Лабораторная диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча

Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча.

Бактериоскопический метод имеет ориентировочное значение. Выявляют грамположительные кокки, расположенные в виде гроздей, что позволяет выбрать необходимые питательные среды.

Бактериологический метод – выделение чистой культуры и ее идентификация. Материал засевают на МЖСА или ЖСА и кровяной агар. Проводят учет лецитиназы, пигмента, гемолиза.

C колониями бактерий, выросших на МЖСА, проводят каталазный тест. Это позволяет отдифференцировать семейство Staphylococcaceae от семейства Streptococcaeae; так у стафилококков каталаза имеется, а у стрептококков отсутствует.

Устанавливают принадлежность бактерий к роду Staphylococcus. Стафилококки образуют пигмент, являются факультативными анаэробами, а микрококки – облигатные аэробы. Поэтому стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях (отмечается изменение цвета в столбике среды под слоем вазелинового масла). Также стафилококки способны окислять глицерин.

Установив принадлежность к роду Staphyloccocus, проводят видовую идентификацию стафилококков. Ведущий тест S.aureus – продукция плазмокоагулазы. Проводят посев культуры в цитратную плазму крови кролика. Отмечается коагуляция плазмы через 2-18 часов. При положительной реакции плазмокоагуляции, лецитиназной, гемолитической активности, золотистого пигмента штамм может быть отнесен к виду S.aureus.

При отрицательной реакции плазмокоагуляции ставят дополнительные тесты на наличие ДНКазы, ферментацию манита в анаэробных условиях, чувствительность к новобиоцину, определяют фосфатазу.

Для S. epidermidis характерны следующие тесты: чувствительность к новобиоцину, наличие фосфатазы, отсутствие окисления маннита; для S. saprophyticus – противоположные свойства.

Данные биохимической дифференциации стафилококков приведены в таблицах.

 

Таблица

Биохимическая идентификация рода Staphyloccocus

 

Микроорганизм	Плазмо-коагулаза	Ферментация маннита	Гемолиз	Летитиназа	Лмзоцимная активность	Определение ДНКазы
аэробно	анаэробно
S. aureus	+	+	+	+	+	+	+
S.epidermidis	-	+/-	-	+/-	-	-	-
S.saprophyticus	-	+/-	-	-	-	-	-

 

Таблица

Дифференциация стафилококков и микрококков

 

Свойства	Стафилококки	Микрококки
Размеры клеток	До 1 мкм	0,5-2 мкм
Окраска колоний	От золотистого до белого	От белого до розово-красного, оранжевого
Ферментация глюкозы в анаэробных условиях	+	+
Гемолиз	+	-
Окисление глицерина	+	-

 

Таблица

Дифференциальные признаки S.epidermidis и S.saprophyticus

Группа	Устойчивость к новобицину	Фосфатаза	Окисление маннита
S.epidermidis	-	+	-
S.saprophyticus	+	-	+

 

Далее проводят определение чувствительности к антибиотикам. Для выявления метициллин-резистентных стафилококков выполняют диско-диффузионный метод с антибиотиками оксациллином или цефокситином.

Более предпочтительным способом является идентификация MRSA методом ПЦР с определением гена mec2a

С целью эпидемиологического типирования изучают плазмидный профиль S.aureus: большие 2•10⁷ Да плазмиды кодируют образование бета-лактамаз и резистентность к эритромицину. Мелкие (3•10⁶ Да) плазмиды кодируют резистентность к тетрациклинам и хлорамфениколу.

При необходимости по эпидпоказаниям осуществляют фаготипирование.

Заключение об этиологической роли стафилококков делают на основании многократного обильного выделения однотипных по свойствам и фаготипу стафилококков.

Выделенная культура считается возбудителем инфекционного процесса при наличии следующих критериев: если из закрытых очагов, выделен один вид микроорганизма в количестве 10³ и более; при открытых процессах этиологически значимыми считают культуры, численность которых более 10⁵. Лабораторный анализ непременно включает определение чувствительности выделенных бактерий к антибиотикам.

Серологическая диагностика стафилококковой инфекции в настоящее время не практически используется. Для оценки состояния антитоксического иммунитета у больных определяют уровень антитоксических антител по лизису эритроцитов крови альфа-токсином. Ранее методом ИФА определялись антитела к тейхоевым кислотам различных видов стафилококков.