Студопедия — СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 7 страница
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 7 страница






С целью видовой идентификации исследуют ферментативные свойства. V. pseudotuberculosis образует уреазу, расщепляет рамнозу, мелибиозу, не обладает лизин-орнитиндекарбоксилазами, не гидролизует желатин, не образует индол, не утилизирует цитрат Симмонса и не дает реакцию Фогес—Проскауера при 25 º С.

Для серовариантной идентификации выделенных культур воз­будителя применяют серологические реакции. Y. pseudo­tuberculosis подразделяют на шесть серологических групп (I...VI) по термостабильным антигенам и пять вариантов — по жгутико­вым антигенам.

Биопроба. Тканевым гомогенатом или выделенной культурой заражают подкожно или внутрибрюшинно белых мышей, морс­ких свинок, кроликов. Мыши погибают через 2...4 дня, морские свинки и кролики — через 2...35 дней в зависимости от вирулен­тности культуры. Из органов павших подопытных животных де­лают посевы на питательные среды для выделения культуры возбудителя, готовят и микроскопируют окрашенные мазки и отпечатки.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Описать характер роста Y. septis и Y. pseudotuberculosis на МПА и в МПБ.

2. Промикроскопировать мазки из культур Y. pestis и Y. pseudo­tuberculosis.

3. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы

1. Каковы основные морфологические признаки чумных бактерий?

2. Какие тесты используют для дифференциации возбудителей чумы от бактерий псевдотуберкулеза?

3. В чем заключаются особенности биопробы при чуме?

4. При какой температуре можно культивировать возбудителей чумы и псевдотуберкулеза?

5. Какие животные наиболее восприимчивы к псевдотуберкулезу?

 

Тема 32

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА, ТУЛЯРЕМИИ.

БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятий. Ознакомить студентов со свойствами возбуди­телей и лабораторной диагностикой бруцеллеза и туляремии, а также биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Единый бруцеллезный антиген, антиген для кольцевой реакции с молоком, роз-бенгал антиген, позитивная бруцеллезная сыворотка, негативная сыворотка, фи­зиологический раствор, содержащий 0, 5 % фенола, серологичес­кие пробирки, штативы, мерные пипетки, красители для окраски по Граму, Козловскому (Стампу), пробы молока.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Бруцеллез. Это хроническая инфекционная болезнь, проявляю­щаяся абортами, задержанием последа, эндометритами и рас­стройством воспроизводительной функции животных. Восприимчивы многие виды сельскохозяйственных животных и человек.

Возбудитель — бактерии рода Brucella: В. melitensis (три биова­ра) — основной хозяин овцы и козы; В. abortus (девять биоваров) — основной хозяин крупный рогатый скот; В. suis (четыре биовара) — основной хозяин свиньи, а также северные олени и зайцы; В. ovis — основной хозяин овцы; В. neotomae — основной хозяин древесные крысы; В. canis — основной хозяин собаки.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологических и серологических исследований.

Бактериологическое исследование в ос­новном применяют при первичной постановке диагноза на бру­целлез в ранее благополучных хозяйствах.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пробы крови (сыворотки) для серологических исследований, абортиро­ванный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое живот­ных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пора­женные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло и др.), объекты внешней среды.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки из материала окрашивают по Граму и одним из специальных мето­дов (по Козловскому, Стампу и др.). Бруцеллы — грамотрицательные короткие палочковидные или кокковидные бактерии размером 0, 5... 1, 5 мкм, без жгутиков, спор не образуют, форми­руют микрокапсулу. В окрашенном препарате располагаются одиночно, реже парами, короткими цепочками.

Окраска по методу Козловского: препарат окрашивают 2%-м водным раствором сафранина 2 мин, промывают водой, докра­шивают 1%-м водным раствором малахитовой зелени 1 мин, про­мывают водой. Микроскопическая картина: бруцеллы красные, остальные бактерии зеленые.

