Лабораторная диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча
Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча. Бактериоскопический метод имеет ориентировочное значение. Выявляют грамположительные кокки, расположенные в виде гроздей, что позволяет выбрать необходимые питательные среды. Бактериологический метод – выделение чистой культуры и ее идентификация. Материал засевают на МЖСА или ЖСА и кровяной агар. Проводят учет лецитиназы, пигмента, гемолиза. C колониями бактерий, выросших на МЖСА, проводят каталазный тест. Это позволяет отдифференцировать семейство Staphylococcaceae от семейства Streptococcaeae; так у стафилококков каталаза имеется, а у стрептококков отсутствует. Устанавливают принадлежность бактерий к роду Staphylococcus. Стафилококки образуют пигмент, являются факультативными анаэробами, а микрококки – облигатные аэробы. Поэтому стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях (отмечается изменение цвета в столбике среды под слоем вазелинового масла). Также стафилококки способны окислять глицерин. Установив принадлежность к роду Staphyloccocus, проводят видовую идентификацию стафилококков. Ведущий тест S.aureus – продукция плазмокоагулазы. Проводят посев культуры в цитратную плазму крови кролика. Отмечается коагуляция плазмы через 2-18 часов. При положительной реакции плазмокоагуляции, лецитиназной, гемолитической активности, золотистого пигмента штамм может быть отнесен к виду S.aureus. При отрицательной реакции плазмокоагуляции ставят дополнительные тесты на наличие ДНКазы, ферментацию манита в анаэробных условиях, чувствительность к новобиоцину, определяют фосфатазу. Для S. epidermidis характерны следующие тесты: чувствительность к новобиоцину, наличие фосфатазы, отсутствие окисления маннита; для S. saprophyticus – противоположные свойства. Данные биохимической дифференциации стафилококков приведены в таблицах.
Таблица Биохимическая идентификация рода Staphyloccocus
Таблица Дифференциация стафилококков и микрококков
Таблица Дифференциальные признаки S.epidermidis и S.saprophyticus
Далее проводят определение чувствительности к антибиотикам. Для выявления метициллин-резистентных стафилококков выполняют диско-диффузионный метод с антибиотиками оксациллином или цефокситином. Более предпочтительным способом является идентификация MRSA методом ПЦР с определением гена mec2a С целью эпидемиологического типирования изучают плазмидный профиль S.aureus: большие 2•107 Да плазмиды кодируют образование бета-лактамаз и резистентность к эритромицину. Мелкие (3•106 Да) плазмиды кодируют резистентность к тетрациклинам и хлорамфениколу. При необходимости по эпидпоказаниям осуществляют фаготипирование. Заключение об этиологической роли стафилококков делают на основании многократного обильного выделения однотипных по свойствам и фаготипу стафилококков. Выделенная культура считается возбудителем инфекционного процесса при наличии следующих критериев: если из закрытых очагов, выделен один вид микроорганизма в количестве 103 и более; при открытых процессах этиологически значимыми считают культуры, численность которых более 105. Лабораторный анализ непременно включает определение чувствительности выделенных бактерий к антибиотикам. Серологическая диагностика стафилококковой инфекции в настоящее время не практически используется. Для оценки состояния антитоксического иммунитета у больных определяют уровень антитоксических антител по лизису эритроцитов крови альфа-токсином. Ранее методом ИФА определялись антитела к тейхоевым кислотам различных видов стафилококков.
|