Преимущества РЦР перед другими методами
Для выявления нуклеиновой кислоты-мишени методом гибридизации in situ с применением радиоактивно меченного зонда необходимо, чтобы мишень присутствовала в анализируемом препарате в количестве нескольких тысяч копий. Нередко число аномальных последовательностей в препарате диагностически значимо, но меньше необходимого числа копий мишени, и гибридизация может дать ложноотрицательный результат. Для выявления уникальной нуклеотидной последовательности методом ПЦР достаточно 10 копий матрицы. К преимуществам полимеразной реакции нужно отнести следующее. 1. Метод прямой и позволяет достичь предельно возможной чувствительности (от нескольких копий до одного возбудителя в пробе). 2. Специфичность метода приближается к 100%. 3. Для ПЦР-анализа пригоден любой материал, в том числе и гистологические препараты. 4. Метод позволяет определять число копий возбудителя в пробе и тем самым наблюдать динамику. 5. Исследуемый материал может быть дезинфицирован химической или термической обработкой в момент его забора, и, следова- тельно, исключается возможность инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР. 6. Метод прост в исполнении, возможна его полная автоматизация. 7. Результаты получают через несколько часов, т.е. в течение одного рабочего дня.
|
Рис. 6.7. Сопоставление результатов ПЦР-РВ с калибровочной прямой: наблюдается рост количества ПЦР-продукта в каждой пробирке (а), определяется по имеющейся калибровке точное исходное количество образца в пробе (б)