Окраска по методу Стампа: фиксированный на пламени мазок окрашивают фуксином Пфейффера 10 мин, промывают водой, обрабатывают 0, 5%-м водным раствором уксусной кислоты 30 с, затем препарат промывают водой и докрашивают 1%-м водным раствором метиленового синего 20...30 с. Микроскопическая кар­тина: бруцеллы красные, другие бактерии синие.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Бруцеллы — аэробы, микроаэрофилы, температурный оптимум 37...38 °С, рН 6, 8...7, 2. Материал засевают на специальные питательные среды: мясо-пептонный агар и бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар и бульон, картофельный агар, эритрит-агар, сывороточ-но-декстрозный агар и др. Печеночные среды включают в себя отвар печени. Картофельный агар готовят на отваре картофеля, глюкозу и глицерин добавляют в среды соответственно в количе­стве 1 % и 2...3 %. Эритрит-агар содержит вещество (эритрит), стимулирующее рост бруцелл. В состав сывороточно-декстрозно-го агара помимо обычной питательной основы входит 10 % сыво­ротки крови и 1 % декстрозы.

Некоторые виды бруцелл растут при повышенном содержа­нии в атмосфере оксида углерода (IV) (В. abortus, В. ovis). Так как неизвестно, каким видом бруцелл заражен исследуемый матери­ал, половину посевов инкубируют в обычной атмосфере, дру­гую — в атмосфере, содержащей 10...15% оксида углерода (IV).

Посевы культивируют в течение ЗО сут, периодически просмат­ривая. Рост бруцелл чаще появляется на 7... 10-е сутки, иногда позже.

 
 

На плотных средах возбудитель формирует мелкие, прозрач­ные, круглые, с ровными краями, гладкой поверхностью, с голу­боватым оттенком колонии (S-форма), возможно появление шероховатых колоний (R-форма) (рис. 99, 100). По мере старения колонии мутнеют и за счет пигментообразования могут темнеть. На жидких питательных средах рост бруцелл проявляется равно­мерным помутнением среды, образованием голубоватого присте­ночного кольца, позднее формируется небольшой осадок.

У выросших культур изучают морфологию и тинкториальные свойства клеток в мазках, окрашенных по методам Грама, Коз­ловского.

Культуру идентифицируют серологически в РА на стекле с по­зитивной бруцеллезной сывороткой, разведенной в соотноше­нии 1: 50. Виды В. melitensis, В. abortus, В. suis антигенно род­ственны, поэтому их клетки аг­глютинируют в стандартной бру­целлезной сыворотке. Для иден­тификации В. ovis кроликов им­мунизируют выделенной куль­турой и затем кроличью сыворотку исследуют в РДСК со стандартным овисным антиге­ном (В. ovis) — должна быть четкая положительная реакция, если это культура В. ovis.

 

Рис. 100. Бруцеллы в чистой культуре

 

 

Для определения видовой принадлежности у выделенных культур бруцелл изучают потребность в оксиде углерода (IV), об­разование сероводорода, способность к росту на питательных средах с тионином и фуксином, чувствительность к бруцеллез­ным бактериофагам, ферментацию аминокислот, углеводов, а также агглютинабильность с моноспецифическими сыворотками против отдельных клеточных антигенов бруцелл (А, М, R). Неко­торые из дифференцирующих характеристик приведены в табли­це 30.

Биопроба. Это эффективный метод обнаружения бруцелл в исследуемом материале, особенно загрязненном. Морских сви­нок перед заражением исследуют в РА, в опыт берут животных, в сыворотке которых не обнаружены антитела к возбудителю. Тканевый материал в виде суспензии (1: 10) в объеме 1 мл вво­дят подкожно. О результате биопробы судят по данным иссле­дования сыворотки крови на 15, 25 и 40-й день после заражения (животные не погибают). Появление антител в титре 1: 10 и бо­лее оценивают как положительный результат. Реагирующих жи­вотных убивают и подвергают бактериологическому исследова­нию.

Серологическая диагностика: при массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз-бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР).

