Студопедия — ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОПЛАЗМОЗОВ, РИККЕТСИОЗОВ И ХЛАМИДИОЗОВ. БИОПРЕПАРАТЫ
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОПЛАЗМОЗОВ, РИККЕТСИОЗОВ И ХЛАМИДИОЗОВ. БИОПРЕПАРАТЫ






Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудите­лей, методами лабораторной диагностики микоплазмозов, риккетсиозов, хламидиозов, а также биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры микоплазм на жидких и плотных питательных средах, готовые фиксированные препара­ты риккетсий (вакцинный штамм), хламидий, красители для окраски по Стемпу, биопрепараты.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Контагиозная перипневмония крупного рогатого скота (поваль­ное воспаление легких). Инфекционная болезнь, протекающая в виде крупозной пневмонии и плеврита с последующим развити­ем анемических некрозов в легких.

Возбудитель контагиозной перипневмонии крупного рогатого скота — М. mycoides subsp. mycoides, род Mycoplasma, семейство Mycoplasmataceae.

Лабораторная диагностика перипневмонии крупного рогатого скота основана на результатах бактериологического и серологи­ческого исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию воз­будителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики ис­пользуют бронхиальную слизь, секрет молочной железы, мочу, а для посмертной (от животных, убитых с диагностической целью — в начале болезни или не позднее 2...3 ч после гибели) — асептично полученный плевральный экссудат, медиастинальные, бронхиаль­ные лимфоузлы, пораженные участки легких. Материал помеща­ют в стерильную посуду и пересылают в лабораторию нарочным в термосе со льдом или в замороженном виде.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Для мико­плазм характерен выраженный полиморфизм, что обусловлено отсутствием ригидной клеточной стенки. Средние размеры микоплазм 0, 1...0, 2 мкм. В ранней экспоненциальной стадии роста форма клеток сферическая или овальная, позднее клетки удли­няются вплоть до нитей (рис. 112). Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по методу Романовского—Гимзы или Грама. Краску Романовского—Гимзы разводят дистиллирован­ной водой в соотношении 1: 10 и препараты окрашивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Клетки микоплазм обнару­живают в форме кокков, дисков, гроздевидных скоплений, тон­ких разветвленных нитей.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для получе­ния культуры возбудителя исследуемый материал высевают на плотные и жидкие питательные среды. Микоплазмы прихотливы к условиям культивирования, поэтому в питательные среды до­бавляют дрожжевой экстракт, сыворотку крови, витамины, угле­воды. Наиболее часто используют жидкую и плотную среды Мар­тена, представляющие собой кислотный гидролизат фарша из свежих свиных желудков. Нередко применяют среду Эдварда, со­стоящую из отвара сердечной мышцы, воды, пептона, после стерилизации добавляют 20 % инактивированной сыворотки крови лошади или крупного рогатого скота и 10 % дрожжевого экстракта. В питательные среды для первичной изоляции добав­ляют ингибиторы, тормозящие рост сопутствующей бактериаль­ной микрофлоры: пенициллин, подавляющий рост грамположительных бактерий, но не действующий на микоплазмы; ацетат таллия, ингибирующий грамотрицательные бактерии. Посевы инкубируют при 37...38 °С.

 

Рис. 112. Микроструктура разных видов микоплазм (х1350):

а — шаровидные тела различных размеров и разной оптической плотности;

б— гигантские вакуолизированные тела;

в — мелкие сферические формы М. hominisw не имеющие определенной формы тела;

г — зернистые формы;

д — ветвистые нитевидные формы и стрептококкоподобные формы

 

В жидких питательных средах рост возбудителя в виде опалесценции различной интенсивности появляется на 2...3-й сутки. На плотных средах возбудитель формирует круглые с ровными краями колонии, напоминающие яичницу-глазунью, центр коло­нии в виде сосочка оптически более плотный, врастает в толщу среды (рис.113). На кровяном агаре колонии окружены зоной альфа-гемолиза.

У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Возбудитель ферментирует глюкозу, мальтозу, маннозу, галакто­зу, декстрин, образует сероводород, редуцирует хлорид тетразола, мочевину не расщепляет.

