Студопедия — СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 6 страница
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 6 страница






Биопроба. Готовят суспензию культуры в физиологическом ра­створе с концентрацией клеток 1 ■ 109/мл по бактериальному стандарту мутности и вводят по 0, 5 мл внутрибрюшинно трем бе­лым мышам массой 14...16 г и трем цыплятам трех-четырехне-дельного возраста (при исследовании материала от птиц). За жи­вотными ведут наблюдение в течение трех суток. В случае гибели двух зараженных мышей и более или цыплят выделенную культу­ру считают патогенной.

Биопрепараты. Вакцина поливалентная гидроокисьалюминиевая формолтиомерсаловая против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят.

Вакцина поливалентная против сальмонеллеза и колибактери­оза пушных зверей.

Коли-протектан ВИЭВ.

Сыворотка поливалентная против колибактериоза (эшерихио­за) сельскохозяйственных животных. Сыворотки О-коли агглютинирующие.

Коли-адгезин-тест: антиадгезивные коли-сыворотки К 88, К 99, 987 Р, А 20, F41.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Изучить морфологические, тинкториальные и культуральные свойства Е. coli.

2. Изучить ферментативные свойства Е. coli.

3. Определить у культур Е. coli адгезивные антигены и О-серогруппы в РА на стекле.

Контрольные вопросы

1. Какие дифференциально-диагностические среды применяют для выделения
Е. coli?

2. Каковы основные биохимические свойства Е. coli?

3. Как определяют патогенность Е. coli?

 

 

Тема 30

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗА. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики, биологическими свойствами сальмонелл и биопре­паратами, применяемыми при сальмонеллезе.

Оборудование и материалы. Культуры сальмонелл на МПА, МПБ, агаре Эндо, агаре Плоскирева, среде Олькеницкого или Ресселя, ПБДЭ-пластинах. Набор сальмонеллезных сывороток О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютинирующих для экспресс-идентификации сальмонелл в реакции агглютина­ции на стекле.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Сальмонеллезы. Группы инфекционных заболеваний преиму­щественно молодняка сельскохозяйственных и промысловых животных (телят, поросят, жеребят, ягнят, пушных зверей, птиц), а также человека. Телята чаще заболевают в возрасте стар­ше двух недель, поросята — от 1 до 4мес. Овцы могут болеть сальмонеллезом с первых дней жизни. У молодняка птиц сальмо­неллы вызывают массовую гибель. Бактерии, размножаясь в ки­шечнике, вызывают воспаление слизистой оболочки, проникают в кровь, развивается септицемия. Характерна следующая клини­ческая картина: угнетенное состояние животного, высокая тем­пература, диарея. Заболевание беременных животных ведет к абортам и рождению нежизнеспособного потомства. Возможно развитие бронхопневмоний и артритов.

Возбудители сальмонеллеза — бактерии рода Salmonella, семейства Enterobacteriaceae. Род Salmonella по ферментативной активности условно подразделяют на подроды (I, II, III, IV, V).
Большинство сальмонелл, выделяемых от животных, входит в
подрод I (S. choleraesuis, S. typhimurium, S. gallinarum, S. pullorum,
S. enteritidis, S. dublin, S. abortusovis, S. typhisuis
и др.). Сальмонеллы внутри рода идентифицируют по антигенной структуре: известно свыше 2200 серологических вариантов сальмонелл, каждый из которых характеризуется определенным набором О- и Н-антигенов (табл. 27).

