Студопедия Главная Случайная страница Задать вопрос

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 2 страница




Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при 4 ºС 1...2сут; консервированный в 50%-м ра­створе глицерина (кусочки органов) — несколько недель; для длительного хранения материал замораживают при —15...—20 °С.

Кровь для серологических исследований у крупного рогатого скота, овец, лошадей берут из яремной вены в стерильные бак­териологические пробирки в количестве 10... 15 мл, у свиней — из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрыльцовой вен, у кроликов — из краевой уш­ной вены. Пробирки с кровью необходимо выдержать до фор­мирования сгустка в тепле (1,5...2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обвести сгусток стеклянной чистой палочкой или спицей. Для отстаивания сыворотки пробирки с кровью по­мещают в холодильник при 4...6 °С на 18...20 ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробир­ки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1:10 000), или замораживают.

Принципиальная схема микробиологического исследования. Ди­агностика инфекционных болезней включает в себя комплекс исследований: эпизоотологические, клинические, патологоана­томические, микробиологические. При важности каждого из них и ценности именно комплексного подхода микробиологическое исследование особенно важно, поскольку с его помощью либо непосредственно обнаруживают этиологический (причинный) агент болезни, либо косвенными специфическими иммунологи­ческими методами доказывают его присутствие.

Микробиологическое исследование в принципе состоит из следующих этапов.

1. Обнаружение возбудителя непосредственно в исследуемом
материале без изоляции в виде чистой культуры на питательных
средах. На этом этапе применяют разные методы.

Неиммунологические методы включают в себя: а) выявление возбудителя путем микроскопического исследования окрашен­ных (по Граму и т. д.) мазков-отпечатков из органов и тканей; б) обнаружение при помощи генетических методов (генные зон­ды, ПЦР) нуклеиновых кислот возбудителя.

Иммунологические методы заключаются в выявлении антиге­нов возбудителя с помощью различных серологических реакций (РП, РДП, МФА, ИФА, РИГА и т.д.).

2. Обнаружение возбудителя (его токсинов) в биопробе (зара­жают исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных).

3. Выделение культуры возбудителя из исследуемого материа­ла путем посева на питательные среды.

4. Идентификация выделенной культуры микроорганизмов по совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и патогенных свойств. При этом широко используют серологические (РА, РП, РДП, ИФА и т.д.), а в слу­чае необходимости генетические методы идентификации изоли­рованных микроорганизмов.

5. Серологическая (ретроспективная) диагностика заключа­ется в том, что при помощи различных серологических реакций (РА, РСК, ИФА и т. д.) в сыворотке крови исследуемых живот­ных обнаруживают специфические следы пребывания возбуди­теля — антитела. Серолбгические реакции наиболее широко применяют при диагностике хронически протекающих бактери­озов.

6. Аллергическое исследование в отличие от перечисленных выше методов проводят непосредственно на животных в хозяй­стве. При помощи диагностических аллергенов у животных вы­являют состояние гиперчувствительности замедленного типа. Аллергическую пробу в основном применяют для иммунологи­ческой диагностики хронических бактериозов.

Изложенная схема отражает возможные, но не обязательные направления микробиологических исследований. При каждой конкретной инфекции схему исследования определяют особен­ности биологии возбудителя и инфекционного процесса.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Освоить методику взятия материала из трупа животного (кролик, морская свинка).

2. Приготовить консервирующие смеси различного типа (гли­церин, физиологический раствор, лед и поваренная соль) и про­вести консервирование материалов различного типа.

3. Освоить технику взятия крови у кролика и получения сыво­ротки крови.

Контрольные вопросы

1.Какой материал берут прижизненно и какой посмертно у животных для мик­робиологического исследования?

2.Какие методы консервирования материала применяют для микробиологи­ческого исследования?

3.Какова схема микробиологического исследования?

 

Раздел III

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

 

Тема 22

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СТАФИЛОКОККОЗОВ И СТРЕПТОКОККОЗОВ. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики, основными свойствами возбудителей стафилоккозов, стрептококкозов и биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры S. aureus и S. saprophytics на МПА, кровяном МПА, в МПБ, результаты тестов по опреде­лению патогенных свойств стафилококков: ферментация манни-та, плазмокоагулазная, гемолитическая, лецитиназная, ДНК-азная, желатиназная активность, культуры S. pneumoniae, S. agalactiae (или S. pyogenes) на глюкозо-сывороточном МПА, МПБ, на средах Гисса с углеводами, пипетки Пастера; стериль­ные МПБ и кровяной МПА, красители для окраски по Граму и на капсулы, биопрепараты.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Стафилококкозы. Бактериальные инфекции, вызываемые па­тогенными стафилококками, характеризующиеся преимуще­ственно гноеродными процессами различной локализации. Про­являются в виде абсцессов, флегмон, маститов, метритов, пнев­моний, сепсиса. Токсигенные штаммы стафилококков могут вы­зывать пищевые отравления у людей.