 

 

Для идентификации микоплазм предложена реакция иммунофлуоресценции. На поверхность агаровой среды в чашках засева­ют микоплазмы, чашки выдерживают в термостате 3...5 дней. Затем в них вносят 2 мл ФСБР на 30 мин, сливают и наносят на агар 2 мл меченой ФИТЦ-антисыворотки в рабочем титре (при непрямом методе применяют немеченую сыворотку), выдержи­вают при 37 °С 30 мин, сливают и трижды промывают буфером, после чего просматривают колонии под люминесцентным мик­роскопом. Колонии, окрашенные гомологичной сывороткой, ярко флуоресцируют. Для изучения антигенной структуры микоплазм применяют реакцию диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП). При постановке реакции используют ра­створимый антиген, который получают путем многократного за­мораживания и оттаивания микоплазм (до 20 раз), воздействия ультразвуком (при 20 кГц — 3 мин) или детергентами (твин-20, додецилсульфат натрия).

Биопроба. Заражают двух-трех здоровых телят 6...8-месячного возраста подкожно в область подгрудка, интратрахеально или интраплеврально экссудатом от больных животных или культу­рой. За животными ведут наблюдение в течение 30 дней. В поло­жительных случаях телята заболевают на 2...7-й день, температу­ра поднимается до 40...41 °С, развивается общая интоксикация организма; при подкожном методе заражения в месте введения образуется флегмона, в процесс вовлекаются регионарные лим­фоузлы. Гибель обычно наступает через 17 сут.

Серологическая диагностика включает в себя постановку РСК, РИГА, проведение ИФА. Для прижизненного выявления больных применяют РСК, которую ставят по общепринятой методике. Антиген для реакции готовят на биофабри­ках из плевральной жидкости от экспериментально зараженных животных; выпускают и культуральные антигены. В качестве диагностического теста используют реакцию непрямой гемагглютинации, чувствительность которой в острой фазе болезни выше, чем чувствительность РСК. Для определения специфических ан­тител к микоплазмам в сыворотке крови животных применяют метод иммуноферментного анализа.

Инфекционная плевропневмония коз. Это контагиозное заболе­вание коз всех пород и возрастов. Характеризуется воспалением легких, плевры, серозным воспалением междолевой серозной ткани, скоплением экссудата в плевральной полости.

Возбудитель инфекционной плевропневмонии коз — М. mycoides subsp. capri, род Mycoplasma, семейство Mycoplasmataceae.

Лабораторная диагностика инфекционной плевропневмонии коз основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют серд­це, легкие, бронхиальные и средостенные лимфатические узлы, экссудат грудной полости, печень, селезенку павших или вынуж­денно убитых животных. Экссудат из грудной полости набирают стерильным шприцем (2...5 мл). Для исследования пригоден све­жий материал, который пересылают в лабораторию в стерильной посуде в термосе со льдом или в замороженном состоянии. Замо­роженный материал хранят не более 10сут.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки фиксируют этанолом 15...20 мин, окрашивают при комнат­ной температуре в течение 24 ч краской Романовского—Гимзы, разведенной дистиллированной водой в соотношении 1: 10, пос­ле чего промывают и микроскопируют. В положительных случаях обнаруживают мелкие полиморфные образования кокковидной, кольцевидной, нитевидной форм розового цвета. В мазках, окра­шенных по Граму, наблюдают грамотрицательно окрашенную аморфную массу.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для выделе­ния культуры возбудителя инфекционной плевропневмонии коз применяют жидкие питательные среды Мартена, Эдварда и триптический перевар сердца крупного рогатого скота. Посевы помещают в термостат при 37...38 º С на 5...7 дней.

На жидких средах рост возбудителя проявляется незначитель­ным помутнением или опалесценцией, на агаре — мелкими ро­синчатыми колониями. Под малым увеличением микроскопа у них обнаруживают темный, врастающий в агар центр и светлую периферийную зону. Колонии напоминают по внешнему виду яичницу-глазунью.

Возбудитель ферментирует глюкозу, маннозу, сахарозу, вызы­вает разжижение свернутой сыворотки и гидролиз желатины, фосфатазная активность не выражена.

Биопроба. Для подтверждения диагноза инфекционной плев­ропневмонии коз ставят биопробу на двух 6... 12-месячных козля­тах. Для заражения используют 3...4-суточную свежевыделенную культуру микоплазм или суспензию из исследуемого материала на физиологическом растворе

(1: 10). Козлят заражают внутри-плеврально по 10 мл. В положительных случаях у животных через 2... 15 дней отмечают повышение температуры тела, одышку. Ги­бель наступает через 1...3 нед. Из пораженных легких и плевраль­ного экссудата выделяют культуру возбудителя.