Пробирочная РА. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей, собак, пушных зверей, верблюдов разводят физиологическим раствором, содержащим 0, 5 % фенола; сыворотки крови овец коз, буйволов разводят 5%-м, а сыворотки оленей — 10%-м фенолизированным физиологичес­ким раствором. Сыворотки крови крупного рогатого скота, ло­шадей, верблюдов исследуют в разведениях от 1: 50 до 1: 400; овец, коз, свиней, буйволов, оленей, собак — в разведениях 1: 25 и более; пушных зверей — 1: 10 и более. При массовых исследо­ваниях сыворотки крови исследуют в двух первых разведениях. После приготовления разведений сыворотки в объеме 0, 5 мл в каждую пробу добавляют 0, 5 мл разведенного до концентрации клеток 5*108/мл единого бруцеллезного антигена (при этом раз­ведения удваиваются), компоненты перемешивают встряхивани­ем, штатив с пробирками помещают в термостат при 37...38 º С на 18...20 ч, затем оставляют на несколько часов при комнатной температуре. Результат учитывают по общепринятой системе (см. тему 15). В качестве контролей параллельно исследуют заведомо положительную и отрицательную сыворотки.

РА при бруцеллезе крупного рогатого скота, лошадей и верб­людов считают положительной, если титр составляет 1: 100 и бо­лее (1: 50 — сомнительный результат), у овец, коз, оленей, буй­волов и собак — 1: 50 (1: 25 — сомнительный результат). При по­лучении сомнительных реакций сыворотки крови от этих живот­ных исследуют повторно через три-четыре неделим. В ходе массовых серологических исследований практикуют исследова­ние сывороток в двух первых разведениях. При этом необходимо учитывать, что некоторые сыворотки, не агглютинирующие ан­тиген в малых разведениях, в более высоких разведениях дают положительный результат — этот так называемый феномен «про-зоны», который может служить причиной ложных отрицатель­ных результатов.

В разных странах для пробирочной РА готовят антигены, раз­личающиеся по агглютинабильности, что делает несопоставимы­ми титры, полученные при исследованиях. Поэтому рекомендо­вано выражать результат пробирочной РА в международных еди­ницах (ME). Для этого предложена международная стандартная бруцеллезная сыворотка, по отношению к которой и определяют активность национальных антигенов. Активность этой сыворот­ки установлена в 1000 ME. Например, с каким-то национальным антигеном международная сыворотка в пробирочной РА показы­вает титр 1: 500, значит, если с этим антигеном какая-либо дру­гая сыворотка дает титр РА 1: 500, то она содержит 1000 МЕ, если вторая исследуемая сыворотка показывает титр 1: 400, то ее активность в международных единицах составит 1000 • 400/500 = 800 ME и т.д. В каждой стране разработана национальная бруцеллезная стандартная сыворотка, соответствующая по ак­тивности международной. По указанным критериям положи­тельные титры РА на бруцеллез для крупного рогатого скота составляют 100 ME (50 ME — сомнительный результат), для овец, коз, буйволов, оленей и собак — 50 ME (25 ME — сомни­тельный результат).

Роз-бенгал проба (РБП). В отличие от пробирочной РА данная серологическая реакция является качественной. С ее помощью в сжатые сроки исследуют большое количество животных. Сыво­ротки, давшие положительную РБП, дополнительно исследуют в пробирочной РА и РСК. Техника постановки РБП изложена в теме 15. В РБП исследуют неразведенную сыворотку крови, влия­ние нормальных антител на специфичность реакции нивелируется использованием антигена с кислыми значениями рН, при которых нормальные антитела с низкой авидностью не реагируют с антиге­ном, что обеспечивает достаточно высокую специфичность РБП.

РСК. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Предварительно инакти-вированные в течение 30 мин сыворотки крови (лошадей при 56...58 °С, крупного рогатого скота при 60...62 °С, свиней при 60...62°С, овец и коз при 58...60°С) исследуют в разведении 1: 5...1: 10. Положительным результатом РСК (РДСК) считают задержку гемолиза на два креста и более в разведении сыворотки крови 1: 5.

Кольцевая реакция с молоком (КР). Метод применяют для ори­ентировочной проверки благополучных по бруцеллезу молочных стад и для контроля молока на рынке.

В бактериологическую пробирку наливают 2 мл исследуемого молока, добавляют 0, 1мл антигена — клетки бруцелл, окрашен­ные гематоксилином. Пробирки встряхивают и помещают в во­дяную баню при 37...38 º С на 45...50 мин, после чего учитывают результат. Положительный результат — верхняя часть столбика молока (сливки) синего цвета, остальное молоко белое или слег­ка синеватое. Отрицательный результат — слой сливок белый, молоко равномерно окрашено в синий цвет. Сомнительный ре­зультат — сливки слабо окрашены в синий цвет, молоко синего цвета.