Возбудитель стафилококкозов: в основном штаммы S. aureus, реже S. epidermidis и некоторые другие виды рода Staphylococcus, семейства Micrococcaceae.

Лабораторная диагностика стафилококкозов основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологичес­ким, а также токсигенным признакам (методом биопробы).

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики берут раневой экссудат стерильными ватными тампонами, содержимое абсцессов отбирают стерильным шприцем, при масти­тах материалом служит секрет вымени.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки окра­шивают по Граму и на капсулу, микроскопируют. Клетки стафи­лококков грамположительные, сферической формы, диаметром 0,5... 1 мкм, располагаются в виде скоплений неправильной фор­мы, а также единично, парами и цепочками из трех-четырех кле­ток (рис. 72), спор нет, вирулентные штаммы могут образовывать капсулу.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Стафило­кокки — факультативные анаэробы, температурный оптимум 30...37 ºС, рН 7,2...7,4, к питательным средам неприхотливы, мо­гут расти при повышенном содержании хлорида натрия. Иссле­дуемый материал высевают на МПА, в МПБ, посевы культивиру­ют в условиях обычной атмосферы. При загрязнении материала посторонней микрофлорой используют питательные среды с се­лективными свойствами: солевые МПА, МПБ (8...10% хлорида натрия), желточно-солевой агар (ЖСА), 3,5%-й МПА с добавле­нием 3 мл 0,1%-го раствора кристаллвиолета (на этой среде пато­генные стафилококки образуют колонии фиолетового или оран­жевого цвета). Широко используют посев исходного материала на кровяной МПА.

На плотных средах через 18...24ч инкубирования вырастают колонии правильной круглой формы, выпуклые, с гладкой по­верхностью, ровными краями, диаметром 2...7мм, непрозрач­ные. Цвет колоний зависит от типа вырабатываемого пигмента. S. aureus синтезирует золотистый и белый пигмент. На кровяном МПА вирулентные штаммы обычно растут, формируя широкую зону бета-гемолиза (рис. 73). На ЖСА вокруг колоний стафило­кокков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. В МПБ рост ста­филококков сопровождается интенсивным помутнением среды и образованием значительного осадка.

Из культур, выросших на питательных средах, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении бактерий с типичными для стафилококков культурально-морф-логическими признаками приступают к изучению свойств, прямо или косвенно свидетельствующих о патогенности выделенного стафилококка.

Патогенные стафилококки в отличие от непатогенных образу­ют капсулу (S. aureus), выделяет гемолизин, фибринолизин (стафилокиназу), гиалуронидазу, плазмокоагулазу, желатиназу, ДНК-азу, лецитиназу, ферментируют маннит. Методы выявле­ния этих факторов патогенности изложены в теме 13. Важней­шим из перечисленных факторов считают плазмокоагулазу: у 90...95 % плазмокоагулирующих стафилококков выражена спо­собность продуцировать энтеротоксин.

Протеин А также рассматривают как фактор патогенности стафилококков. Этот белок, находясь в составе клеточной стен­ки, связывает Fc-фрагменты IgG, что способствует снижению эффективности фагоцитоза. Для выявления протеина А смеши­вают суспензию эритроцитов, сенсибилизированных IgG, и клет­ки исследуемой культуры стафилококка. При наличии белка А стафилококки соединяются с иммуноглобулинами и вызывают агглютинацию эритроцитов.

Биопроба. Заражают лабораторных животных для подтвержде­ния токсигенных свойств выделенного стафилококка.

Летальный токсин выявляют внутривенным введением кроли­ку фильтрата бульонной культуры 0,75 мл на 1 кг массы.

Некротоксин обнаруживают внутрикожной пробой. Готовят суспензию суточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией клеток 4,2 • 109/мл и 1 *109/мл. Каждое разведе­ние культуры по 0,1 мл вводят внутрикожно кролику, предвари­тельно удалив шерстный покров на месте инъекции. Результаты учитывают ежедневно на протяжении 4...5сут. В положительных случаях развивается некроз кожи.