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основана на резуль­татах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себячобнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чи­стой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патоген­ным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют паренхи­матозные органы или их части: печень с желчным пузырем, почку, мезентериальные лимфатические узлы, трубчатую кость, сердце, перевязанное у основания аорты лигатурой. Погибшие в 12... 18-дневном возрасте эмбрионы птиц (до 30 шт.) и павшую птицу (до 10 гол.), абортированные плоды с плодными оболочками и околоплод­ной жидкостью, а также свежие трупы мелких животных направля­ют в лабораторию целиком. При подозрении на хроническую фор­му от телят дополнительно берут измененные участки легких, от кур — измененные фолликулы яичника. Материалом для прижиз­ненной диагностики служат фекалии больных животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки – отпечатки окрашивают по Граму, обрабатывают сальмонеллезными люминесцирующими сыворотками и микроскопируют. Сальмо­неллы представляют собой грамотрицательные палочки разме­ром (2...4) х (0, 7... 1, 5) мкм, располагающиеся одиночно. Спор и капсул не образуют. Подвижные, за исключением S. pullorum. Положительным результатом люминесцентной микроскопии считают свечение типичных для сальмонелл форм не ниже чем па два креста.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Сальмонел­лы—факультативные анаэробы, температурный оптимум 37...38 °С, рН 7, 2...7, 4. Исследуемый материал высевают в МПБ, в чашки Петри с МПА и одной из плотных дифференциально - диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитный агар). При подозрении на хроническое течение сальмонеллеза делают посевы на одну из сред обогащения (селенито­вая, Мюллера, Кауфмана, Киллиана). Посевы инкубируют 16...20 ч, после чего просматривают невооруженным глазом, отмечая колонии, характерные для сальмонелл.

Сальмонеллы на средах Эндо и Плоскирева формируют про­зрачные бесцветные колонии, на среде Левина — голубоватые, на висмут-сульфитном агаре — черные с металлическим блеском, за исключением S. choleraesuis, S. abortusovis, S. gallinarum- pullorum, которые на висмут-сульфитном агаре образуют нежно-зеленые колонии. На мясо-пептонном агаре сальмонеллы растут в виде гладких, прозрачных, бесцветных колоний с ровными кра­ями (рис. 96); в мясо-пептонном бульоне — с диф­фузным помутнением среды. При отсутствии колоний сальмонелл на МПА, дифференциально-диагностических средах и нали­чии роста бактерий, похо­жих на сальмонеллы, в сре­дах обогащения из после­дних делают высев на плотные среды, чтобы получить изолированные ко­лонии. Из подозрительных колоний делают мазки, ок­рашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении бактерий, типичных по морфологическим и тинкториальным свойствам для сальмо­нелл, у них изучают ферментативные свойства.

 

Рис. 96. Сальмонеллы:

а – чистая культура; б - колонии

 

Подозрительные на сальмонеллы колонии пересевают в про­бирки с комбинированными средами Олькеницкого или Ресселя.

Среда Олькеницкого: агар питательный сухой — 25 г, лакто­за — Юг, аммоний-железо сульфат (соль Мора) — 0, 2 г, тиосуль­фат натрия —0, 3 г, мочевина — Юг, 0, 4%-й водный раствор фе­нолового красного — 4 мл, дистиллированная вода— 1000 мл. Соли предварительно растворяют в небольшом объеме дистилли­рованной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в не­больших объемах воды при подогревании на водяной бане. Су­хой питательный агар расплавляют в оставшемся объеме воды при нагревании и помешивании. Затем все компоненты соединя­ют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают рН 7, 2...7, 4, добавляют индика­тор и разливают в пробирки по 6...7 мл. Среду стерилизуют теку­чим паром три дня по 20 мин и скашивают, оставляя столбик среды высотой 2...2, 5 см. Готовая среда бледно-розового цвета.

Среда Ресселя: к 100 мл 1, 5%-го мясо-пептонного агара (рН 7, 2) прибавляют 1 % лактозы, 0, 1 % глюкозы и 1 мл индикатора Андреде, среду разливают в пробирки по 5...6 мл, стерилизуют в автоклаве при 112 °С 20 мин и скашивают, оставляя столбик сре­ды высотой 2...Зсм. Готовая среда бледно-розового цвета.

В состав сухой среды Ресселя входит сухой питательный агар, индикатор BP, лактоза и глюкоза. Приготовленную среду разли­вают в стерильные пробирки и стерилизуют текучим паром два раза по 30 мин. Среду скашивают, оставляя столбик 2...2, 5 см. Готовая среда фиолетового или розовато-серого цвета. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С 18...20 ч.

