Одномолекулярное секвенирование в реальном времени
Суть: Идея метода состоит в определении последовательности ДНК за счет наблюдения за работой единичной молекулы ДНК-полимеразы в реальном времени. При этом ДНК-полимераза достраивает вторую цепь исследуемой молекулы ДНК, используя нуклеотиды, меченные различными флуоресцентными метками, регистрируя которые можно понять, какой нуклеотид ДНК-полимераза встраивает в настоящий момент. + Ионное полупроводниковое секвенирование Суть: В каждую микролунку на полупроводниковом чипе, содержащую одну подлежащую секвенированию одноцепочечную молекулу ДНК-матрицы и ДНК-полимеразу, последовательно заливаются немодифицированные A, C, G или Т dNTP.. Если введеный dNTP комплементарен следующим непарным нуклеотидом на матричной цепи, он включается в растущую комплементарную цепь с помощью ДНК-полимеразы. Если введенный dNTP не комплементарен, реакции полимеризации не происходит. Ион водорода, который выделяется в реакции, изменяет рН раствора, которое обнаруживается ISFET. Не прореагировавшие молекулы dNTP вымываются перед следующим циклом, когда будут введены другие виды dNTP.
СЕКВЕНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ (ПРАКТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ БЕЛКА, СТР 340+) Метод Эдмона – ранний метод определения аминокилсотной последовательности белка Подробно: Присоединение фенилизотиоцианата к альфа-аминогруппе затем от ФТК-производного под действием безводной кислоты отщепляется N-кольцевой остаток в виде 5’-гназолиона (определяем хроматографическим методом) + образуется укороченный пептид, содержащий в качестве N-кольцевой последующую аминокислоту.
|