Аллергическая диагностика не принадлежит к лабораторным методам; ее применяют непосредственно в хозяйствах. При бру­целлезе развивается состояние гиперчувствительности замедлен­ного типа (ГЗТ), которое может сопровождаться синтезом анти­тел, улавливаемых в серологических реакциях, но иногда ГЗТ от­мечают при отрицательных показаниях серологических тестов. Для обнаружения ГЗТ у животных используют диагностический аллерген — бруцеллин (см. тему 20).

Биопрепараты. Вакцина из штамма В. abortus № 19. Это наи­более изученная вакцина. Вакцинный штамм выращивают на плотных питательных средах. Устанавливают концентрацию микробных клеток 8 • 1010/мл, лиофильно высушивают. Готовый препарат контролируют на чистоту роста, диссоциацию, безвред­ность на морских свинках и белых мышах, одновременно у морс­ких свинок проверяют наличие серологического ответа на введе­ние вакцины. Иммуногенность препарата контролируют на мор­ских свинках.

Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютино-генного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма № 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологичес­ких реакций дифференцировать вакцинированных животных.

Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК и РДСК полу­чают следующим образом: культуру вакцинного штамма № 19 выращивают на плотной питательной среде, бактериальную массу инактивируют, проверяют на чистоту и стерильность пу­тем микроскопии и высевом на питательные среды. Контроли­руют на специфичность с физиологическим раствором и нега­тивной сывороткой. Активность проверяют в РА и РСК с на­циональной стандартной бруцеллезной агглютинирующей сы­вороткой.

Антиген для кольцевой реакции с молоком. Микробную массу культуры В. abortus (штамм № 19) готовят, как для единого бру­целлезного антигена, инактивируют, устанавливают необходи­мую концентрацию микробных клеток, протравливают сульфа­том железа, окрашивают в синий цвет гематоксилином, контро­лируют на стерильность, специфичность и активность (см. тему 20).

Роз-бенгал антиген представляет собой суспензию бруцелл в буферном растворе (рН 3, 6), инактивированных нагреванием и фенолом, окрашенных бенгальским розовым в малиново-розо­вый цвет. Антиген контролируют на стерильность, чистоту, рН. Специфичность проверяют с физиологическим раствором и не­гативными сыворотками, активность — методом титрования с национальной стандартной сывороткой.

Флуоресцирующую бруцеллезную сыворотку готовят из пози­тивной бруцеллезной сыворотки, глобулины которой метят флуоресцеинизотиоцианатом.

Позитивную бруцеллезную сыворотку получают гиперимму­низацией животных-продуцентов. Используют для контроля при постановке серологических реакций (РА, РСК и др.), а также серологической идентификации бруцелл.

Диагностический аллерген-бруцеллин представляет собой стерильную, прозрачную, желтоватого цвета жидкость, содержа­щую продукты жизнедеятельности бруцелл и вещества, извлеченные из них. Бактериальную массу выращивают (штамм В. abortus В-1) на агаровой среде, прогревают при 105... 110 °С 1ч, центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют фильтро­ванием, бактериальную массу ресуспендируют в физиологическом растворе. Процедуру нагревания, центрифугирования и стерили­зации повторяют, после чего оба фильтрата объединяют. Полученный препарат контролируют, как описано ранее (см. тему 20).

Туляремия. Острая инфекционная болезнь. У сельскохозяй­ственных животных обычно протекает в септической форме. Ха­рактеризуется увеличением лимфатических узлов, симптомами поражения нервной системы, у крупного рогатого скота может проявляться маститами, у лошадей — абортами. Из сельскохо­зяйственных животных к возбудителю туляремии наиболее чув­ствительны поросята, ягнята, из диких животных — грызуны. Восприимчив человек.

Возбудитель туляремии — бактерия Francisella tularensis (при­надлежит к роду Francisella). Подразделяют на два биовара: F. tularensis sb. tularensis и F. tularensis sb. palaearctica. Для вида F. novicida характерна незначительная вирулентность.