Энтеротоксин продуцируют токсигенные штаммы. Пробу на энтеротоксин ставят при отравлениях. Культуру стафилококка выращивают на специальной питательной среде (пептон, хлорид кальция, хлорид магния, дигидрофосфат калия, 0,8 % агар-агара, рН 7,2), в атмосфере, содержащей 20 % оксида углерода (IV), в течение трех суток. Затем культуру стерилизуют фильтрованием, 10...15 мл фильтрата смешивают с равным объемом молока и скармливают 4...8-недельным котятам. При наличии энтеротоксина через 1..2ч у животных возникают симптомы гастроэнтери­та и рвота.

Стрептококкозы. Инфекционные болезни, вызываемые бакте­риями рода Streptococcus, к которому относят 29 видов. Наиболь­шее значение в патологии сельскохозяйственных животных име­ют следующие виды: S. pneumoniae — возбудитель стрептококко­вой (диплококковой) септицемии молодняка сельскохозяйствен­ных животных; S. equi, включающий в себя три подвида: S. equi subsp. equi — возбудитель мыта лошадей; S. equi subsp. equisimillis и S. equi subsp. zooepidemicus, который вызывает септические инфек­ции у других видов животных; S. agalactiae и S. dysagalactiae — этиологические агенты маститов крупного рогатого скота; S. pyogenes — возбудитель ряда заболеваний, преимущественно человека. Многие стрептококки, патогенные для животных, пока идентифицированы на уровне серологической группы и не полу­чили видовых наименований.

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды или методом биопробы, идентифика­цию возбудителя по культурально-морфологическим, фермента­тивным, серологическим и патогенным признакам (методом биопробы).

Материал для исследования. При подозрении на мыт прижиз­ненно берут носовые истечения, содержимое абсцессов лимфа­тических узлов (путем пункции), для посмертной диагностики — кровь из сердца, части печени, селезенки, легких. При стрепто­кокковых маститах исследуют молоко, при подозрении на септи­ческие стрептококкозы (диплококковая инфекция и др.) — кровь из сердца, селезенку, печень, костный мозг, носовые истечения.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки окра­шивают по Граму и на капсулу, микроскопируют. Все стрепто­кокки представляют собой сферические или овальные грамполо-жительные клетки диаметром 0,5...1,25 мкм, без спор и жгутиков, с тенденцией к образованию цепочек различной длины (рис. 74, 75). Морфология стрептококков некоторых видов в препаратах из патологического материала несколько отличается. У S. pneumoniae клетки обычно парные, окруженные капсулой, концевые части клеток слегка удлинены, поэтому данный стреп­тококк ранее называли ланцетовидным диплококком. Клетки S. pneumoniae также могут располагаться единично и короткими цепочками. S. equi в мазках из гноя обнаруживают в виде длин­ных цепочек, причем клетки в цепочке как бы сплющены в гори­зонтальной плоскости, образуют капсулу; в мазках из культуры клетки S. equi чаще располагаются короткими це­почками, единично, парами. S. agalactiae и S. pyogenes в пре­паратах из материала чаще

обнаруживают в виде цепочек.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Стреп­тококки — факультативные ана­эробы, температурный опти­мум 37 °С (диапазон 25... 45 °С). На общепринятых пи­тательных средах растут плохо, обычно используют обогащенные среды: МПБ с 1 % глюкозы и 10 % инактивированной сыворотки крови лошади, МПА с 1 % глюкозы и 5 % крови барана или кролика. Для выделения культуры возбуди­теля исследуемый материал высевают на указанные питательные среды и культивируют 18...24 ч.

На глюкозо-кровяном МПА все виды патогенных стрептокок­ков образуют мелкие колонии, чаще с зоной гемолиза. У S. pneumoniae колонии круглые, полупрозрачные, плоские, с при­поднятым центром и краями, с зоной гемолиза типа «альфа»; в МПБ растет с равномерным помутнением среды. S. equi форми­рует мелкие, росинчатые, слизистые, правильной круглой формы колонии с узкой зоной бета-гемолиза, позднее они становятся серо-белыми, непрозрачными; в МПБ растет с помутнением сре­ды, образованием пушистых хлопьев, через 3...5 сут культивиро­вания бульон просветляется, на дне пробирки образуется осадок. У S. agalactiae (S. dysagalactiae) мелкие, сероватые, просвечиваю­щие колонии с бета- или двойной зоной альфа-гемолиза, при ро­сте в МПБ среда остается прозрачной, формирующиеся крупин­ки оседают на дно пробирки. S. pyogenes на кровяном МПА обра­зует мелкие, прозрачные, правильной круглой формы колонии с зоной бета-гемолиза, в бульоне растет с просветлением среды и выпадением зернистого осадка.

