Количественное определение.
Подлинность. 1. Прокаливание (ГФХ). Выделение бурых паров оксида азота (II); сухой остаток приобретает желтый цвет (Bi2O3): 4Bi(O)NO3 → 2Bi2O3↓ + 4NO2↑ + O2↑. 2. Образование черного осадка сульфида висмута в солянокислой среде (ГФХ): 2Bi(O)NO3 + 3Na2S +4HCl → Bi2S3↓ + 2NaNO3 + 4NaCl + 2H2O. 3. Реакция с йодидом калия в сернокислой среде (ГФХ). Образование йодида висмута (черный осадок), растворимого в избытке реактива с образованием оранжевого раствора: Bi(NO3)3 + 3KI → BiI3↓ + 3KNO3, BiI3 + KI → K[BiI4]. 4. Реакция со щелочным раствором гидрокисламина гидрохлоридом (выпадение черного осадка металлического висмута): 2Bi(NO3)3 + NH2OH → 2Bi↓ + 3N2↑ + 6HNO3 + 6H2O. Количественное определение. 1. Комплексонометрическое титрование. Титрант – ЭДТА, индикатор – пирокатехиновый фиолетовый,ксиленоловый оранжевый среда – HNO3.
Bi³⁺ + H₆ Jnd → Bi H₃ Jnd + 3H⁺ Bi H₃ Jnd + [ЭДТА]2Na → [Bi ЭДТА]Na + H₆ Jnd Красный желтый Расчет ведут по Bi₂O₃, должно быть не менее 79,0-82,0 % Специфический показатель качества – кислотность водного извлечения. 5 г лекарственного вещества взбалтывают с 75мл воды 30 минут → настаивают 6 часов → фильтруют → проверяют реакцию среды по фенолфталеину титрованием 0,1M NaOH. На титрование должно быть использовано не более 1,5 мл.
Микробиологическая чистота:
ИСПЫТАНИЕ НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ ЧИСТОТУ
Лекарственные средства (таблетки, капсулы, гранулы, растворы, экстракты, сиропы, мази и др.), не стерилизуемые в процессе производства, могут быть контаминированы микроорганизмами и поэтому должны быть испытаны на микробиологическую чистоту.
Таблица 13
Тест - микроорганизмы, используемые для определения антимикробного действия лекарственных средств и ростовых свойств питательных сред
------------------T---------------------------------T------------ ¦ N по Каталогу ¦ ¦ ¦ ¦ штаммов ¦ ¦Питательная ¦ ¦ Всесоюзного ¦ Тест - штаммы ¦ среда ¦ ¦музея патогенных ¦ ¦ N ¦ ¦бактерий ГИСК им.¦ ¦ ¦ ¦ Л.А.Тарасевича ¦ ¦ ¦ +-----------------+---------------------------------+------------+ ¦ 010011 ¦Bacillus subtilis ATCC 6633 ¦ 1 ¦ ¦ 010014 ¦Bacillus cereus ATCC 10702 ¦ 1 ¦ ¦ 240533 ¦Escherichia coli ATCC 25922 ¦ 3 ¦ ¦ ¦ ¦ 6 ¦ ¦ ¦ ¦ 7 ¦ ¦ 190155 ¦Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ¦ 9 ¦ ¦ 201108 ¦Staphylococcus aureus ATCC 6538-P¦ 10 ¦ ¦ ¦ ¦ 8 ¦ +-----------------+---------------------------------+------------+ ¦N в коллекции ¦ ¦ ¦ ¦патогенных ¦ ¦ ¦ ¦грибов НИО ¦ ¦ ¦ ¦глубоких микозов ¦ ¦ ¦ ¦Ленинградского ¦ ¦ ¦ ¦ГИДУВ ¦ ¦ ¦ +-----------------+---------------------------------+------------+ ¦ 259 ¦Candida albicans ATCC 885-653 ¦ 2 ¦ L-----------------+---------------------------------+-------------
Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах. Испытание проводят в асептических условиях, применяя приведенные методы и питательные среды для контроля всех видов нестерильных лекарственных средств, а также сырья, используемого в их производстве. Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, и консерванты, входящие в состав некоторых нестерильных лекарственных средств, могут подавлять рост отдельных видов микроорганизмов в условиях проведения испытания. Во избежание неправильной оценки результатов испытания определяют действие лекарственного средства в отношении следующих тест - микроорганизмов: Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans, указанных в табл. 13. Определение антимикробного действия лекарственного средства. Пять образцов лекарственного средства по 1 г (мл) каждый разводят в соотношении 1:10 фосфатным буферным раствором рН 7,0 (два образца), средой N 3 (один образец) и средой N 8 (два образца). Культуры Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus выращивают на жидкой среде N 1 при температуре от 30 до 35 град. С в течение 18-20 ч, культуру Candida albicans - на жидкой среде N 2 при температуре от 20 до 25 град. С в течение 48 ч. Культуры разводят 1:1000 стерильным 0,9% раствором натрия хлорида изотоническим, вносят по 1 мл взвеси каждого тест - штамма (в отдельности) в приготовленные образцы лекарственного средства в буферном растворе (Bacillus subtilis, Candida albicans), в среде N 3 (Escherichia coli) и в среде N 8 (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus). Для выявления микроорганизмов используют методы, приведенные в данной статье. в случае отсутствия роста тест - штаммов на соответствующих питательных средах отмечают антимикробное действие лекарственного средства. Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют различные методы: 1) увеличивают разведение лекарственного средства, взяв больший объем растворителя; 2) добавляют необходимое количество соответствующего специфического инактиватора, нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства, но не угнетающего рост микроорганизмов (например, пенициллиназу - для пенициллинов и цефалоспоринов, пара - аминобензойную кислоту - для сульфаниламидов); 3) комбинируют методы 1 и 2; 4) вводят неспецифические инактиваторы в питательные среды, нейтрализующие антимикробное действие лекарственного средства (например, 4% твина-80, 0,5% соевого лецитина); 5) если все вышеперечисленные методы неэффективны, а лекарственное средство растворимо, используют метод мембранной фильтрации; 6) если в связи с природой лекарственного средства нельзя использовать метод мембранной фильтрации, а все вышеперечисленные методы устранения его антимикробного действия в отношении данного тест - штамма неэффективны, этот вид испытания не проводят. Отбор и приготовление проб лекарственных средств для испытаний. От каждой серии лекарственного средства (независимо от ее объема) отбирают среднюю пробу не менее 50 г (мл), состоящую из равных разовых проб, взятых из минимум 10 разных упаковок. Для одного анализа лекарственного средства используют отдельные образцы по 10 г (мл) для каждого из описанных далее разделов исследования. Всего для проведения одного анализа используют 30 г (мл) лекарственного средства. в том случае, когда возникает необходимость подтвердить несомненность результатов, проводят повторное испытание только по данному разделу исследования, используя образец в количестве 10 г (мл). Для ряда лекарственных средств (антибиотиков, мягких лекарственных форм и др.) отбирают от каждой серии среднюю пробу не менее 15 г, состоящую из равных разовых проб, взятых из не менее чем 10 разных упаковок. Для одного анализа используют образцы по 3 г (мл) для каждого раздела исследования. Всего для проведения одного анализа используют по 9 г (мл) лекарственного средства. При повторении испытания по одному из разделов исследования используют образец в количестве 3 г (мл). Для лекарственных средств в аэрозольной упаковке, пленок полимерных лекарственных и др. отбор и приготовление проб проводят согласно указанию в частных статьях. в зависимости от физических свойств лекарственной формы образец для анализа готовят в виде раствора, суспензии или эмульсии: - твердые лекарственные формы, которые трудно растворяются, измельчают с помощью соответствующего оборудования и суспендируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 или соответствующей жидкой питательной среде, рекомендованной для определенного вида испытания; - жидкие лекарственные формы, а также твердые формы, которые быстро и практически полностью растворяются в фосфатном буферном растворе рН 7,0 или соответствующей питательной среде в разведении 1:10, готовят в виде растворов или суспензий; - мягкие лекарственные формы, нерастворимые в воде, эмульгируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 с помощью стеклянных бус и минимального количества подходящего стерильного эмульгатора, указанного в соответствующей статье (например, твин-80), применяя механическое встряхивание и нагревание до температуры не более 45 град. С в случае необходимости. Приготовленные разведения образцов используют для определения общего числа бактерий и грибов в 1 г (мл) лекарственного средства и установления отсутствия бактерий семейств Еnterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus.
Количественное определение микроорганизмов
Испытание проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри диаметром 90-100 мм. Образец лекарственного средства в количестве 10 г (мл) растворяют, суспендируют или эмульгируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 так, чтобы конечный объем раствора (суспензии, эмульсии) был 100 мл. Посевы просматривают ежедневно. Определение общего числа бактерий. Приготовленный раствор (суспензию, эмульсию) образца вносят по 1 мл в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры от 45 до 50 град. С среды N 1. Быстро перемешивают содержимое пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15-20 мл застывшей питательной среды N 1. Быстрым покачиванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара. После застывания среды чашки переворачивают и инкубируют в течение 5 сут при температуре от 30 до 35 град. С. Через 48 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают число бактериальных колоний на двух чашках, находят среднее значение и, умножая его на показатель разведения, вычисляют число бактерий в 1 г (мл) образца. Для получения достоверных результатов учитывают только те чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний. Если при разведении образца 1:10 нет роста, результаты отмечают следующим образом: "В 1 г (мл) лекарственного средства (сырья) менее 10 бактерий". Если число колоний на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших последовательных разведений образца (1:100, 1:1000 и т.д.), выбирая для посева разведение, наиболее соответствующее указанному выше уровню. Определение общего числа грибов. Испытание проводят двухслойным агаровым методом, описанным выше, используя среду N 2. Посевы инкубируют в течение 5 сут при температуре от 20 до 25 град. С. Через 72 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на двух чашках, находят среднее значение и, умножая его на показатель разведения, т.е. на 10, вычисляют число грибов в 1 г (мл) образца. в случае, если число колоний грибов на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших разведений образца. На чашке учитывают все колонии грибов, даже если их число менее 30. Примеси. Допустимые:Хлориды, соли щелочных и щелочноземельных металлов, карбонаты, серебро. Недопустимые: карбонаты, сульфаты, соли аммония, медь, свинец, висмут, теллур. Хлориды,сульфаты, соли аммония, висмут, свинец – обнаружение по ГФ
|