Учет биохимических свойств сальмонелл на указанных сре­дах — визуальный, по изменению цвета среды. На среде Ольке­ницкого появление желтой окраски в скошенной части агара ха­рактеризует ферментацию лактозы и сахарозы; в столбике — глю­козы. Газообразование устанавливают по появлению пузырьков, разрывам агара или его отслоению от стенок пробирки. Об образо­вании сероводорода судят по почернению среды. При росте куль­туры, гидролизующей мочевину, среда Олькеницкого приобретает красно-малиновый цвет. На среде Ресселя определяют фермента­цию глюкозы в столбике по изменению окраски и лактозы в ско­шенной части. Цвет среды меняется в зависимости от индикатора, входящего в состав среды: индикатор Андреде дает малиновую ок­раску, а индикатор BP — синюю. Газообразование устанавливают также по появлению пузырьков и разрывам агара.

Для дальнейшего исследования отбирают культуры, не утилизи­рующие мочевину, ферментирующие глюкозу, не разлагающие са­харозу и лактозу, образующие сероводород. Такие культуры пересе­вают со среды Олькеницкого в среду Гисса с маннитом, в полужид­кий агар для определения подвижности и ставят пробу на индол. Дополнительно делают пересев на МПА, чтобы накопить чистую культуру возбудителя для постановки реакции агглютинации.

При выделении культур с ферментативными свойствами, ха­рактерными для представителей рода сальмонелл (ферментируют глюкозу, маннит, не утилизируют лактозу, сахарозу, не расщеп­ляют мочевину, не образуют индол, не разжижают желатину, ра­стут на агаре Симмонса, т. е. усваивают цитратно-аммонийные соли), проводят их серологическую идентификацию.

Антигенную структуру сальмонелл выявляют с помощью на­боров сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютинирующих сывороток в РА на стекле. Сыворотки выпускают наборами № 1 и № 2 в двух коробках (табл. 28).

Исследуемую культуру выращивают на скошенном мясо-пептонном агаре при 37...38 °С в течение 18...24 ч.

Первоначально культуру испытывают с О-комплексными сы­воротками. Для этого реакцию агглютинации на стекле ставят с каждой О-комплексной сывороткой, начиная с первой, до получения положительной реакции с двумя сыворотками (табл. 29).

 

Чтобы определить серотиповую принадлежность, сальмонеллы, отнесенные к определенной серогруппе, исследуют с Н-моносыво-ротками 1-й и 2- фазы. При выборе сывороток для реакции исхо­дят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой от­несена определяемая культура, с учетом вида животного.

Культуры сальмонелл, которые не удалось идентифицировать сыворотками из набора, следует направлять в Государственный институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Техника постановки РА: из флакона, не захватывая осадка бор­ной кислоты, пастеровской пипеткой набирают сыворотку, одну каплю которой наносят на предметное стекло. Бактериологической петлей в нее вносят 20...24-часовую исследуемую агаровую культуру сальмонелл. Для РА с О-сыворотками культуру берут с верхней час­ти агара, с Н-сыворотками — с нижней, вблизи конденсационной жидкости. Петлю с культурой увлажняют в капле сыворотки, затем культуру тщательно растирают рядом с каплей, смешивают с сыво­роткой и энергично (6... 10 раз) покачивают стекло круговыми дви­жениями. Агглютинация наступает не позднее 1...2мин. О-Агглютинат выглядит как плотные, с трудом разбивающиеся комочки и зернышки; Н-агглютинат — крупные, рыхлые, легко разбивающие­ся хлопья. Агглютинация проявляется в виде склеивания бактери­альной массы и полного или частичного просветления жидкости. При отрицательной реакции культура после тщательного смешива­ния с каплей сыворотки образует гомогенную взвесь.

