Физико-химические методы исследования

 

2.3.1 Определение размера частиц, их полидисперсности и поверхностного

заряда

Средний размер наночастиц, их полидисперсность и

ζ-потенциал

определяли методом фотонной корреляционной спектроскопии на приборах

Malvern Zetasizer 3000HSA (Malvern Instruments Ltd., Malvern, UK) при

температуре 298 К и при значении угла рассеивания 900, Zetanano (Malvern

Instruments) при температуре 298 К при значении угла рассеивания 1730, и

Мalvern Zetasizer Nano S90.

Полученные наночастицы выделяли осаждением на центрифуге (centrifuge;

Mistral 3000E (MSE) Serial No. S692/03/095, ultracentrifuge; Kontron Instruments.

Centrikon T-2060), сушили до постоянной массы на воздухе, затем в вакуумном

шкафу при 318 К.

Размер полученных частиц также определяли методами трансмиссионной и

сканирующей электронной микроскопии на трансмиссионном электронном

микроскопе марки CM 12 transmission electron microscope (Philips) и FEI Tecnai

20, type Sphera TEM instrument equipped with a LaB6 filament operating at 200 kV

при температуре -103 К и на сканирующем электронном микроскопе (СЭМ)

(Phenom, FEI company). Держатель сканирующего микроскопа с двух сторон

покрывали проводящей углеродной лентой, затем на нее помещали каплю

полученной эмульсии; образец сушили на воздухе, затем покрывали тонким

 

 

слоем золота.

Выход НЧ определяли гравиметрически.

Взвешивали пустые

-4

 

0,05 мл раствором наночастиц и выпаривали в сушильном шкафу в течении 2-х

часов при температуре 318 К, затем тигли снова взвешивали.

 

2.3.2 Определение молекулярной массы полимеров и их состава

Мокулярную массу полимера определяли методами гель-проникающей

хроматографии и масс-спектрометрии.

Полимер из эмульсии выделяли под вакуумом на приборе Freeze-drier

Christ. Alpha 1-4 LD plus Salmenkipp. Образцы готовили из полимерных

наночастиц, высушенных до постоянной массы, растворением их в

тетрагидрофуране.

Измерения молекулярной массы и молекулярно-массового распределения

полимеров проводили на приборах SEC 3 (“Alliance”) WAT270886 Waters 2695

(Singapore) Separations Module с УФ-детектором (a Waters 486 UV-detector), при

длине волны 254 нм (объем инъекции – 0,05 мл) и PerSeptive Biosystems,

Voyager-DETM STR, BiospectrometryTM Workstation.

Полученные полимеры также исследовали методами ИК- и 1H ЯМР-

спектроскопии и термогравиметрии. Образцы исследуемых веществ для ИК-

спектроскопии предварительно готовили с KBr. Измерения проводили на

приборе a Bio-Rad Infrared Excalibur 6000 FTIR spectrometer.

Для 1Н ЯМР-спектроскопии образцы готовили в дейтерированном

хлороформе (CDCl3). Измерения проводили на приборе Varian 400 MHz

spectrometer.

Термогравиметрический анализ полимеров осуществляли на приборе TGA

Q500 (Perkin Elmer Pyris 6) instrument в потоке азота (25 см3/мин), нагревая

образец со скоростью 283 К/мин. Масса образца – 4-5 мг. Нагревание

проводили в интервале температур 298-873 К.

 

2.3.3 Определение степени связывания лекарственного препарата

Степень связывания лекарственного препарата с полимером определяли

кондуктометрическим и УФ-спектрофотометрическим методами.

А) Предварительно в мерной колбе объемом 100 мл приготовили раствор

лекарственного препарата концентрации 100 мкг/мл в воде. Затем из

приготовленного раствора отбирали аликвоты, переносили в мерные колбы

объемом 25 мл и готовили серию растворов «Арглабина» с концентрациями 5.0;

10.0; 20,0; 40,0; 60,0; 80,0; 100,0 мкг/мл и фиксировали электропроводность.

Данные для построения калибровочного графика приведены в таблице 1.

Далее строили градуировочный график и по нему определяли

концентрацию несвязавшегося лекарства. Поскольку электропроводность

растворов является величиной аддитивной, определили электропроводности

компонентов системы и сделали соответствующие поправки. Степень

связывания препарата рассчитывали по разности исходного и несвязавшегося

 

49

алюминиевые тигли на весах с точностью 1*10 мг, наполняли каждый тигель

 

лекарственного вещества. Для концентраций лекарства 5-60 мкг/мл изменение

значений удельной электропроводности подчиняется линейному уравнению

у=86,353х+1,4692. Корреляционные коэффициенты равнялись 0,997.