Инфекционная агалактия овец и коз. Контагиозное заболева­ние. Характеризуется прекращением лактации, поражением мо­лочной железы, глаз и суставов. У беременных животных прояв­ляется абортами. Гибель животных при остром течении болезни наступает через 5...8 дней.

Возбудитель — микоплазма М. agalactiae, род Mycoplasma.

Лабораторная диагностика инфекционной агалактии мелкого рогатого скота основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии и биопробы. При отрицательных результатах биопробы выделяют чистую культуру посевом на пи­тательные среды и идентифицируют возбудитель по культураль­но-морфологическим и ферментативным свойствам.

Материал для исследования. При заболевании вымени в лабо­раторию направляют молоко, при поражении суставов — синови­альную жидкость; от павших животных — паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженную часть вымени, пора­женный глаз, синовиальную жидкость.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и по Романовскому—Гимзе. В пре­паратах, окрашенных по Романовскому—Гимзе, в положительных случаях выявляют мелкие полиморфные образования розо­вого цвета кокковидной, кольцевидной или нитевидной формы.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель растет на агаре и в бульоне Мартена с добавлением 15...20 % сы­воротки лошади или крупного рогатого скота; на средах Эдварда и Хоттингера с добавлением сыворотки и 1...2% лактозы, на триптическом переваре сердца крупного рогатого скота.

На жидких средах на 5...7-й день появляется слабая опалес­ценция или незначительное помутнение. На плотных средах об­разуются мелкие колонии, напоминающие яичницу-глазунью (просматривают с помощью линзы). При отсутствии роста про­водят не менее 5 последовательных пассажей с интервалом 5...7 дней. Отсутствие роста в 5...7-м пассажах указывает, что исследу­емый материал не содержит возбудитель инфекционной агалактии мелкого рогатого скота. Микоплазмы также выращивают в клеточных культурах, используя клетки почки эмбриона овцы, куриные фибробласты.

М. agalactiae не ферментирует глюкозу и маннозу, не гидролизует аргинин и желатину, не разжижает свернутую сыворотку, обладает фосфатазной активностью.

Биопроба. Ставят на кроликах массой 2, 5...3 кг или на живот­ном того вида (овцы или козы 1...2-месячного возраста), от кото­рого выделена культура. Для заражения используют суспензию исследуемого материала, обработанную ингибиторами (ацетат таллия и пенициллин), или чистую культуру микоплазм. Кроли­ков заражают введением в переднюю камеру глаза 0, 1...0, 2 мл ма­териала с предварительным удалением тонкой иглой из камеры 0, 1...0, 05 мл жидкости. В другой глаз для контроля таким же об­разом вводят стерильный бульон. Через 5...12 дней в положитель­ном случае у подопытных кроликов развивается кератит. Наблю­дение ведут в течение 30 дней. При наличии кератита биопробу считают положительной, выделение культуры необязательно.

Овец и коз заражают, вводя материал в молочный канал, или подкожно по 5 мл, или в сустав по 2 мл. В положительных случа­ях через 2...30 дня после введения материала у животных развивается клиническая картина инфекционной агалактии мелкого рогатого скота.

Срок исследования без постановки биопробы 30 дней, с био­пробой и последующим выделением возбудителя — до 90 дней.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах исследования сывороток в РСК.

Респираторный микоплазмоз птиц. Это контагиозная болезнь кур и индеек. Характеризуется поражением органов дыхания. У птиц развивается катаральный ринит с последующей одышкой, каш­лем; катаральный ринит переходит в серозно-фибринозный, у некоторых птиц возникают конъюнктивит, синусит, припухлость в области межчелюстного пространства. Птица становится мало­подвижной, оперение взъерошено, гребень бледный, снижаются приросты массы у молодняка и яйценоскость у несушек. У индеек типичный признак — воспаление подглазничных синусов. У взрослой птицы заболевание может протекать бессимптомно.

Возбудитель — М. gallinarum, род Mycoplasma.

Лабораторная диагностика респираторного микоплазмоза птиц основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и патогенным свойствам.

