают черепную коробку с помощью четырех разрезов, из которых первым поперечным разрезом отсекают крышку у носовых ямок; два боковых разреза проходят от носовых ямок до заты­лочной области, а четвертый — в области затылка. Сначала прово­дят внешний осмотр оболочки головного мозга, затем его извлека­ют и характеризуют состояние вещества мозга, его кровенаполне­ние и др.

При осмотре скелетной мускулатуры обращают внимание на цвет, консистенцию, наличие кровоизлияний, отека, припухлос­тей, цист паразитов, степень прикрепления к костям.

Патологоанатомические изменения сопоставляют с клинически­ми симптомами, выявляют характерный комплекс признаков основ­ного заболевания и сопутствующие осложнения (болезни), а также используют их для определения главной и непосредственной причи­ны гибели рыб. В сомнительных случаях данные вскрытия уточняют с помощью гистологического исследования патматериала. Обработку патматериала проводят общими методами гистологи­ческой техники. По нашему опыту, кусочки органов рыб лучше зали­вать в целлоидин-парафин, а жабры, кожу и плавательный пузырь — в целлоидин. Срезы окрашивают общепринятыми методами.

 

 

 

 

Рис. 3. Вскрытие рыб, контуры разрезов брюшной стенки (из Schaperclausa, 1979): а — карпа и других карповых; б — форели и лососевых; в — угря

Тема «ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЫБ»

Цель занятия: научится проводить полное и неполное паразитологическое исследование рыб.

Задания для практической работы: Провести неполное паразитологическое исследование разных видов рыб.

 

При паразитологические исследованиях клиническому осмотру подвергают не менее 100 рыб из каждого пруда, паразитологическому вскрытию — мальков 25 экз., годовиков 10—15, рыб старших возрастов 5—10 экз.