Лабораторная диагностика туляремии основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры мето­дом биопробы и посевом на питательные среды; идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментатив­ным, серологическим свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют мочу, фекалии, абортированный плод; для посмертной — печень, почки, селезенку, увеличенные лим­фатические узлы; трупы мелких животных, грызунов — целиком. При необходимости материал консервируют глицерином.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и Романовскому—Гимзе. F. tularensis -— мелкая [(0, 3...0, 7) х (0, 2...0, 4) мкм] грамотрицательная палочковидная бактерия, преимущественно в форме кокко-бактерии. Красители воспринимает плохо, без жгутиков, спор не образует, но формирует капсулу (рис. 101). Из-за мелких размеров возбудителя его микроскопическое обнаружение затруднительно.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель
туляремии — строгий аэроб, не растет на общепринятых средах,
температурный оптимум Зб...37°С, рН 6, 7...7, 4. Исследуемый материал высевают на среду Френсиса, кровяную среду Емельяновой или желточную Мак-Коя (см. тему 7).

Среда Френсиса: к МПА (рН 7, 3) добавляют 0, 1 % цистина, 1 % глюкозы, кипятят несколько минут, охлаждают до 50 º С, до­бавляют 10 % дефибринированной стерильной крови кролика.

Среда Емельяновой: в рыбно-дрожжевой агар вносят 0, 1 % цистина, 1 % глюкозы, агар охлаждают до 45 °С и добавляют 10 % стерильной дефибринированной крови.

Посевы культивируют 24...48 ч. Возбудитель формирует мел­кие, круглые, выпуклые, с ров­ными краями, гладкой блестя­щей поверхностью, беловатые колонии (рис. 102). Из подо­зрительных колоний готовят мазки, окрашивают, микроско-пируют. В препаратах из куль­туры в отличие от препаратов из нативного материала клетки возбудителя в основном не кокковидной, а палочковидной формы.

 

Рис. 102. Колонии F. tularensis (х7)

 

У культур с типичными для F. tularensis культурально-морфо-логическими признаками исследуют ферментативные свойства (табл. 31).

 

Выделенную культуру дополнительно идентифицируют с ту-ляремийной иммунной сывороткой в серологических реакциях (РА, ИФА, РП, РИГА).

Биопроба. Выделить культуру F. tularensis посевом на питатель­ные среды удается не всегда. Более эффективен метод заражения белых мышей или морских свинок тканевой суспензией подкож­но или внутрибрюшинно по 0, 5 мл. Практикуют проведение 2...3 «слепых» пассажей на чувствительных лабораторных животных. Зараженные животные погибают на 3...5-е сутки, иногда позднее (8... 12-е сутки). У павших животных обнаруживают в паренхима­тозных органах некротические очажки. Из органов путем посева на питательные среды выделяют культуру возбудителя.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить и окрасить по методу Грама (Козловского) мазки из инактивированных клеток бруцелл, F. tularensis. Опи­сать культуральные и морфологические свойства возбудителей.

2. Исследовать в пробирочной РА и роз-бенгал-тесте сыворот­ки крови от здоровых и больных бруцеллезом животных (круп­ный рогатый скот).

3. Освоить технику постановки и учета результатов кольцевой реакции с молоком.

4. Ознакомиться с биопрепаратами для специфической про­филактики и диагностики бруцеллеза.

Контрольные вопросы

1. Какой материал направляют в лабораторию для бактериологического иссле­дования на бруцеллез и туляремию?

2. В чем состоит бактериологическое исследование на бруцеллез и туляремию?

3. Как ставят биопробу на бруцеллез и туляремию?

4. Какие методы применяют для серологической диагностики бруцеллеза?

5. Какие выпускают вакцины против бруцеллеза?