На следующем этапе из выделенных культур готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При обнаружении ти­пичных по морфологии и тинкториальным свойствам клеток бактерий переходят к следующему этапу.

Чтобы исключить стафилококковую, энтерококковую (род Enterococcus) инфекции, чистую культуру исследуют в нескольких пробах. Ставят тест на каталазу — стафилококки образуют ката-лазу, стрептококки нет. С целью дифференциации пиогенных ге­молитических стрептококков от энтерококков культуры высева­ют в МПБ, содержащий 40 % желчи крупного рогатого скота, МПБ с 6,5 % хлорида натрия. Энтерококки в отличие от гноерод­ных стрептококков растут на этих средах. Также проверяют чув­ствительность клеток культуры к желчи: в пробирку с МПБ, со­держащим 10 % желчи крупного рогатого скота, вносят 0,5 мл ис­следуемой суточной бульонной культуры и выдерживают при 37 °С 1 ч. При лизисе содержимое пробирки просветляется, энте­рококки не лизируются.

Параллельно изучают ферментативные свойства стрептокок­ков (табл. 18).

Серогрупповую принадлежность выделенного микроба опре­деляют в реакции преципитации. В РП используют стрептокок­ковые групповые преципитирующие сыворотки. Исследуемую культуру выращивают в МПБ в течение 18...20 ч, затем 7...9 мл культуры центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют 0,3...0,4 мл 0,2 н. раствора соляной кислоты, осадок суспендируют, взвесь прогревают в кипящей водяной бане 10 мин, охлаждают, добавляют каплю 0,04%-го спиртового раствора фенолфталеина и нейтрализуют 0,2 н. раствором гидро-ксида натрия. Жидкость приобретает бледно-розовый цвет. За­тем смесь вновь центрифугируют и надосадочную жидкость, со­держащую термостабильный полисахаридный антиген С, ис­пользуют как антиген для постановки реакции кольцепреципитции. По классификации Ленсфильд стрептококки на основании антигенных свойств полисахарида С можно отнести к той или иной серологической группе: А, В, С, D и т.д. S.pneumoniae не содержит серогрупповой полисахарид, но является антигенно-гетерогенным видом, который дифференцируют на типы в РА.

Биопроба. У выделенных культур стрептококков определяют патогенные свойства в биопробе на белых мышах. Для заражения используют только свежевыделенные штаммы в виде 18...20-ча­совых бульонных культур, которые по 0,5 мл вводят внутрибрюшинно трем мышам. Культуру признают патогенной при гибели не менее двух мышей.

В случае инфекции, вызываемой S. pneumoniae, практикуют выделение возбудителя из исследуемого материала методом био­пробы. С этой целью тканевую суспензию, разведенную стериль­ным физиологическим раствором в соотношении 1:2, вводят внутрибрюшинно белым мышам по 0,5 мл. В положительных случаях мыши погибают через 1...2 сут.

Биопрепараты. Вакцину против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят готовят из штаммов S. pneumoniae, выделенных от указанных видов животных. Культуры выращивают на полужидком агаре, инактивируют 0,4%-м раствором формалина, проверяют на стерильность, безвредность (на морских свинках), активность (на белых мышах).

Ассоциированная (поливалентная) вакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят включает в себя кроме P. multocida и S. cholerasuis бактериальную массу S. pneumoniae.

Сыворотку против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят получают гипериммунизацией волов убитыми и живыми культурами возбудителя.

Инактивированные вакцины из стрептококков серологичес­кой группы С.

 

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить мазки из культур стафилококков, стрептокок­ков, окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать.

2. Описать культуральные свойства стафилококков и стрепто­кокков.

3. Изучить ферментативные свойства стафилококков и стреп­тококков.

4. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы

1. По каким критериям дифференцируют патогенные и непатогенные стафилококки?

2. Каковы основные виды патогенных стрептококков?

3.По каким критериям дифференцируют гноеродные гемолитические и фе­кальные стрептококки?

4.Каковы культуральные, морфологические и тинкториальные свойства стреп­тококков?

5.Какие биопрепараты выпускают против диплококковой септицемии молод­няка сельскохозяйственных животных?

