Специальные методы обработки тканей.

1. Декальцинация. Применяется по отношению к плотным тканям (кость, зуб). Цель – извлечение солей извести. Вследствие этого объект становится мягким и пригодным к резке. Декальцинация всегда производится после фиксации. Объект помещают в 2-10% раствор азотной кислоты на несколько дней.

2. Импрегнация. Метод отложения солей тяжелых металлов на каких-либо структурах с целью их выявления. Применяют соли серебра, золота. Этот метод применяется для выявления нервных волокон, аргирофильных волокон (ретикулярных, преколлагеновых), клеточных границ, комплекса Гольджи.

3. Гистохимические методы исследования проводят с целью выявления содержания и локализации химических веществ, входящих в состав тканей, постановкой химической реакции непосредственно на срезе ткани. В результате реакции взаимодействия искомых групп или элементов исследуемого вещества с реактивом получается специфическое окрашивание. Пользуясь специальными реактивами, можно выявить аминокислотный состав белков, выявить наличие нуклеиновых кислот (ДНК, РНК), определить наличие микроэлементов, ферментов и т. д.

Например: для выявления трехвалентного железа ткань обрабатывают свежеприготовленной равной смесью 2% ферроцианида калия (желтая кровяная соль) и 2% соляной кислотой.

Участки, в которых локализуется трехвалентное железо, окрашиваются в синий цвет (берлинская лазурь).

Гликозаминогликаны (ГАГ) дают реакцию метахромазии – изменение основного цвета красителя при взаимодействии его с искомым веществом. При окрашивании толуидиновой синью, тионином (красители синего цвета) ГАГ дают вишнево-красную окраску. ДНК выявляется реакцией Фельгена, РНК – реакцией Браше, углеводные соединения – ШИК-реакцией и т.д.

Цитохимия - сочетание гистохимических методов с методом электронной микроскопии – позволяет изучать локализацию химических веществ на субклеточном и молекулярном уровнях.

4. Иммуноцитохимический(иммунофлюоресцентный) метод – основан на реакции антиген-антитело. Каждая клетка организма имеет специфический антигенный состав. Антитела обладают высокой специфичностью в отношении антигенов, что позволяет использовать их для выявления специфических белков. Антитела окрашивают флюоресцирующими красителями и после свзывания их с определенной структурой, препарат изучают в люминесцентном микроскопе.

Антитела можно использовать для изучения антигенных структур на ультрамикроскопическом уровне. Для этого антитела метят электронно-плотными частицами, например коллоидным золотом.