Агглютинирующие адсорбированные О- и Н-сыворотки вы­пускают согласно серологической классификации бактерий рода сальмонелл наборами и отдельными рецепторами. Кроме монорецепторных О- и Н-сывороток производят поливалентную сальмонеллезную О-сыворотку против сальмонелл основных пяти групп (А, В, С, D, Е). Наборы О- и Н-сывороток выпускают двух видов. Узкий набор состоит из 28 рецепторов. Расширенный набор включает в себя 108 рецепторов.

Монорецепторные О- и Н-сыворотки применяют для иденти­фикации бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на предметном стекле, поливалентную — для отбора культур из первичных посевов.

Поливалентная сыворотка против сальмонелл основных групп содержит О-агглютинины против антигенов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 19, 26 и vi.

При агглютинации культуры с О-сывороткой определяют ее групповую принадлежность. Затем при помощи Н-сывороток со­ответствующей группы окончательно устанавливают тип иссле­дуемой культуры.

Сухие сыворотки перед употреблением растворяют в стериль­ном физиологическом растворе из расчета 2 мл на ампулу, что соответствует первоначальному объему сыворотки до высушивания. Растворенные сыворотки используют в реакции агглютина­ции на стекле. Методика постановки РА на стекле такая же, как и с комплексными сыворотками.

Биопроба. Метод применяют в необходимых случаях, напри­мер при выделении нетипируемых серологически сальмонелл. Исследуемую культуру вводят подкожно белым мышам по 0, 2...0, 3 мл при концентрации клеток (0, 5... 1) • 108/мл. В положи­тельных случаях животные гибнут в течение З...10 сут.

Серологическая диагностика входит в состав лабораторной и заключается в постановке РА. Используют све­жие сыворотки от животных или сыворотки, консервированные фенолом (до 0, 5%), со сроком их давности не свыше 15 дней. Антиген для реакции агглютинации выбирают в зависимости от вида животного, а именно: сыворотки от крупного рогатого скота исследуют с антигенами S. enteritidis (dublin) и S. typhimurium, от свиней — S. typhisuis или S. choleraesuis и S. typhimurium и т. д.

Для постановки реакции агглютинации готовят двукратное раз­ведение исследуемых сывороток карболизированным (0, 5%-м) физиологическим раствором, начиная с разведения 1: 25 и до 1: 3200. Сыворотку берут по 0, 5 мл каждого разведения.

При массовых исследованиях допускают постановку реакции в четырех разведениях (1: 50, 1: 100, 1: 200, 1: 400) с последующей про­веркой положительных проб в разведениях сыворотки до 1: 3200.

Одновременно ставят контроли: 1) с негативной сывороткой в тех же разведениях, что и исследуемые сыворотки; 2) с положи­тельными сыворотками до их предельного титра; 3) антиген с физиологическим раствором без сыворотки.

В пробирки вносят по 0, 5 мл соответствующего разведения сы­воротки. Затем во все пробирки (в том числе и контрольные) до­бавляют по 0, 5 мл антигена при концентрации клеток 5*108 мл. Штатив с пробирками тщательно встряхивают до получения рав­номерной суспензии и выдерживают в термостате при 37...38 °С 4...10 ч, затем оставляют при комнатной температуре на 14...20 ч, после чего проводят макроскопический учет реакции.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации в разведениях сыворотки 1: 200 и выше, при отрицательных ре­зультатах реакции агглютинации — в контрольных пробирках. Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1: 100 и ниже. При получении сомнитель­ной реакции сыворотку крови от этих животных исследуют по­вторно через 10... 15 дней, и в случаях, если титр не повысился, реакцию следует считать отрицательной. Оценивают реакцию аг­глютинации в крестах.

Возбудитель сальмонеллеза телят — S. enteritidis (dublin) может обусловливать гастроэнтерит у человека вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенной структуре относится к группе D1. Патогенен для белых мышей. Реже сальмонеллез телят мо­жет быть обусловлен S. typhimurium, который вызывает сальмо­неллез у водоплавающей птицы и у человека. По антигенной структуре входит в группу В.