 

Тема 23

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА РОЖИ СВИНЕЙ И ЛИСТЕРИОЗА. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики и свойствами возбудителей рожи свиней, листериоза, биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры вакцинных штаммов возбудителя рожи свиней и листериоза на МПА, в МПБ с инди­каторными бумажками на сероводород, культуры на средах Гисса с углеводами, перекись водорода, реактив Эрлиха, стерильные МПА, МПБ в пробирках, пипетки Пастера, трупы мышей, пав­ших после заражения вакцинными штаммами возбудителей, ин­струменты для вскрытия трупов животных, люминесцентный микроскоп, люминесцирующие сыворотки листериозные и ро­жистые, биопрепараты.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Рожа свиней. Инфекционная болезнь, преимущественно сви­ней в возрасте З...12мес. Спорадически встречается у крупного рогатого скота, ягнят, пушных зверей, грызунов, птицы; воспри­имчив человек. Болезнь протекает остро и хронически. Острое течение характеризуется признаками септицемии, воспалитель­ной эритемой, хроническое — эндокардитами и артритами.

Возбудитель рожи свиней — бактерия Erysipelothrix rhusiopathiae, род Erysipelothrix.

Лабораторная диагностика рожи свиней основана на результа­тах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чи­стой культуры посевом на питательные среды и методом биопро­бы и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным признакам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют труп животного целиком или сердце (при хроническом течении обяза­тельно), печень, селезенку, почку, трубчатую кость. Материал не консервируют или помещают в стерильный 30%-й раствор гли­церина.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель представляет собой прямую или слегка изогнутую тонкую палоч­ковидную грамположительную бактерию без спор, капсул и жгути­ков размером (0,2...0,3) х (0,8...2,5) мкм (рис. 76). Мазки-отпечатки из органов окрашивают по Граму и противорожистой люминесцирующей сывороткой. В положительных случаях в материале нахо­дят мелкие грамположительные палочки, располагающиеся оди­ночно, попарно или в виде скоплений. В препаратах из поражен­ных клапанов сердца при хроническом течении болезни возбуди­тель обнаруживают в форме нитей. В мазках, окрашенных люминесцирующей сывороткой, в положительных случаях нахо­дят светящиеся клетки бактерий типичной морфологии.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель рожи — факультативный анаэроб, в первых генерациях ведет себя как микроаэрофил. Температурный оптимум 36...37 °С, рН 7,2...7,5. С целью выделения культуры возбудителя исследуемый материал засевают в МПБ или на МПА. Посевы культивируют 24...48 ч.

В МПБ возбудитель растет с очень слабым помутнением пи­тательной среды, без образова­ния пристеночного кольца или поверхностной пленки, через 48...72ч среда просветляется, на дне пробирки формируется не­значительный осадок, поднима­ющийся при встряхивании в виде облачка. На плотных сре­дах возбудитель образует мелкие росинчатые колонии (S-форма), иногда крупные, с неровными краями и поверхностью (R-форма). Посевы на плотных средах из-за малых размеров колоний лучше просматривать при помо­щи лупы. Из культур, выросших на питательных средах, готовят и микроскопируют мазки, окрашенные по Граму и люминесцирующей сывороткой. При обнаружении бактерий, типичных для возбудителя рожи свиней по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам, у выделенных культур изучают фер­ментативные, серологические и патогенные свойства.

Возбудитель рожи разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу; не ферментирует эскулин, сахарозу, маннит, дульцит, рамнозу; не образует каталазу, индол; выделяет сероводород; не растет в МПБ с 8,5 % хлорида натрия; вирулентные штаммы синтезируют гиалуронидазу.

Вид Е. rhusiopathiae подразделяют на 22 серовара, которые обо­значают цифрами. Наиболее распространены серовары 1-й и 2-й, которые ранее обозначали А и В. Для видовой серологической идентификации на практике используют обычную лечебно-профи­лактическую противорожистую сыворотку (см. «Биопрепараты»).

На предметное стекло наносят каплю иммунной сыворотки, разведенной физиологическим раствором (1:50), в которой за­тем тщательно суспендируют бактериологической петлей суточ­ную агаровую исследуемую культуру. Через 1...2мин учитывают результат: возбудитель рожи агглютинирует в сыворотке.

Биопроба. Метод применяют для изоляции возбудителя из иссле­дуемого материала, а также для определения патогенных свойств выделенных культур бактерий. Тканевый материал измельчают в ступке со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 и вводят подкожно по 0,1...0,2 мл белым мышам массой 16...18 г. При наличии возбудителя животные погибают через 2...4сут после заражения. Заражение мышей слабовирулентными культурами, например выделенными от свиней с хроническим течением болезни, может приводить к гибели животных в более поздние сроки или не вызывать летального исхода. Материал из трупов мышей подвергают бактериологическому исследованию.

Биопрепараты. Концентрированная гидроокисьалюминиевая формолвакцина против рожи свиней содержит культуры возбу­дителя серовара В, выращенные в бульоне Хоттингера, инактивированные формалином, сорбированные на гидроксиде алюми­ния. После формирования осадка вакцину концентрируют, сли­вая треть надосадочной жидкости. Вакцину контролируют на стерильность, безвредность и активность (на голубях).

Депонированная вакцина против рожи свиней представляет собой живую культуру матрикса Конева, сорбированную на гид­роксиде алюминия. Вакцину контролируют на чистоту роста, безвредность и остаточную вирулентность (считают пригодной для использования, если вакцина безвредна для голубей и виру­лентна для мышей).

Сухая живая вакцина против рожи свиней ВГНКИ из штамма ВР-2 представляет собой лиофильно высушенную культуру вак­цинного штамма ВР-2. Вакцину контролируют на чистоту роста, концентрацию микробных клеток (5*109/мл), безвредность и ак­тивность на белых мышах. Так же готовят жидкую вакцину из штамма ВР-2.

Лечебно-профилактическую сыворотку против рожи свиней по­лучают гипериммунизацией свиней; контролируют на стерильность, безвредность и активность на белых мышах и признают активной, если она предохраняет от гибели мышей в дозах 0,01...0,02 и 0,03 мл.

Сухие рожистые люминесцирующие сыворотки для прямого метода иммунофлуоресценции предназначены для серологичес­кой идентификации возбудителя непосредственно в материале и в культуре.

Листериоз. Бактериальная инфекция сельскохозяйственных животных многих видов, грызунов, птиц и человека. Характери­зуется поражением центральной нервной системы, репродуктив­ных органов (аборты), молочной железы (маститы), признаками септицемии. Протекает остро и хронически.

Возбудитель листериоза — бактерия Listeria monocytogenes, род Listeria.

Лабораторная диагностика листериоза основана на результатах бактериологического исследования, в отдельных случаях приме­няют серологическую диагностику.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодами световой и люминесцентной микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным признакам (ме­тодом биопробы).

Материал для исследования. В лабораторию направляют трупы мелких животных (целиком), от крупных животных: голову (го­ловной мозг), печень, селезенку, почки, пораженные участки легких; для прижизненной диагностики — абортированный плод с оболочками, истечения из половых органов, секрет поражен­ной доли вымени, в случае необходимости кровь или сыворотку крови от больных или подозреваемых в заболевании животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель представляет собой грамположительную палочковидную бакте­рию с закругленными концами, без спор, размером 0,5...2мкм (рис.77). Листерии при 20.-.22*С, но не при 37...38 °С образуют жгутики. При выращивании на сывороточных средах формируют капсулу. Из исследуемого материала готовят и микроскопируют мазки, окрашенные по Граму, а также флуоресцирующими лис-териозными сыворотками. В тканевом материале листерии обна­руживают в виде грамположительных, нередко полиморфных па­лочек, располагающихся одиночно, парами, напоминающими римскую цифру пять, или по нескольку штук параллельно.

 

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Листерии — факультативные анаэробы, температурный оптимум 36...38 "С, диа­пазон 4...45 "С, способны расти на средах с повышенным содержа­нием хлорида натрия. Посевы из исследуемого материала делают в МПБ или печеночный бульон и на агар с добавлением глюкозы (1%) и глицерина (2...3%), на кровяной агар. При исследовании загрязненного материала используют среды с селективными свой­ствами: МПА с теллуритом калия и полимиксином, среды, содер­жащие 10 % хлорида натрия. Для увеличения концентрации возбу­дителя в исследуемом материале рекомендуют часть материала хра­нить при 4°С до 30 сут. При получении отрицательных результатов в первичных посевах следует с интервалом 10 сут делать повторные высевы на среды, что увеличивает вероятность выделения возбуди­теля. Посевы инкубируют при 37 °С до двух недель.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 756. Нарушение авторских прав

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2017 год . (0.014 сек.) русская версия | украинская версия