Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

ДИФТЕРИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ





ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИГЕННЫХ СВОЙСТВ КОРИНЕБАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ С ПОМОЩЬЮ РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ В ГЕЛЕ

 

В основе метода определения токсигенности коринебактерий дифтерии (тест Элека) лежит процесс встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических антител (антитоксин) в плотной питательной среде. В местах оптимального количественного соотношения между токсином, продуцируемым коринебактериями, и антитоксином, нанесенным на полоску фильтровальной бумаги, происходит их взаимодействие с образованием преципитата в виде белой линии или «усов».

Токсигенность коринебактерий дифтерии определяют, как правило, в чистой культуре (отдельные колонии или культура со скошенного агара, или с пробы Пизу). Смесь колоний или культуры, загрязненные посторонней микрофлорой, могут также быть испытаны на токсигенность. При отсутствии, в этом случае, преципитата в агаровом геле, опыт следует повторить с выделенными чистыми культурами.

Для постановки пробы на токсигенность необходимо иметь: стерильные чашки Петри с ровным дном, питательную среду - агар Мартена или сухую коммерческую среду, стерильные полоски из фильтровальной бумаги размером 1,5 х 8 см, нормальную сыворотку крови крупного рогатого скота, противодифтерийную антитоксическую сыворотку или очищенный ферментолизом и специфической сорбцией дифтерийный антитоксин (антитоксин диагностический дифтерийный очищенный, сухой, изготовитель - НПО «Биомед», 614099, Пермь, ул. Братская 177, тел. 48-57-22), контрольный токсигенный штамм коринебактерий дифтерии 24-48-часового роста (для постановки пробы на токсигенность пересевается в условиях лаборатории каждые сутки).

Приготовление чашек для постановки пробы на токсигенность

При небольшом объеме работы питательный агар для определения токсигенности коринебактерий дифтерии целесообразно разливать в пробирки по 10 мл (количество, необходимое для приготовления одной чашки). Питательный агар, разлитый во флаконы, требует многократного расплавления, а длительное термическое воздействие значительно ухудшает его качества. Питательный агар расплавляют в водяной бане при 900 С, тотчас вынимают из бани, охлаждают до 500 С и добавляют 20% сыворотки крови крупного рогатого скота. Так, к 10 мл питательного агара добавляют 2 мл сыворотки крови крупного рогатого скота, перемешивают и выливают, соблюдая правила асептики, в стерильную чашку Петри, распределяют среду по дну осторожным вращением чашки. В центр чашки, на поверхность застывающего агара обожженным пинцетом помещают фильтровальную бумажку, пропитанную противодифтерийной антитоксической сывороткой или очищенным антитоксином. Чашку просушивают в термостате при 370 С в течение 15-20 мин, повернув ее вверх дном.

Чашки со средой для определения токсигенности (без фильтровальной бумажки) можно хранить в холодильнике в течение одних суток.

 

Приготовление бумажных полосок

 

Полоски фильтровальной бумаги нарезают размером 1,5 х 8 см, заворачивают по 2-4 штуки в пакетик и стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 30 мин. Сохраняют пакетики с бумажными полосками в стерильной крышке чашки Петри до 3-х недель.

Перед постановкой пробы на токсигенность фильтровальные бумажки обожженным пинцетом помещают в стерильную чашку Петри. На каждую полоску наносят 0,25 мл противодифтерийной антитоксической сыворотки или очищенного антитоксина, активностью 500 МЕ в 1 мл. Для удаления избытка сыворотки полоску прикладывают к стерильной чашке Петри.

 

Разведение противодифтерийной антитоксической сыворотки

 

Соблюдая правила асептики, противодифтерийную антитоксическую сыворотку или очищенный антитоксин переносят из ампул в стерильную пробирку. На пробирке указывают данные этикетки и срок хранения. Хранят сыворотку в холодильнике.

Сыворотка должна быть разведена стерильным физиологическим раствором до содержания 500 МЕ в 1 мл. Коммерческий препарат «Противодифтерийная антитоксическая сыворотка» может иметь различную активность (5000 МЕ, 10000 МЕ, 20000 МЕ) и различный объем.

 

Примеры разведения сыворотки

 

Пример 1. В ампуле содержится 10000 МЕ (в объеме 4,8 мл, как указано на этикетке коробки с ампулами), противодифтерийной антитоксической сыворотки. Для упрощения расчетов общий объем сыворотки можно принять за 50 мл. Следовательно, в 1,0 мл сыворотки содержится 2000 МЕ (10000 МЕ: 5 = 2000 МЕ). Чтобы получить 500 МЕ в 1 мл, следует 1 мл сыворотки развести в 4 раза, т.е. к 1 мл сыворотки добавить 3 мл стерильного физиологического раствора. При необходимости можно развести сыворотку в меньших объемах: к 0,1 мл сыворотки добавить 0,3 мл физиологического раствора или к 0,2 мл сыворотки добавить 0,6 мл физиологического раствора и т.д.

Пример 2. Разведение сыворотки можно выполнить другим способом. Если, например, в ампуле содержится 5000 МЕ сыворотки в объеме 2,5 мл, то 500 МЕ содержится в 0,25 мл сыворотки. К этому объему добавляют 0,75 мл стерильного физиологического раствора и получают разведение 500 МЕ в 1 мл.

Очищенный ферментолизом и специфической сорбцией дифтерийный антитоксин разведения не требует, т.к. в 1 мл этого препарата содержится 500 МЕ.

На пропитывание одной полоски фильтровальной бумаги требуется 0,25 мл сыворотки (100-125 МЕ). Разведенную сыворотку можно хранить до 7 дней в холодильнике.

 







Дата добавления: 2015-06-12; просмотров: 1964. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Картограммы и картодиаграммы Картограммы и картодиаграммы применяются для изображения географической характеристики изучаемых явлений...


Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...


Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...


Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Тема 5. Анализ количественного и качественного состава персонала Персонал является одним из важнейших факторов в организации. Его состояние и эффективное использование прямо влияет на конечные результаты хозяйственной деятельности организации.

Билет №7 (1 вопрос) Язык как средство общения и форма существования национальной культуры. Русский литературный язык как нормированная и обработанная форма общенародного языка Важнейшая функция языка - коммуникативная функция, т.е. функция общения Язык представлен в двух своих разновидностях...

Патристика и схоластика как этап в средневековой философии Основной задачей теологии является толкование Священного писания, доказательство существования Бога и формулировка догматов Церкви...

Характерные черты официально-делового стиля Наиболее характерными чертами официально-делового стиля являются: • лаконичность...

Этапы и алгоритм решения педагогической задачи Технология решения педагогической задачи, так же как и любая другая педагогическая технология должна соответствовать критериям концептуальности, системности, эффективности и воспроизводимости...

Понятие и структура педагогической техники Педагогическая техника представляет собой важнейший инструмент педагогической технологии, поскольку обеспечивает учителю и воспитателю возможность добиться гармонии между содержанием профессиональной деятельности и ее внешним проявлением...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия