Тема 19РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (РН) Цель занятия. Ознакомить студентов с реакцией нейтрализации (РН). Освоить технику постановки РН для обнаружения и идентификации бактериальных токсинов. Оборудование и материалы. Бульонные токсинсодержащие культуры С. perfringens, центрифуга, центрифужные пробирки, стерильные бактериологические пробирки, стерильный физиологический раствор, воронки, ватно-марлевые фильтры, стерилизатор со шприцами и инъекционными иглами, диагностические антитоксические сыворотки С. perfringens, белые мыши массой 16...18 г. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ Реакцию нейтрализации относят к иммунологическим реакциям, в которых, например, учитывают потерю биологической активности антигена при взаимодействии с гомологичными антителами. Если антигеном служит бактериальный экзотоксин, то он теряет свои токсические свойства (нейтрализуется), вирус как антиген теряет в этом случае инфекционное действие и т. д. В бактериологических диагностических исследованиях наиболее часто используют РН как метод обнаружения и идентификации бактериальных токсинов. РН бактериального экзотоксина. Используют при диагностике таких бактериозов, как ботулизм, инфекционная энтеротоксемия овец и др., возбудители которых (С. botulinum, С.perfringens) синтезируют сильный экзотоксин. Для постановки диагноза на эти бактериальные инфекции достаточно обнаружить экзотоксин в РН. Рассмотрим технику постановки РН на примере обнаружения токсинов С. perfringens. Для постановки РН необходимы диагностические иммунные сыворотки, содержащие антитела к определенному бактериальному токсину, — антитоксические сыворотки, Такие диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации животных-продуцентов анатоксинами, токсинами инактивированными (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства. С. perfringens продуцирует шесть типов экзотоксинов, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F). Исследуемый материал, в котором предположительно находится токсин (содержимое кишечника), разводят физиологическим раствором в соотношении 1: 1, экстрагируют при комнатной температуре 1 ч, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и центрифугируют при 5000 мин-1 20 мин. Надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно или внутривенно по 0, 5 мл двум белым мышам массой 16... 18 г. При наличии токсина в исследуемом материале животные погибают в течение 12 ч. После обнаружения токсина его идентифицируют в реакции нейтрализации. Схема постановки РН на примере определения типа токсина С. perfringens показана в таблице 14. Диагностические антитоксические сыворотки (типов А, С, D, Е) предварительно разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 10 ед/мл.
Содержимое каждой пробирки после инкубирования вводят внутривенно или внутрибрюшинно по 0, 5 мл двум белым мышам. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч. Если токсин принадлежит С. perfringens, то мыши, получившие смесь токсина с гомологичной антитоксической сывороткой, остаются живы (табл. 15).
Другие варианты РН. При помощи нейтрализации антителами гемолизинов, продуцируемых различными штаммами бактерий одного вида, можно подтвердить антигенную однородность гемолизина или доказать, что данный вид бактерий синтезирует несколько антигенных вариантов гемолизина. В вирусологических исследованиях широко используют реакцию нейтрализации инфекционного действия вируса при помощи гомологичной иммунной сыворотки. Факт нейтрализации вируса антителами устанавливают, заражая различные чувствительные биологические объекты: лабораторных животных, куриные эмбрионы, культуры клеток. Технические детали РН в вирусологической практике подробно изложены в соответствующем курсе. ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ Освоить технику постановки реакции нейтрализации по выявлению и идентификации токсинов С. perfringens. Контрольные вопросы 1.В чем сущность реакции нейтрализации? 2.Какие применяют варианты реакции нейтрализации? 3.Каким образом устанавливают тип бактериального токсина в РН?
|