 

 

Тема 33

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПАСТЕРЕЛЛЕЗА, ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА И АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятий. Ознакомить студентов с лабораторной диагнос­тикой пастереллеза, гемофилезного полисерозита и актинобациллезной пневмонии свиней, основными свойствами возбуди­телей, биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры P. multocida в МПБ, на МПА, демонстрация — штативы с тестами, характеризующими видовые ферментативные признаки P. multocida (включая биовары), культуры A. pleuropneumoniae и Н. parasuis на кровяном МПА в чашках Петри с феноменом сателлитного роста, трупы мышей, павших после заражения P. multocida, пипетки Пастера, красите­ли для окраски по Граму, Гинсу, демонстрация — чашки Петри с феноменом подавления роста культуры P. multocida серовара А в присутствии S. aureus, пробирки с отрицательной и положитель­ной трипафлавиновой пробой с культурами P. multocida сероваров А и D, МПА и МПБ в пробирках.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЙ

Пастереллез (геморрагическая септицемия). Инфекционная бо­лезнь многих видов млекопитающих и птиц. При остром течении характеризуется септицемией, при подостром и хроническом — в основном поражением легких.

Возбудитель — Pasteurella multocida (включает в себя три под­вида), род Pasteurella, семейство Pasteurellaceae.

Лабораторная диагностика пастереллеза основана на результа­тах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на культуральные среды и методом биопробы, идентифика­цию возбудителя по культурально-морфологическим, фермента­тивным, серологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют селе­зенку, печень, почку, кровь сердца, лимфатические узлы, пора­женные участки легких и регионарные лимфатические узлы. При необходимости материал консервируют 30%-м водным раство­ром глицерина, трубчатую кость заворачивают в марлю, пропи­танную 5... 10%-м раствором формалина.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и одним из методов для выявления капсулы. Пастереллы представляют собой грамотрицательные короткие палочковидные бактерии размером (0, 3...2) х (0, 2...0, 3) мкм, без спор и жгутиков, образуют капсулу.

Возбудитель в препарате из материала обнаруживают в форме мелких (0, 3x1, 5 мкм) грамотрицательных коротких палочковид­ных капсулообразующих бактерий с закругленными концами вплоть до коккобактерий. При окраске синькой Леффлера бакте­риальные клетки более интенсивно окрашены в концевых частях (биполярная окраска). Клетки располагаются единично, попар­но, короткими цепочками (рис. 103).

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37 °С (диапазон 25...40 °С), штаммы птиц растут при 42 º С, рН 7, 2...7, 4. Материал засевают на МПА, в МПБ, лучше — на кровяной или сывороточный МПА, так как нередко возбудитель в первичных посевах плохо растет или не растет на простых питательных сре­дах. Посевы инкубируют в течение 24...48 ч, при отсутствии рос­та—в течение 4...5 сут.

На плотных питательных средах пастереллы формируют мел­кие, пучке света колонии (S-форма) диаметром 1...3мм (рис. 104); возможно появление крупных, слизистых (М-форма) или шероховатых (R-форма) колоний. Культуры серовара А обра­зуют крупные (диаметр более 3 мм) слизистые колонии. Гемоли­тическая активность у P. multocida не выражена. В МПБ возбуди­тель растет с равномерным помутнением среды и образованием на дне пробирки слизистого осадка, поднимающегося при встря­хивании в виде «косички», рост мукоидных штаммов сопровож­дается более интенсивным помутнением среды. У выделенных культур исследуют морфологию и тинкториальные свойства.

У культур с типичными культурально-морфологическими признаками исследуют ферментативные свойства. P. multocida расщепляет маннит, ксилозу, не разлагает мальтозу, образует ин­дол, орнитиндекарбоксилазу, не синтезирует уреазу, не проявля­ет зависимости от V-ростового фактора ДПН (дифосфопиридин-нуклеотид). Внутри вида P. multocida дифференцируют по фер­ментативным особенностям на три подвида: P. multocida subsp. multocida ферментирует сорбит и не разлагает дульцит; P. multocida subsp. septica не ферментирует сорбит и дульцит; P. multocida subsp. gallicida ферментирует сорбит и дульцит.

Серологические свойства изучают для дифференциации куль­тур P. multocida по серовариантной принадлежности. Известны четыре серовара P. multocida (А, В, D, Е). В Европе эпизоотологическое значение имеют три серовара: В, D, А. Их идентифици­руют в РНГА по капсульным антигенам, но чаще по присущим сероварам D и А особенностям химического состава клеток. Для этого устанавливают присутствие гиалуроновой кислоты в капсульном веществе и склонность бактерий агглютинировать в ра­створе трипафлавина.