Материал для исследования. От свежих трупов птиц берут со-скобы со слизистых оболочек гортани, трахеи, головной мозг, а также кусочки легкого и стенки воздухоносных мешков. При от­сутствии патологических изменений у взрослой птицы на иссле­дование направляют легкие, желточный мешок, трахею эмбрио­нов последних дней инкубации и 1...2-суточных цыплят.

Микроскопия препаратов из исходного материала. В мазках, ок­рашенных по методу Романовского—Гимзы, микоплазмы обна­руживают в виде мельчайших полиморфных коккобактерий фио­летового или голубого цвета, беспорядочно расположенных по всему полю зрения (рис. 114).

 

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Посевы из исследуемого материала делают на среды Эдварда, Хоттингера, Мартена.

Рост возбудителя микоплазмоза на жидких средах характери­зуется едва заметной опалесценцией или нежным помутнением среды. На плотных средах микоплазмы образуют круглые мелкие бесцветные колонии с гладкой или пуговчатой поверхностью, хо­рошо различимые при малом увеличении микроскопа. Для акти­визации роста микоплазм проводят не менее 5 пассажей с интер­валами между посевами в 5 дней. Посевы инкубируют при темпе­ратуре 37...38 °С.

Возбудитель микоплазмоза птиц утилизирует глюкозу, маннозу, мальтозу, образует аммиак, редко сероводород, индол. Не гидролизует желатину и аргинин, не обладает фосфатазной ак­тивностью, агглютинирует эритроциты птиц.

Биопроба. Для определения патогенности выделенных мико­плазм куриные или индюшиные

9-дневные эмбрионы заражают в хорионаллантоисную полость культурой на жидкой питательной среде по 0, 2 мл. Используют не менее 15 эмбрионов. Яйца инкубируют при 38...40°С и ежедневно просматривают в овоско­пе. При вскрытии эмбрионов, погибших через 48 ч и позднее, от­мечают дегенеративные изменения: артриты, отеки и кровоизли­яния на коже головы, теле, лапках, застойные явления в парен­химатозных органах, пневмонию. Наличие возбудителя опреде­ляют при посевах на специальные питательные среды. Биопробу считают положительной при гибели не менее 50 % зараженных эмбрионов и выживании контрольных.

Серологическая диагностика включает в себя постановку следующих реакций: капельной агглютинации с цельной кровью или сывороткой крови; торможения гемагглютинации (РТГА), ингибирования роста, РСК, а также применяют метод иммунофлуоресценции. Серологические методы диагнос­тики микоплазмоза птиц еще недостаточно совершенны.

Биопрепараты. Антиген для диагностики респираторного ми­коплазмоза птиц (лиофилизированный) готовят из штамма М. gallisepticum S6. Антиген применяют в сывороточно-капельной реакции агглютинации на стекле для постановки эпизоотическо­го диагноза на респираторный микоплазмоз птиц.

Риккетсиозы. Риккетсии относят к группе грамотрицательных бактерий — облигатных внутриклеточных паразитов. В зависимости от способа размножения их подразделяют на два порядка: Rickettsiales и Chlamydiales. В порядок Rickettsiales вклю­чено 3 семейства: Rickettsiaceae, Bartonellaceae и Anaplasmataceae.

В семейство Rickettsiaceae включены мелкие палочковидные и диплококковидные внутриклеточные микроорганизмы, чаще обитающие в тканях членистоногих, способные вызвать заболе­вание у животных и человека.

По морфологии различают четыре основных типа риккетсии: кокковидные (диаметр 0, 3... 1 мкм); палочковидные биполярные (1...1, 5 мкм); удлиненные биполярные, часто изогнутые (З...4мкм); нитевидные полизернистые (10...40 мкм) (рис.115). Кокковидные формы окрашиваются по Романовскому—Гимзе и Цилю—Нильсену в красный цвет, палочковидные и нитевид­ные — в красно-голубой (зерна красные, цитоплазма между ними голубая); по Здродовскому — в красный. Метод Здродовского — облегченная модификация способа Циля—Нильсена (карболо­вый фуксин Циля разводят в следующем соотношении: 10... 15 капель на 10 мл дважды дистиллированной воды или фосфатного буфера рН 7, 4). Тонкослойный препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем, окрашивают разведенным фуксином в течение 5 мин. Затем промывают водой, быстро (1...3 с) обраба­тывают кислотой (0, 5%-й раствор лимонной, 0, 15%-й раствор ук­сусной и др.), промывают водой и докрашивают 0, 5%-м водным раствором метиленовой сини 10 с, промывают, подсушивают фильтровальной бумагой.