Возбудители сальмонеллеза поросят — S. typhisuis (kunzendorf) или S. choleraesuis (suipestifer) помимо заболеваний у свиней мо­гут служить причиной пищевой токсикоинфекции у людей. По О-антигену отнесен к группе С1. Реже вызывает сальмонеллез S. typhimurium и S. dublin.

Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл — S. abortusequi (открыт в 1893 г.). Поголовье лошадей (в неблагополучном хозяй­стве) обследуют серологически (РА). Фекалии исследуют для вы­явления бактерионосителей. Показателем развития инфекцион­ного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1: 400. S. abortusequi по О-антигену входит в группу В. В слу­чае невыделения данной культуры из исследуемого материала целесообразно проверить материал на наличие бактериофага S. abortusequi.

Возбудитель сальмонеллеза овец — S. abortusovis. По О-антиге­ну отнесен к группе В. Реже сальмонеллез овец вызывают S. typhimurium, S. anatum.

Возбудитель сальмонеллеза птиц — S. pullorum (S. gallinarum). По антигену отнесен к группе D1. Сальмонеллез (пуллороз) про­текает остро, в септической форме с большим процентом гибели цыплят (и эмбрионов) — до 100% в первые недели жизни. У взрослой птицы пуллороз протекает чаще бессимптомно. Взрос­лое поголовье птицы обследуют серологическим методом крове - капельной РА с пуллорозным эритроцитарным антигеном. Саль­монеллез у птиц могут вызывать S. typhimurium, S. enteritidis, S. anatum, S. infantis и др.

Возбудитель сальмонеллеза водоплавающей птицы — S. typhimurium (наиболее часто), реже S. anatum и др. Болеют утя­та и гусята, реже цыплята. У утят и гусят сальмонеллез протекает остро в 6...20-дневном возрасте, птицы старше 2, 5-месячного возраста болеют хронически, взрослые — латентно.

Возбудитель сальмонеллеза пушных зверей — S. typhimurium, S. dublin, S. enteritidis, S. choleraesuis. Болеют серебристо-черные лисицы, песцы, нутрии, реже норки, еноты, соболи и речные бобры. Болезнь протекает остро, с высокой лихорадкой, энтери­том, истощением. У беременных животных наблюдают мертворождение или рождение нежизнеспособных щенков.

Биопрепараты. Концентрированную формолквасцовую вакци­ну против паратифа (сальмонеллеза) телят готовят из селекцио­нированного штамма S. dublin.

Вакцину против паратифа (сальмонеллеза) поросят готовят из трех штаммов в соотношении: S. choleraesuis — 50 %, S. typhimuriun — 25 %, S. dublin — 25 %. Активность вакцины про­веряют на голубях.

Ассоциированную (поливалентную) вакцину против парати­фа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят готовят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четырех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины прове­ряют на голубях и белых мышах.

Формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и па­ратифа пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет со­бой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмокалиевые квасцы и хлорид кальция.

Сухую живую вакцину против паратифа свиней из штамма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S. choleraesuis ТС-177, за­висимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках.

Вакцина против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S. dublin № 6.

Вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы.

Вакцина против сальмонеллеза свиней из супрессорного ревертанта.

Вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против саль­монеллеза овец.

Поливалентную антитоксическую сыворотку против парати­фа и колибактериоза телят, ягнят, овец и птиц получают из кро­ви волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным ан­тигеном, состоящим из 30 штаммов, 24 серогрупп эшерихий и 3 серотипов сальмонелл: S. dublin, S. typhimurium, S. abortusovis. Сыворотку контролируют на стерильность, безвредность и ак­тивность.

Поливалентную антитоксическую сыворотку против паратифа телят, поросят, ягнят, овец и птиц получают из крови волов-про­дуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, состо­ящим из четырех серотипов сальмонелл: S. dublin, S. typhimurium, S. abortusovis, S. choleraesuis. Сыворотку проверяют на стериль­ность, безвредность и активность.

