Спорообразующих бактерий

О развитии накопительной культуры судят визуально по характерным признакам изменения питательной среды, образованию пленки, выделению пигмента, появлению мути, образованию газов, а также по микроскопированию микроорганизмов на прижизненных и постоянных микробиологических препаратах.

Получение культуры сенной палочки (Bacillus subtilis)

Вариант 1. Помещают 1 г сена из разнотравья (мелко нарезают) в колбу объемом 100–150 мл и заливают 20–30 мл водопроводной воды, нагретой до 40–50 º С. Сено настаивают в течение 30 мин. За это время из сена экстрагируются вещества, которые служат питательным субстратом для бактерий. Через 30 мин сенной настой отделяют от сена фильтрацией, разливают в 2 пробирки (примерно по 5–7 мл), закрывают их ватными пробками и прогревают в кипящей водяной бане 15–20 мин. При этом лишь споры некоторых бактерий остаются жизнеспособными. Колбы помещают в термостат при температуре 30 º С на 7 суток.

Вариант 2. При втором способе, конические колбы на 100–150 мл заранее проваривают, кипятя в них воду 15–20 мин. Сено из разнотравья мелко нарезают и помещают в колбу объемом 500 мл, заполняя ее на ¼ объема, добавляют щепотку мела и кипятят 15–20 мин, пока среда не приобретает цвет настоя крепкого чая. Сенной отвар разливают в подготовленные конические колбы слоем 1, 0–1, 5 см (должен быть тонкий слой суспензии, поскольку ставим накопительную культуру аэробных спорообразующих бактерий), закрывают ватными пробками и помещают в термостат при температуре 22–25 º С либо вблизи радиатора отопления.

Характеристика культуры сенной палочки (Bacillus subtilis). Наблюдают на поверхности жидкости бактериальную пленку. Это культура сенной палочки (Bacillus subtilis), которая при старении, на 3–4-е сутки, становится серовато-зеленоватой. Другие микроорганизмы при этом вырастают редко и в небольших количествах.

При культивировании на плотной среде колонии сухие, бесцветные или серовато-белые, мелкоморщинистые или образующие бархатистый налет, расплывающиеся по поверхности агара и тогда имеющие по краям складки; край более или менее волнистый; плотно прилегают к агаровой среде. Клетки имеют форму палочки, короткие и тонкие, размером 3–5х0, 6 мкм; нередко соединены в длинные нити. Споры овальные (0, 9х0, 6 мкм), расположены без строгой локализации – эксцентрально или ближе к центру, но не строго центрально.

Получение культуры картофельной палочки (Bacillus subtilis var. mesentericus). Нарезают неочищенный клубень картофеля на среднего размера ломтики, помещают их в колбу объемом 100–150 мл, добавляют на кончике шпателя мел, заливают ломтики водопроводной водой почти доверху колбы. Колбы ставят на водяную баню и прогревают в кипящей водяной бане 10–15 минут. При этом вегетативные клетки бактерий, находящихся на поверхности клубней картофеля, погибают, а жизнеспособными обычно остаются лишь термостабильные споры. Затем колбы закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при 30 º С на 5–7 суток.

Характеристика культуры Bacillus subtilis var. mesentericus. Проверяют получение накопительной культуры спорообразующих бактерий по появлению на поверхности жидкой среды плотной морщинистой пленки культуры картофельной палочки. Окраска пленки может быть разной: беловато-серой, розоватой, желто-бурой, черной, что зависит от разновидностей культуры, получивших преимущественное развитие.На плотной средеколонии обычно плотно прилегают к ее поверхности, иногда срастаются со средой, тонкие, морщинистые, серовато-белые, кремовые или желто-бурые. Культура имеет много разновидностей. Клетки имеют форму палочки, тонкие, длинные и короткие, размером 3–10х0, 5–0, 6 мкм, одиночные или соединены в длинные нити. Споры овальные и продолговатые (0, 9х0, 5 мкм), могут располагаться в любой части клеток. При формировании спор клетки не раздуваются.