Риккетсии размножаются делением. Вне организма развива­ются только в культуре растущей и переживающей ткани, на обо­лочках куриных эмбрионов.

Ку-риккетсиоз (Ку-лихорадка) (от англ. query — сомнения, со­мневаться). Природно-очаговая зооантропонозная болезнь до­машних, промысловых и диких млекопитающих животных и птиц. Протекает чаще бессимптомно, но может встречаться так­же в острой и хронической формах. Клинические признаки бо­лезни: повышение температуры, ринит, пневмония, конъюнкти­вит, поражение половых органов, маститы, у быков — орхиты, рождение нежизнеспособного потомства, аборты.

Возбудитель Ку-риккетсиоза — Coxiella burneti, род Coxiella, семейство Rickettsiaceae.

Лабораторная диагностика Ку-риккетсиоза основана на ре­зультатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры методом биопробы и идентификацию возбудителя по морфологическим и серологическим свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют кровь из вены; клещей, собранных с животных; выделения из матки и влагалища; плаценты от абор­тировавших животных; от павших и убитых с диагностической целью животных берут участки пораженного легкого, головного мозга, селезенки, паренхимы вымени, регионарные лимфоузлы.

Микроскопия препаратов из исходного материала. При микро­скопии мазков, окрашенных по методам Романовского—Гимзы и Здродовского, можно обнаружить коккоподобные (диаметр 0, 2...0, 5 мкм), палочковидные (2 мкм) и нитевидные (10...12 мкм) формы, расположенные одиночно, попарно и короткими цепоч­ками, которые могут находиться внутри клеток тканей и вне кле­ток. По методу Здродовского риккетсии будут красного цвета на голубом фоне, по Романовскому—Гимзе кокковидные формы красные; палочковидные и нитевидные красно-голубые (рис. 116).

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Из исходно­го материала готовят суспензию на физиологическом растворе (1: 10), в которую добавляют антибиотики и вводят 0, 2...0, 25 мл в желточный мешок 5...6-суточных куриных эмбрионов. Проводят 4...6 пассажей. При положительном результате отмечают отстава­ние в развитии и гибель зараженных эмбрионов. Риккетсии об­наруживают микроскопически в мазках, приготовленных из обо­лочек желточного мешка. Иногда используют культуры клеток куриных и мышиных фибробластов.

Для обнаружения и идентификации возбудителя используют реакцию иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа.

Биопроба. Для выделения риккетсии Бернета и подтверждения их патогенности заражают двух молодых морских свинок (массой 250...300 г) или четырех молодых белых мышей исходным мате­риалом (суспензия на физиологическом растворе 1: 5, обрабо­танная антибиотиком) или эмбриональной культурой. Материал вводят внутрибрюшинно свинкам по 3...5 мл и мышам по 0, 5... 1 мл. Для получения более четких результатов проводят от 3 до 5 «слепых» пассажей. В последних пассажах у морских свинок через 3...10 дней после заражения появляется лихорадка, и жи­вотные через 3...12 дней погибают, при вскрытии у них отмечают увеличение печени, селезенки и лимфоузлов.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах РСК, в которой исследуют сыворотки крови больных животных. При получении положительных результатов (на 3 и 4 креста) реакцию повторяют для подтверждения полученных дан­ных.

Эрлихиоз собак. Это трансмиссивная лихорадочная болезнь. Характеризуется истощением, панцитопенией, геморрагиями на коже и слизистых оболочках. Возбудитель — Е. canis, род Erlichia, семейство Rickettsiaceae. Наиболее восприимчивы к эрлихиозу собак немецкая овчарка и гончая, болеют лисы, макаки-резус, койоты. Лабораторные животные (мыши, крысы, морские свин­ки, хомячки) и куриные эмбрионы нечувствительны. Морфоге­нез возбудителя складывается из превращения элементарного тельца овальной или кокковидной формы (0, 4 мкм) в инициаль­ное тельце неопределенной формы размером 1...2мкм с последу­ющей трансформацией в морулу (образования похожи на туто­вую ягоду 2...4 мкм). Цикл развития завершается распадом морулы на элементарные тельца.