Бактериофаг против паратифа и колибактериоза телят и бак­териофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, выде­ленных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных. В реактор в МПБ или бульон Хоттингера засевают суспензию бактерий и добавляют маточные фаги. Визуально оп­ределяют полноту лизиса бактерий, затем добавляют хинозол и фенол. Фаголизат фильтруют через стерилизующие пластинки. Проверяют на стерильность, безвредность и активность (по Аппельману).

Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 1*109/мл). Применяют для серологической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.

Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10%-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией S. gallinarum-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.

Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представля­ет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формали­ном и окрашенных кристаллвиолетом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной ди­агностики сальмонеллеза птиц.

Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формалинизированными антигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом ам­мония глобулины и проводят люминесцентное мечение очи­щенных глобулинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыво­ротку.

Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для экс­пресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмо­нелл, выделяемых от животных, из продуктов животного проис­хождения и объектов внешней среды.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Изучить культуральные, морфологические, тинкториальные и биохимические свойства бактерий из предварительно сделан­ных посевов на дифференциально-диагностических средах и МПА.

2. Приготовить мазки из колоний, окрасить их по Граму, сде­лать пересев из колоний на среду Ресселя или Олькеницкого.

3. С готовой чистой культурой сальмонелл поставить РА на стекле с О-комплексными и монорецепторными О- и Н-агглю-тинирующими сыворотками.

4. Учесть биохимические свойства сальмонелл на ПБДЭ.

Контрольные вопросы

1. Какие дифференциально-диагностические среды используют для культивирования сальмонелл?

2. Каков характер роста колоний сальмонелл на среде Эндо?

3. Какой материал направляют в лабораторию при подозрении на сальмонеллез
телят, поросят и птиц?

4. Какое количество сероваров входит в род Salmonella?

5. Какие антигены входят в состав сальмонелл?

 

Тема 31

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ ВЕРБЛЮДОВ И ЧЕЛОВЕКА, ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Изучить свойства возбудителей и схемы лабора­торной диагностики зооантропонозной чумы и псевдотуберкуле­за.

Оборудование и материалы. Культуры Y. pestis (вакцинный штамм) Y. pseudotuberculosis на МПА и в МПБ, готовые мазки из культур Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, биопрепараты.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Чума верблюдов и человека. Природно-очаговая болезнь. В ес­тественных условиях резервуаром возбудителя служат грызуны. Здоровых животных заражают переносчики, в первую очередь блохи. Из сельскохозяйственных животных наиболее чувстви­тельны верблюды. Болезнь характеризуется тяжелой интоксика­цией, поражением лимфатической системы, легких, тенденцией к септицемии.

Возбудитель чумы верблюдов и человека — бактерия Y. pestis, род Yersinia, семейство Enterobacteriaceae.

Лабораторная диагностика чумы верблюдов и человека основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии (разработаны и другие методы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и ме­тодом биопробы, идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свой­ствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют орга­ны, трупы грызунов, гной из бубонов, мокроту, кровь. Работа с чумным материалом разрешена только в специализированных лабораториях.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки окра­шивают по Граму. В препаратах возбудитель обнаруживают в форме овоидной или палочковидной клетки размером (0, 3...0, 5) х (1...3) мкм; располагается одиночно, парами, иногда короткими цепочками. Клетки грамотрицательные, часто с бипо­лярной окраской, без жгутиков, спор не образуют (рис. 97).

 

Рис. 97. К pestis в гное:

/ — клетки возбудителя; 2—лейкоциты

 

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 28...29 °С (диапазон 14...42 °С), рН 7, 2...7, 4, хорошо растет на обычных питательных средах.

Через 24 ч инкубирования при 37 °С на плотных средах обра­зует шероховатые, с фестончатым краем и желтовато-коричне­вым выпуклым центром колонии, напоминающие из-за прозрач­ного фестончатого края «кружевной платок» (рис. 98). В МПБ возбудитель образует пленку на поверхности среды, от которой спускаются нити, напоминающие сталактиты, на дне пробирки хлопьевидный осадок.

Возбудитель расщепляет глюкозу, мальтозу, маннит, галакто­зу, арабинозу, ксилозу до кислоты, желатину не разжижает, ин­дол не образует, выделяет каталазу.