 

Таблица 1

 

-

 

Данные для построения калибровочного

 

графика

диметиламиноарглабина гидрохлорида по электропроводности

 

Электропроводность растворов измеряли в термостатируемой ячейке (293

К) объемом 25 мл. на приборе Conductivity meter Type OK-102 (Hungary) №1182

и ООО «Эконикс-Эксперт», ИНН/КПП 7728209000/772801001 (Москва),

снабженный платиновыми электродами.

 

Б)

 

Количество лекарства в растворе определяли УФ-

спектрофотометрически на приборе U3000 Spectrophotometer (λ=204 нм)

(Hitachi). Растворы образцов пропускали через колонки Sephadex (Sigma

Chemical Co. DE-52) и промывали смесью этанол: вода в пропорции 1:5,7.

По полученным данным (таблица 2) строили калибровочный график (при

длине волны λ=204 нм) и расчитывали содержание несвязавшегося Арглабина.

В этом случае изменение значений характеризуется следующим уравнением y =

0,8266х-0,0254. Корреляционные коэффициенты равнялись 0,997.

 

Таблица 2 – Данные для построения калибровочного графика для «Арглабина»

 

Степень связывания лекарства с полимером определяли после

центрифугирования (13500 об/мин) наночастиц при комнатной температуре в

течение 1 часа. Измерения проводили на приборе Hewlett Packard 8453 UV-Vis-

spectrometer (89090A) при длине волны λmax = 268 нм.

Калибровочную кривую строили по данным, приведенным в таблице 3.

50

№п/п С («Арглабина»), мкг/мл -4 χпракт, ·10, См/см -4 χтеор, ·10, См/см   5,0 2,343 2,014   10,0 2,67 2,333   20,0 3,51 3,088   40,0 4,59 4,707   60,0 7,461 7,946   80,0 13,16 12,953   100,0 28,1 27,375

№, п/п СЛВ, мг/мл Апракт. Атеор.           0,125 0,136 0,13   0,25 0,250 0,26   0,5 0,450 0,52   1,0 0,841 1,04

 

Таблица 3

 

-

 

Данные

 

для

 

построения

 

калибровочного

 

графика

 

для

капреомицина сульфата

 

В работе использовали кварцевые кюветы толщиной 10 мм (2) марки No.

100-QS (Quartz Suprasil) (при длине волны λ=268 нм) и 2 мм (1) марки No. 110-

QX (Quartzglas Suprasil 300) (Hellma). В этом случае изменение значений

характеризуется следующим уравнением y = 26,516х-0,0048. Корреляционные

коэффициенты равнялись 0,9998 (10 мм) и 0,9997 (2 мм).

 

2.3.4 Определение содержания этанола методом газовой хроматографии

(ГХ)

Количество этанола, выделившегося в среду определяли на приборе Varian

450-GC Gas Chromatograph (Malasia), Model: CP-8400. S/N: GC0811B360

(Varian CP – Autosampler) при длине волны 211 нм. Калибровочную кривую

строли по данным, приведенным в таблице 4 (использовали кварцевую кювету

толщиной 2 мм).

 

Таблица 4 – Данные для построения калибровочного графика для этанола

 

По градуировочному графику расчитывали количество этанола,

выделившегося в систему. Изменение значений характеризуется следующим

уравнением y = 0,0006х-0,0002. Корреляционные коэффициенты равнялись

0,998.

 

2.3.5 Исследование деструкции полимолочной кислоты

вискозиметрическим методом

Навеску полимолочной кислоты, иммобилизованную стрептомицином (0,1

г) поместили в химический стакан, растворили в 10 мл дистиллированной воды

и оставили набухать на 24 часа. Затем вискозиметр Оствальда установили в

 

51

№, п/п СЛВ, мг/мл Апракт. Атеор.           0,001625 0,03957 0,04   0,003125 0,07809 0,08   0,00625 0,15596 0,16   0,0125 0,32388 0,32   0,0250 0,66109 0,64

№, п/п СЭТ, мг/мл Апракт. Атеор.             0,005832 0,005     0,013354 0,0125     0,027463 0,025     0,056182 0,050

 

термостате, нагретом до 310±0,1 К, и через широкое колено вискозиметра

налили 10 мл исследуемого раствора и проводили измерения времени

истечения испытуемых растворов. Затем измерения осуществляли через

определенные промежутки времени.

В качестве растворителя использовали бидистиллированную воду.

Для определения вязкости раствора полимера измеряли время истечения

равных объемов раствора (τ) и растворителя (τ0) через капилляр визкозиметра.

Относительную вязкость рассчитывали по формуле:

 

 от н 

;

; 0