Лабораторная диагностика эрлихиоза собак заключается в све­товой микроскопии мазков крови, окрашенных по Романовско­му—Гимзе, для определения морул возбудителя в лейкоцитах со­бак. Морулы обнаруживают, начиная с третьей недели болезни на протяжении 2...5 лет. Все формы Е. canis окрашиваются по Гимзе в голубой цвет, по Романовскому — в розовый.

Как метод серологической диагностики применяют непрямую реакцию иммунофлуоресценции с использованием зараженной культуры моноцитов в качестве антигена.

Эрлихиоз крупного и мелкого рогатого скота. Это трансмиссив­ная лихорадочная болезнь. У овец развиваются пневмонии, абор­ты, у баранов — бесплодие, у коров отмечают лихорадку, вялость, снижение удоев.

Возбудитель — Erlichia phagocytophila.

Лабораторная диагностика эрлихиоза крупного и мелкого рога­того скота основана на микроскопическом изучении окрашен­ных препаратов из материала. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя аналогичны Е. canis.

Гидроперикардит (коудриоз). Это заболевание жвачных и все­ядных животных. Характеризуется лихорадкой, геморрагическим диатезом с образованием серозного экссудата в грудной и брюш­ной полостях.

Возбудитель — Cowdria ruminantum, род Cowdria, семейство Rickettsiaceae.

Лабораторная диагностика гидроперикардита основана на мик­роскопическом изучении окрашенных препаратов и на результа­тах биопробы.

Материал для исследования. В лабораторию направляют кровь от больного животного, костный мозг, селезенку.

Микроскопия препаратов из исходного материала. В положи­тельных случаях в окрашенных препаратах из материала обнару­живают кокковидные, эллипсоидные (0, 2...0, 5 мкм) или палочковидные клетки размером (0, 2...0, 3) х (0, 4...0, 5) мкм, расположен­ные в вакуолях цитоплазмы клеток эндотелия, где образуют спе­цифические компактные колонии. По Граму окрашивается отрицательно, по Гимзе — в темно-синий цвет. Особенно важное диагностическое значение имеет обнаружение возбудителя в эн­дотелии капилляров коры головного мозга.

Биопроба. Заражают естественно-восприимчивых животных путем внутривенного введения крови больного.

Хламидиозы. Возбудителей хламидиозов относят к порядку Chlamydiales, семейству Chlamydiaceae, включающему в себя один род Chlamydia с двумя видами: С. trachomatis и С. psittaci. Это грамотрицательные неподвижные кокковидные облигатные паразиты с выраженным полиморфизмом. С. trachomatis патоге­нен для человека и мышей, С. psittaci вызывает ряд инфекцион­ных заболеваний у животных и птиц. Развитие патологического процесса зависит от места локализации возбудителя у живот­ных. Хламидии чаще поражают респираторные органы и ки­шечный тракт у птиц, ягнят, телят, поросят, гениталии у круп­ного и мелкого рогатого скота, синовиальные ткани телят, по­росят, ягнят, жеребят, слизистые оболочки глаз крупного рога­того скота, свиней, овец, кошек и др. Клинические проявления хламидиоза разнообразны: диарея, пневмонии, конъюнктиви­ты, полиартриты, перикардиты, энцефалиты, аборты, мертво-рождение, бесплодие, вагиниты, эндометриты и т. д. К С. psittaci восприимчивы дикие и домашние птицы — свыше 130 видов. Из домашних птиц чаще болеют утки, индейки, гуси, реже — куры, голуби (орнитоз).

Лабораторная диагностика хламидиозов основана на результа­тах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чи­стой культуры методом биопробы и идентификацию возбудителя по морфологическим свойствам.

