Микроскопирование
Первые сведения об общей организации и тонкой структуре клетки были получены с помощью оптических методов. По мере совершенствования оптических приборов и улучшения техники микроскопирования росли и наши знания о микроморфологии клетки и ее отдельных компонентов. Дальнейшее развитие световой микроскопии, а также ультрафиолетовой и электронной микроскопии позволило существенно повысить разрешающую способность оптических приборов темнопольная и фазово контрастная микроскопия облегчила наблюдение живой клетки. Несомненно, и поныне микроскопия, особенно электронная, в сочетании %о сложной предварительной обработкой биологического материала остается важнейшим методом исследования. Для получения дополнительных сведений о молекулярном уровне приходится прибегать к косвенным физическим и химическим методам, с помощью которых стало возможным выделять и исследовать отдельные клеточные компоненты. Novel (1972) описал технику счета бактериальных колоний путем микроскопирования их на чашках Петри диаметром 90 мл при увеличении 72. Поле зрения микроскопа составляет 7,065 мм, т. е. одна чашка содержит 900 полей. Подсчитывали число колоний на 180 полях. Разработанная методика позволяет подсчитать до 90 млн. бактерий в 1 мл без разведения суспензии с ошибкой около 47о-. Благодаря высокому разрешению, наличию различных препаративных методов и большому выбору соответствующей техники микроскопирования удается выявлять детали бактериальных структур. Например, с помощью солей тяжелых металлов, окружающих бактерию и проникающих в поверхностные неровности, получают контрастирование за счет дифференциальной задержки электронов. Этот эффект, известный как негативное контрастирование, аналогичен эффекту применения нигрозина в световой микроскопии. Однако если в клеточной стенке или мембране нет разрывов, позволяющих проникать контрастирующему красителю, с помощью этого метода нельзя увидеть никаких структур внутри цитоплазмы. В этом случае клеточные компоненты изучают после специального разрушения клеток, фракционирования структур и последующего негативного контрастирования. Улучшение техники микроскопирования, разработка методов окраски клеток, появление люминесцентных и электронных микроскопов дало возможность подробнее изучить строение и структурные элементы клеток микроорганизмов. В общих чертах строение клеток животных, растений и микроорганизмов одинаково.
Метод работы с пробами
Планктон Предварительно отобранные пробы разбавлялись водой до определённой концентрации, затем размешивались для равномерного заполнения воды объектами, отбирались ручным заборником на 10мл и помещались на счётную камеру. Путём микроскопирования осуществляись определение и подсчёт объектов, затем проба возвращалась в ёмкость для хранения.
Бентос
Из пробы сливалась вода, отфильтровывались объекты и помещались на счётную камеру. Путём микроскопирования осуществлялись определение и подсчёт объектов, затем объекты возвращались в ёмкость для хранения.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
Планктон
Бентос
|
