Количественный и качественный учет микрофлоры воздуха

Количественный учет микрофлоры воздуха. Для исследования общего количества микроорганизмов в воздухе применяют наиболее простой, хотя и недостаточно точный, метод «оседания» (седиментационный метод), предложенный Кохом (1881). Стерильные чашки Петри с питательной средой (МПА (мясо-пептонный агар) – для бактерий, СА (сусловый агар) – для грибов) открывают в исследуемом помещении на 5 минут (чашки располагают на высоте, соответствующей уровню дыхания сидящего или стоящего человека). Следят за тем, чтобы при открывании крышки чашки Петри не было движения воздуха. После этого чашки закрывают и помещают на сутки в термостат при 37 °С, что дает возможность развиться бактериальной флоре. Затем чашки переставляют в термостат и выдерживают при температуре 25 °С. В таких условиях прорастают бактерии, требующие для своего развития более низкие температуры, а также плесневые грибы. Обычно опыт ставится в двух повторностях. Затем подсчитывают выросшие колонии микроорганизмов. Счет колоний на чашках производят с помощью прибора для счета колоний бактерий или лупы. Для лучшей видимости считают колонии на темном фоне (под чашку кладут темную бумагу), чашки помещают дном кверху. Каждую колонию отмечают на две чашки чернилами или тушью.

Седиментационный метод – самый простой метод для суждения о зараженности воздуха микроорганизмами, но он позволяет иметь лишь ориентированное представления о содержании микрофлоры в воздухе. С его помощью определяется только 35-60% микроорганизмов в воздухе. Хотя этот метод и не дает полного представления ни о количестве микроорганизмов, находящихся в воздухе, ни об их видовом разнообразии, однако с его помощью можно учесть микрофлору тяжелой оседающей пыли, которая не захватывается и не учитывается другими аспирационными методами. Метод не точен и абсолютно не пригоден для изучения атмосферного воздуха, где имеют место большие колебания в скорости его движения. Этот метод может быть использован для анализа микрофлоры воздуха в закрытых помещениях в тех случаях, когда отсутствуют более совершенные приборы или нет электроэнергии.

Используя данный метод можно рассчитать количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха. Обычно производят перерасчет по Омелянскому: допускают, что на площадь в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько бактерий, сколько их содержится в 10 л воздуха (0, 01 м³). Зная площадь чашки Петри, определяют количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха. Для этого: 1) определяют площадь агаровой пластинки в чашке Петри по формуле S= π х r² = 3, 14 х r² (радиус чашки Петри равен 0, 5 дм, соответственно, площадь агаровой пластинки равна 0, 785 дм²); 2) вычисляют количество колоний на площади 1 дм²; 3) пересчитывают количество бактерий на 1 м³ воздуха, умножая найденное количество колоний на площади 1 дм² на 100; 4) результаты определения микробного числа воздуха оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках; 5) обязательно учитывают, что полученные показатели занижены примерно в 3 раза.

После проведенного подсчета, при наличии в 1 м³ воздуха менее 250 клеток воздух считается чистым, 250–500 клеток – загрязненным в средней степени, при количестве клеток более 500 – загрязненным. По данным А. Ф. Войткевича, в 1м³ морского воздуха содержится 1–2 клетки, в таком же объеме воздуха в городском парке – 200, городской улице – 5 тыс., жилом помещении – 20 тыс., скотном дворе – более 1 млн. клеток.

Для исследования микрофлоры воздуха можно использовать различные аспирационные методы, например, аппарат Кротова, работа которого основана на принципе ударно-прибивного действия воздушной струи. Подобные методы наиболее надежны и точны.

При качественном анализе микрофлоры воздуха отмечают культуральные особенности роста микроорганизмов на плотных питательных средах, общее количество типов колоний, их морфологические особенности и количественное соотношение. Отдельные колонии микроскопируют с иммерсионной системой либо пересевают на дифференциально-диагностические питательные среды для выделения чистых культур микроорганизмов, видовой состав которых можно определить, используя специальные определители.