Материал для исследования. От павших или вынужденно уби­тых животных в лабораторию направляют кусочки паренхима­тозных органов; при аборте — плод целиком или паренхиматоз­ные органы и сычуг; для прижизненной диагностики — пробы эякулята или замороженной спермы, кровь для серологических исследований. Материал берут в течение двух часов после гибе­ли, убоя или аборта, помещают в термос со льдом.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Для световой микроскопии мазки из материала окрашивают по Романовско­му—Гимзе (хламидии в зависимости от стадии развития окраше­ны в красно- или сине-фиолетовый цвет), Стемпу. При окраске по Стемпу препараты фиксируют нагреванием, окрашивают фук­сином Циля, разведенным дистиллированной водой в соотноше­нии 1: 5 (рН 7, 4) 15 мин, промывают дистиллированной водой, обрабатывают 0, 05%-м раствором серной кислоты 1 мин, вновь промывают дистиллированной водой, докрашивают 1%-м вод­ным раствором малахитовой зелени 30 с, после чего промывают водой и микроскопируют: хламидии ярко-красные на зеленова­том фоне клеток. При иммунофлуоресцентном выявлении хла­мидии в материале используют прямой и непрямой варианты. В зависимости от этапа морфогенеза размеры хламидий варьируют от 0, 2...0, 4 до 0, 6... 1, 5 мкм.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для выделе­ния хламидий используют 6...7-дневные куриные эмбрионы или лабораторных животных. Из материала готовят суспензию на физиологическом растворе (1: 10), центрифугируют, надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками (100ЕД/мл пени­циллина, 500ЕД/мл стрептомицина) при 4 º С 24 ч, одновременно контролируя на стерильность. Затем исследуемый материал в объеме 0, 2 мл вводят в желточный мешок. Эмбрионы инкубиру­ют в термостате при 37 °С и относительной влажности 75 %. Эмбрионы, погибшие на 4... 12-й день, вскрывают, аллантоисную жидкость контролируют на бактериальную контаминацию. Из желточных мешков готовят мазки-отпечатки и исследуют на на­личие хламидий методом микроскопии. При отсутствии специ­фической гибели эмбрионы на 12-е сутки вскрывают и проводят второй пассаж, при необходимости — и третий.

Биопроба. Для выделения хламидий на лабораторных живот­ных заражают пять белых мышей или две-три морские свинки. Материал, подготовленный ранее описанным способом, вводят внутрибрюшинно или интраторакально мышам по 0, 3 мл, морс­ким свинкам — по 0, 5 мл. Наблюдение ведут в течение 10сут. В положительных случаях животные погибают на 7... 10-е сутки. При вскрытии обнаруживают большое количество серозно-фибринозного экссудата в грудной и брюшной полостях, очаговую пневмонию, кровоизлияния под легочной плеврой. При отсут­ствии гибели животных проводят слепые пассажи. Обнаружение и идентификацию хламидий проводят, как описано ранее.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах РСК или РДСК. Сыворотки исследуют в разведении 1: 5 и 1: 10, положительным считают задержку гемолиза на два — четы­ре креста в разведении 1: 10, сомнительным — на один крест в разведении 1: 10 и на один — четыре креста в разведении 1: 5.

Биопрепараты. Инактивированная эмульгированная вакцина против хламидиозного аборта овец.

Набор антигенов и сывороток для серологической диагности­ки хламидиозов сельскохозяйственных животных.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Описать характер роста микоплазм на плотных и жидких питательных средах.

2. Промикроскопировать окрашенные препараты из культур микоплазм.

3. Окрасить и промикроскопировать мазки-отпечатки, содержащие хламидии.

4. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы

1. Каковы морфологические, тинкториальные и культуральные свойства микоплазм?

2. В чем заключается бактериологическая диагностика микоплазмозов?

3. На чем основана серологическая диагностика микоплазмозов?

4. Как классифицируют хламидии?

5. Какие методы применяют для лабораторной диагностики риккетсиозов и
хламидиозов?

 







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 4228. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Решение Постоянные издержки (FC) не зависят от изменения объёма производства, существуют постоянно...

ТРАНСПОРТНАЯ ИММОБИЛИЗАЦИЯ   Под транспортной иммобилизацией понимают мероприятия, направленные на обеспечение покоя в поврежденном участке тела и близлежащих к нему суставах на период перевозки пострадавшего в лечебное учреждение...

Кишечный шов (Ламбера, Альберта, Шмидена, Матешука) Кишечный шов– это способ соединения кишечной стенки. В основе кишечного шва лежит принцип футлярного строения кишечной стенки...

Характерные черты немецкой классической философии 1. Особое понимание роли философии в истории человечества, в развитии мировой культуры. Классические немецкие философы полагали, что философия призвана быть критической совестью культуры, «душой» культуры. 2. Исследовались не только человеческая...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит...

Кран машиниста усл. № 394 – назначение и устройство Кран машиниста условный номер 394 предназначен для управления тормозами поезда...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.012 сек.) русская версия | украинская версия