Трипафлавиновая проба: исследуемую культуру выращивают в бульоне Хоттингера (3 мл) в течение 24 ч, центрифугируют, затем удаляют 2, 5 мл культуральной жидкости, седимент ресуспенди-руют и добавляют 0, 5 мл водного раствора трипафлавина (1: 1000). Суспензию бактерий выдерживают при комнатной температуре 10...20 мин. Учет результатов: если суспензия стабильна, культуру относят к сероварам А или В; если сформирован осадок, культу­ру относят к серовару D.

Тест на гиалуроновую кислоту в составе капсулы: исследуе­мую культуру засевают «штрихом» на агар Хоттингера в чашках Петри, затем высевают в виде прямой линии по диаметру чашки культуру S. aureus, способную продуцировать гиалуронидазу. По­севы инкубируют 18...24 ч, после чего просматривают колонии в косопроходящем свете. Культуральные свойства P. multocida се-роваров В, D, Е вблизи «штриха» S. aureus не изменяются, коло­нии культур серовара А (из-за расщепления гиалуронидазой ста­филококка гиалуроновой кислоты в составе капсулы пастерелл) тусклые, серые или голубые, а не флуоресцирующие.

Биопроба. Метод используют для выделения культуры возбу­дителя из исследуемого материала и определения вирулентности чистых культур.

Исследуемым материалом от крупного рогатого скота, свиней, овец заражают белых мышей и кроликов; материалом, получен­ным от птиц, заражают голубей, кур, уток. Кроликов перед био­пробой исследуют на пастереллоносительство: в течение трех дней вводят интраназально по две капли 0, 5%-го водного раство­ра бриллиантового зеленого. Появление гнойного истечения из носовой полости указывает на пастереллоносительство, и таких животных из опыта исключают.

Суспензию тканевого материала, разведенную физиологичес­ким раствором (1: 10), вводят кроликам подкожно по 0, 5 мл, бе­лым мышам подкожно по 0, 2 мл, голубям внутримышечно по 0, 3 мл. При наличии в материале возбудителя животные погиба­ют через 18...36 ч. Трупы животных подвергают бактериологичес­кому исследованию.

Биопрепараты. Вакцина эмульгированная против пастереллеза крупного рогатого скота представляет собой инактивированные 0, 25%-м раствором формальдегида клетки пастерелл серовара В в водно-масляной эмульсии. Контролируют на стерильность, без­вредность (белые мыши, кролики) и иммуногенность на кроли­ках. Кроме того, готовят эмульгированные вакцины против пас­тереллеза свиней, кроликов, нутрий.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 3137. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Композиция из абстрактных геометрических фигур Данная композиция состоит из линий, штриховки, абстрактных геометрических форм...

Важнейшие способы обработки и анализа рядов динамики Не во всех случаях эмпирические данные рядов динамики позволяют определить тенденцию изменения явления во времени...

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА Статика является частью теоретической механики, изучающей условия, при ко­торых тело находится под действием заданной системы сил...

Броматометрия и бромометрия Броматометрический метод основан на окислении вос­становителей броматом калия в кислой среде...

Метод Фольгарда (роданометрия или тиоцианатометрия) Метод Фольгарда основан на применении в качестве осадителя титрованного раствора, содержащего роданид-ионы SCN...

Потенциометрия. Потенциометрическое определение рН растворов Потенциометрия - это электрохимический метод иссле­дования и анализа веществ, основанный на зависимости равновесного электродного потенциала Е от активности (концентрации) определяемого вещества в исследуемом рас­творе...

Толкование Конституции Российской Федерации: виды, способы, юридическое значение Толкование права – это специальный вид юридической деятельности по раскрытию смыслового содержания правовых норм, необходимый в процессе как законотворчества, так и реализации права...

Значення творчості Г.Сковороди для розвитку української культури Важливий внесок в історію всієї духовної культури українського народу та її барокової літературно-філософської традиції зробив, зокрема, Григорій Савич Сковорода (1722—1794 pp...

Постинъекционные осложнения, оказать необходимую помощь пациенту I.ОСЛОЖНЕНИЕ: Инфильтрат (уплотнение). II.ПРИЗНАКИ ОСЛОЖНЕНИЯ: Уплотнение...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.012 сек.) русская версия | украинская версия