ЛАБОРАТОРНА РОБОТА 4

(4 години)

 

«Кількісне визначення антитіл методом локального гемолізу в гелі»

 

План:

 

1. Антитіла та їх молекулярна структура. Антигенні властивості антитіл.

2. Просторова структура важких і легких ланцюгів і організація четвертинної структури антитіл. Доменна будова імуноглобулінів.

3. Активний центр антитіл та його організація. Імуноглобуліни та їх секреція.

Катаболізм імуноглобулінів.

4. Біосинтез молекул імуноглобулінів. Теорії утворення антитіл. Антитіла класів M, G, A, D, E.

5. Моноклональні антитіла.

6. Механізми зв’язування антигенів з антитілами. Значення компліментарності паратопа і епітопа. Афінність. Авідність.

7. Антиген як функціональний термін. Джерела і хімічна природа антигенів.

8. Специфічність і імуногенність. Фактори, що визначають антигенний потенціал і його реалізацію.

9. Антигени, гаптени, носії та їх хімічна природа.

10. Тимусзалежні та тимуснезалежні антигени.

11. Транспорт антигенів в лімфоїдну тканину.

 

Самостійна робота студентів:

1.Самостійно розчинити сироватки за інструкцією, що додається до набору моноспецифічних сироваток проти імуноглобулінів людини.

2. Приготувати камеру для заливання агару. Камеру підігріти до 57°С.

3. В хімічну пробірку внести 6 мл фіз.розчину, попередньо нагрітого на водяній бані до 56°С, до нього додати 1 мл розведеної анти сироватки одного з класів імуноглобулінів і з’єднати з 7 мл агару, нагрітого до 56°С. Суміш акуратно залити в камеру. На камеру нанести помітку відповідного класу імуноглобулінів. Процедуру повторити для всіх класів імуноглобулінів.

4. В товщі застиглого агару зробити лунки невеликого діаметру. В лунки за допомогою дозатора внести 2 мкл досліджуваної сироватки людини.

5. Пластини для виявлення імуноглобулінів класу А, G поставити у вологу камеру на 24 год; для виявлення імуноглобулінів класу М – на 48 год.

6. Після інкубації виміряти діаметр кілець преципітації та за калібрувальною кривою визначити кількість імуноглобулінів у досліджуваній сироватці.

7. Провести фарбування мазків крові (лаб. роб. №3): мазки фіксують метанолом 1 – 2 хв; потім нанести фарбу Романовського-Гімзе на 15 – 17 хв, змити у дист. воді. Промікроскопіювати з імерсією (´90): визначити відсоток Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів та О-клітин.

 

Література:

1. Ярилин А.А. Основы иммунологии. – М.: Медицина, 1999. – 608 с.

2. Галактионов В.Г. Иммунология. – М.: Нива России, 2000. – 488 с.

3. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. – М.: Медицина, 2000. – 432 с.

4. Беркало Л.В., Бобович О.В., Боброва Н.О. та ін. Методи клінічних та експериментальних досліджень в медицині. – Полтава: Полімет, 2003. – С.52 – 57.