Лабораторные работы. Лаборатоpная работа. Устройства и приборы, применяемые в биохимической лаборатории

Лаборатоpная работа. Устройства и приборы, применяемые в биохимической лаборатории. Правила работы с ними.

Студенты под руководством преподавателя знакомятся с проведением исследований в биохимической лаборатории, а также с правилами пользования пипетками, центрифугой, термостатом, фотоэлектроколориметром и рефрактометром.

Работа с микропипетками включает ряд навыков и умений: сменять наконечник, правильно использовать 2 упора хода поршня (первый упор – для точного отмеривания заданного количества, второй упор – для внесения образца в пробирку или колбу). Перед внесением пробы убедиться, что в отобранном образце нет пузырьков воздуха. В пипетках с вариабельным объемом требуемый объем устанавливается путем вращения лимба с цифровым индикатором.

 

Рекомендуемая литература

Основная

1 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 69-73.

2 Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 15-22.

3 Марри, Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 16-20.

 

 

Занятие 2 Дата: _________________

 

Строение и функции белков

Цель занятия: Изучить структуру и физико-химические свойства белков. Научиться определять содержание общего белка в плазме крови биуретовым методом.

 

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1 Основные правила техники безопасности при работе в химической лаборатории.

2 Строение и классификацию альфа-аминокислот.

3 Кислотно-основные свойства аминокислот. Реакции на их функциональные группы.

4 Уровни структурной организации белка.

5 Особенности строения пептидной связи.

6 Качественные реакции на белки и пептиды.

7 Комплексные соединения (комплекс меди в биуретовой реакции).

Студент должен уметь:

1 Проводить качественные реакции на белки и пептиды.

Структура занятия

Теоретическая часть

1.1 Введение в биохимию. Краткая история биохимии. История отечественной биохимии. Общая характеристика обмена веществ. Понятие об анаболизме, катаболизме и метаболизме. Значение биохимии для врача.

1.2 Белки – важнейшие компоненты организма. Функции белков, строение, классификация и свойства аминокислот. Обзор уровней структурной организации белковой молекулы. Молекулярная масса белков. Форма и размеры белковой молекулы.

1.3 Принципы определения структуры белка:

1.3.1 Кислотный гидролиз белка;

1.3.1.1 Разделение аминокислот с помощью ионообменной хроматографии;

1.3.1.2 Количественный анализ полученных фракций;

1.3.2 Определение аминокислотной последовательности в белках и олигопептидах;

1.3.2.1 Ферментативное расщепление пептидов (с пепсином, трипсином, химотрипсином, папаином);

1.3.2.2 Химическое расщепление пептидов (с бромцианом);

1.3.2.3 Определение С-концевых аминокислот (с карбоксипептидазами);

1.3.2.4 Определение N-концевых аминокислот (дансил-хлоридом, динитрофторбензолом, фенилизотиоцианатом);

1.3.2.5 определение первичной структуры белка (аминокислотной последовательности);

1.3.2.6 методы пептидных карт («метод отпечатков пальцев»).

1.3.3 Изучение пространственной структуры белковой молекулы (вторичная, третичная, четвертичная структуры):

1.3.3.1 Рентгеноструктурный анализ.

1.3.3.2 Изучение трехмерных моделей белка (Protein Data Bank).

1.3.4 Представление о нативно-развернутых белках – функционально-активной форме белков в клетке.

 

Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторные работы.

2.3 Проведение контроля конечного уровня знаний.

 

Задачи

1 Рассмотрите указанные группы аминокислот и отметьте, какие из них являются гидрофобными:

а) тир, асп, глу; б) ала, лиз, сер; в) иле, лей, лиз; г) вал, лей, ала; д) арг, гли, цис?

2 Многие белки, содержащие 2 и более доменов, обнаруживают гомологию аминокислот. Эти белки образуются путем:

а) посттрансляционной модификации (процессинга); б) генетических изменений; в) дупликации генов и их слияния; г) аллостерической кооперации; д) транспептидных образований.

3 Остатки каких аминокислот в белках-гликопротеидах ковалентно связывают углеводы? Напишите пентапептид с этими аминокислотами (-ала- X -трп- Y -гли), где X и Y – названные аминокислоты.

4 Остатки каких аминокислот в белках-гистонах обладают положительным зарядом? Напишите пентапептид с этими аминокислотами (-ала- X -мет- Y -гли), где X и Y ‑ названные аминокислоты.

5 К фибриллярным белкам относятся:

а) альбумины; б) гистоны; в) коллагены; г) глобулины.