Авторадиография.

Меченые атомы широко используются в цитологии для изучения химических процессов в клетке. Например: для изучения биосинтеза белка и нуклеиновых кислот, проницаемости оболочки, локализации веществ в клетке и т. д.

Для этого используются соединения, в которые введена радиоактивная метка. В молекуле меченого вещества, например, аминокислоты или углевода, один из атомов замещается атомом того же вещества, но радиоактивного, т. е. радиоактивным изотопом. Благодаря тому, что эти атомы ведут себя в организме также, как и не обладающие радиоактивностью, но при этом испускают радиоактивные лучи, их можно легко обнаружить, применяя фотографический метод.

В цитологии используются изотопы водорода – тритий 3Н, изотоп углерода – 14С, фосфора 32Р, серы 35S, йода и др., которые входят в состав органических соединений. Вводят изотопы в организм животных с пищей, в виде инъекций или же в питательную среду при культивировании тканей. Они включаются в обмен веществ. Доза устанавливается опытным путем и не должна изменять нормальный обмен веществ. Через разные промежутки времени после введения меченых веществ фиксируются кусочки тканей и органов (смесь Кариуа или спирт-уксусная кислота 3:1). Из фиксированного материала готовят парафиновые срезы, на поверхность которых после удаления парафина наносят тонкий слой чувствительной и фотографической эмульсии. Эта ядерная эмульсия характеризуется очень мелким размером зерен, их однородностью и гораздо большим насыщением желатина, чем обычная фотографическая эмульсия.

Препараты с нанесенной на них фотоэмульсией экспонируется в темноте при температуре 4 градуса, а потом промываются и закрепляются также, как и обычные фотографии.

Во время экспозиции препаратов изучение радиоактивных изотопов, которые включились в те или иные структуры клетки, оставляет след от пробега радиоакт. частиц в слое фотоэмульсии. В процессе проявления зерна, которые оказались в местах пробега радиоакт. частиц, восстанавливаются проявителем до металлического серебра. Последние имеют черный цвет и выявляются после проявления в виде зерен, которые находятся в слое фотоэмульсии над теми клетками и структурами, в которые включился радиоактивный изотоп. Такие препараты называют радиоактографами. После проявления и закрепления радиоактографы хорошо промывают в воде, а затем окрашивают одним из гистологических красителей.

 

 

Контрольные вопросы

1. Методы исследования, используемые в современной гистологии, цитологии и эмбриологии.
2. Витальные методы исследования. Культивирование in vivo и in vitro.
3. Основные принципы приготовления препаратов для световой микроскопии.
4. Этапы приготовления постоянного гистологического препарата.
5. Виды микропрепаратов.
6. Общая характеристика и классификация гистологических красителей.
7. Гистохимические методы исследования.
8. Сущность метода импрегнации, декальцинирования, авторадиографии.

 

Вопросы, вынесенные на СРС

1. Основные принципы приготовления препаратов для электронной микроскопии.
2. Количественные методы исследования.
3. Понятие об иммунофлюоресцентном, цитоспектрофотометрическом,

ауторадиографическом методах и их использование.

 

Основная литература

1. Луцик О.Д., Іванова А.Й., Кабак К.С. Гістологія людини. Львів. Мир. 1992. С.5-11..
2. Гистология / Под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. М.: Медицина, 2001. С.16-23.
3. Гистология / Под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. М.: Медицина, 1989.С. 9-14.

Дополнительная литература

1. Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии / Под. Ред. Ю.И.Афанасьева. М.: Высшая школа. 1990. С. 15-22.
2. Напханюк В.К., Сервецкий К.Л. Практикум по цитологии, общей гистологии и эмбриологии. Учебное пособие. Одесса, 1999. С. 16-23.
3. Практикум по гистологии, цитологии и эмбриологии / Под. Ред. Н.А.Юриной, А.И.Радостиной. М.: Изд-во УДН. 1989. С. 5-11.
4. Методические рекомендации кафедры.
5. Напханюк В.К. Основы цитологии, общей гистологии и эмбриологии (курс лекций).Одесса.1999. С.14-18