Исследование числа микробов, присутствующих в исследуемом материале в низкой концентрации

При низкой концентрации бактерий прямой посев исследуемой порции может быть неэффективен.

Поэтому необходимы дополнительные мероприятия по концентрации материала в малом объеме. С этой целью применяют:

а) метод флотации - основан на обработке исследуемого материала органическими растворителями, удельная плотность которых меньше воды. К порции исследуемого материала добавляют небольшое количество органического растворителя (ксилола, бензина), смесь энергично встряхивают и отстаивают. Бактерии, содержащие много липидов, аккумулируются в верхнем слое растворителя, который используют для дальнейших исследований;

б) метод фильтрации. Он заключается в пропускании определенного объема исследуемой среды (жидкого биологического материала, воды, воздуха) через мембранный фильтр с размерами пор 0, 2 - 0, 4 мкм, задерживающий бактерий, размер которых превышает диаметр пор мембраны. После этого мембрану накладывают на питательную среду в чашке Петри той стороной, на которой есть бактерии, плотно прижимают на 1-3- минуты и снимают. За это время на питательной среде образуется отпечаток бактерий с мембранного фильтра, дающих рост колоний. Определив их число и учтя объем пропущенного через фильтр материла, можно определить концентрацию микроорганизмов в жидких и газовых средах.

Мембранные ультрафильтры - ультрафильтрующие мембраны из коллоидных растворов нитроцеллюлозы, поликарбонатов или др. веществ, используемые для концентрации вирусов, бактерий, грибов, др. клеток или для освобождения от них жидкостей. Структура ультрафильтров представляет собой многослойную систему ячеек с " проломленными" стенками-порами. Фильтровальный материал укрепляют текстильной вкладкой или металлической сеткой. Мембранные ультрафильтры обладают высокой механической прочностью, химической устойчивостью, низкой гигроскопичностью. В практике применяют поликарбонатные мембранные ультрафильтры " Нуклеопор" (США), нитроцеллюлозные " Сынпор" (Чехия), мембранные ультрафильтры мытищинского комбината и ацетатцеллюлозные " Владипор" (Казань).

Этапы микрофильтрации: 1) выбор мембраны соответственно задачам исследования; 2) осмотр мембраны с целью установить отсутствие механических повреждений; 3) стерилизация мембраны двукратным кипячением в течение 15- 20 мин, текучим паром в чашке Петри между 2 листами фильтровальной бумаги 30 мин, автоклавированием при 0, 5 атм 15 - 20 мин, обработкой в камере, содержащей 10 % этиленоксида и 90 % углекислого газа, в течение 180 мин, погружением в 2 % р-р формальдегида на 24 ч или выдерживанием на протяжении такого же времени в эксикаторе с парами формальдегида, УФЛ; 4) закладка мембраны в стерильный фильтровальный аппарат стерильным пинцетом глянцевой стороной кверху; 5) фильтрация жидкости при использовании положительного или отрицательного давления. Объем фильтруемой жидкости должен быть не менее 20 мл; 6) если фильтрация проводится с целью освободить жидкость от бактерий, мембрану выбрасывают в дезинфектант; если в целях концентрации бактерий - их помещают нижней стороной на поверхность плотной питательной среды или свертывают и опускают в жидкую питательную среду.

Метод количественного посева имеет важно санитарное значение, поскольку его применяют для оценки качества питьевой воды.

При исследовании качества питьевой воды определяют ряд показателей, характеризующих присутствие микрофлоры:

а) коли-индекс - количество бактерий группы кишечной палочки в 1 л воды, 1 кг пищевого продукта или 1 г почвы. По международному стандарту коли-индекс- количество колиформных бактерий в 100 мл воды. Коли-индекс используют как показатель фекального загрязнения воды и пищевых продуктов, а следовательно, их пригодности в пищу;

б) коли-титр - наименьший объем воды в 1 мл или плотного вещества (почвы, пищевого продукта) в 1 г, в котором обнаруживаются бактерии кишечной группы по отечественному стандарту или колиформные бактерии по международному стандарту. Использую аналогично коли-индексу.

Результаты исследования клинического материала выражают число КОЕ в 1 мл исходного материала. Для этого необходимо регистрировать исходный объем материала.