Определение жизнеспособности клеток

Определение жизнеспособности клеток производится методом суправитальной окраски 0, 1% раствором трипановой сини.

Hа предметное стекло наносят каплю взвеси клеток и 1 каплю 0, 1% раствора трипановой сини. Через 30-60 с окрашенную каплю взвеси покрывают покровным стеклом. Избыток суспензии удаляют промакиванием фильтровальной бумагой и под микроскопом подсчитывают число живых (неокрашенных) и погибших (синих) клеток на 100 кариоцитов. Выводят процент гибели клеток.

Раствор трипановой сини готовят заранее. Порошок растворяют в бидистиллированной воде из расчета получения 0, 2% раствора, который фильтруют. Это маточный раствор. Рабочий раствор приготовляют перед опытом: маточный раствор разбавляют 4, 25% раствором хлористого натрия до нужной концентрации (1 капля гипотонического физиологического раствора + 3 капли трипановой сини).

Вопросы и задания

1. Дайте определение инбредных животных.

2. Опишите принцип получения конгенных линий мышей.

3. Какие биологические материалы используются для исследования иммунной системы?

4. Перечислите основные этапы получения клеток костного мозга у мышей.

5. Перечислите основные этапы выделения клеток из периферических органов мышей.

6. Как подсчитать количество клеток в 1 мл клеточной суспензии и определить жизнеспособность клеток?

Глава 2 Методы разделения клеток периферической крови человека

Для изучения функциональной активности лимфоцитов и других клеток крови необходимы эффективные способы их разделения (рис. 2.1). Идеальные методы разделения характеризуются незначительной степенью потерь клеток при высокой степени очистки, сохранением физиологической активности выделенных клеток. В основе методов выделения клеток лежат два главных принципа.

1. Разделение клеток по их физическим свойствам, например по размерам, плотности или заряду.

2. Разделение клеток по поверхностным антигенам.

Рис. 2.1. Основные методы разделения клеток

Среди разнообразных способов разделения клеток крови наибольшее распространение получили гравитационные, основанные на различной удельной плотности клеток крови, которые различаются между собой следующим образом: эритроциты > нейтрофилы и эозинофилы > лимфоциты и моноциты > тромбоциты.