При исследовании материала от грызунов необходи­мо дифференцировать от Y. pseudotuberculosis, который в отличие от Y. pestis образует уреазу и ферментирует рамнозу.

Помимо традиционного хода исследования применя­ют ускоренные методы обна­ружения возбудителя и его антигенов в исследуемом материале: иммунофлуоресценцию, ре­акцию торможения пассивной гемагглютинации (РТГА), реак­цию нарастания титра фага, РДП и др.

Биопроба. Метод применяют для выделения чистой культуры из материала, контаминированного посторонней микрофлорой. Для этого используют морских свинок, которым материал вводят подкожно. Не загрязненный другими бактериями материал вво­дят внутрибрюшинно. Загнивший нативный материал втирают морским свинкам в предварительно выбритый участок кожи на животе. После гибели животных (на третий-седьмой день) про­водят вскрытие с последующим бактериологическим исследова­нием внутренних органов.

Биопрепараты. Чумная живая сухая вакцина из штамма EV.

Химическая чумная вакцина.

Чумной бактериофаг.

Псевдотуберкулез (родентиоз). Инфекционная болезнь, пре­имущественно грызунов и птиц, характеризуется узелковым по­ражением паренхиматозных органов, сходным с изменениями при туберкулезе.

Возбудитель псевдотуберкулеза — бактерия Y. pseudotubercu­losis, род Yesrinia, семейство Enterobacteriaceae.

Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (прежде всего методом биопробы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и биопробой, идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментатив­ным, серологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют парен­химатозные органы, лимфатические узлы, трупы грызунов и птиц.

Микроскопия препаратов из исходного материала. По морфоло­гии и тинкториальным свойствам Y. pseudotuberculosis практичес­ки неотличим от Y. pestis.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Y. pseudo­tuberculosis — факультативный анаэроб, температурный оптимум 28...30 º С, рН 7, 2...7, 4. Свойства возбудителя варьируют в зависи­мости от температурного режима культивирования. К питатель­ным средам нетребователен.

На плотных средах при 22...28 °С через 24 ч образует мелкие (диаметр 0, 1...0, 5 мм) круглые, выпуклые, прозрачные, серова­то-желтоватые, блестящие колонии с приподнятым центром. При 37 °С может проявляться полиморфизм колоний, связан­ный с формированием колоний, выпуклых, с коричневатым центром и волокнистыми истонченными краями. При низких температурах (22 °С и ниже) образует жгутики, чем отличается от Y. pestis, при 37 °С неподвижен. В МПБ растет с равномер­ным помутнением среды и последующим выпадением хлопье­видного или вязкого осадка.







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 3158. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Шрифт зодчего Шрифт зодчего состоит из прописных (заглавных), строчных букв и цифр...

Картограммы и картодиаграммы Картограммы и картодиаграммы применяются для изображения географической характеристики изучаемых явлений...

Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...

Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...

Реформы П.А.Столыпина Сегодня уже никто не сомневается в том, что экономическая политика П...

Виды нарушений опорно-двигательного аппарата у детей В общеупотребительном значении нарушение опорно-двигательного аппарата (ОДА) идентифицируется с нарушениями двигательных функций и определенными органическими поражениями (дефектами)...

Особенности массовой коммуникации Развитие средств связи и информации привело к возникновению явления массовой коммуникации...

Основные структурные физиотерапевтические подразделения Физиотерапевтическое подразделение является одним из структурных подразделений лечебно-профилактического учреждения, которое предназначено для оказания физиотерапевтической помощи...

Почему важны муниципальные выборы? Туристическая фирма оставляет за собой право, в случае причин непреодолимого характера, вносить некоторые изменения в программу тура без уменьшения общего объема и качества услуг, в том числе предоставлять замену отеля на равнозначный...

Тема 2: Анатомо-топографическое строение полостей зубов верхней и нижней челюстей. Полость зуба — это сложная система разветвлений, имеющая разнообразную конфигурацию...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.029 сек.) русская версия | украинская версия