Основные методы исследования генетики человека

1. Сбор сведений о родственниках у пробанда (человека, обратившегося к врачу-генетику).

2. Составление родословной.

3. Анализ родословной.

Метод применяется для установления наследственного характера признака, типа наследования, генотипов членов родословной, пенетрантности гена.

Для построения родословных используется система символов, предложенная в 1931 г. английским ученым Юстом (рис.17).

При построении родословных необходимо соблюдать следующие правила:

· необходимо выяснить по собранному анамнезу число поколений;

· родословная начинается с пробанда;

· каждое поколение нумеруется римскими цифрами слева;

· символы, обозначающие особей одного поколения, располагаются на горизонтальной линии и нумеруются арабскими цифрами.

Анализ родословной позволяет выявить следующие типы наследования признаков: аутосомно-доминантный; аутосомно-рецессивный; сцепленный с Х-хромосомой (с полом) доминантный; сцепленный с Х-хромосомой (с полом) рецессивный; голандрический (сцепленный с Y-хромосомой).

Аутосомно-доминантный тип наследования:

· Больные встречаются в каждом поколении.

· Болеют в равной степени и мужчины, и женщины.

· Больной ребенок рождается у больных родителей с вероятностью 100%, если они гомозиготны; 75%, если они гетерозиготны.

· Вероятность рождения больного ребенка у здоровых родителей 0%.

Рис 17. Символика, используемая при составлении родословных

Аутосомно-рецессивный тип наследования:

· Больные встречаются не в каждом поколении.

· Болеют в равной степени и мужчины, и женщины.

· Вероятность рождения больного ребенка у здоровых родителей 25%, если они гетерозиготны; 0%, если они оба или один из них гомозиготен по доминантному гену.

· Часто проявляется при близкородственных браках.

Сцепленный с Х-хромосомой (с полом) доминантный тип наследования:

· Больные встречаются в каждом поколении.

· Болеют в большей степени женщины.

· Если отец болен, то все его дочери больны.

· Больной ребенок рождается у больных родителей с вероятностью 100%, если мать гомозиготна; 75%, если мать гетерозиготна.

· Вероятность рождения больного ребенка у здоровых родителей 0%.

Сцепленный с Х-хромосомой (с полом) рецессивный тип наследования:

· Больные встречаются не в каждом поколении.

· Болеют в основном мужчины.

· Вероятность рождения больного мальчика у здоровых родителей 25%, больной девочки — 0%.

Голандрический (сцепленный с Y-хромосомой) тип наследования:

· Больные встречаются в каждом поколении.

· Болеют только мужчины.

· Если отец болен, то все его сыновья больны.

· Вероятность рождения больного мальчика у больного отца 100%

Близнецовый метод (предложен в 1876 г. Ф. Гальтоном для изучения генетических закономерностей на близнецах.

Суть метода:сравнение признаков у различных групп близнецов, исходя из их сходства (конкордантности) или различия (дискордантности).

Этапы метода:

1. Составление выборки близнецов из всей популяции.

2. Диагностика зиготности близнецов.

3. Установление соотносительной роли наследственности и среды в формировании признака.

Для оценки роли наследственности и среды в формировании и развитии признака используют формулу Хольцингера:

Н = ( КМБ%-КДБ%)/100%-КДБ%

где Н — доля наследственных факторов,

КМБ% и — конкордантность монозиготных близнецов в процентах

КДБ% – конкордантность дизиготных близнецов в процентах

Если Н больше 0,5, то в формировании признака большую роль играет генотип, если Н меньше 0,5, то большую роль играет среда.

Цитогенетический метод — это изучение кариотипа с использованием микроскопии.

Этапы метода:

1. Получение и культивирование клеток (лимфоциты, фибробласты) на искусственных питательных средах.

2. Добавление в питательную среду фитогемагглютинина для стимуляции клеточного деления.

3. Остановка деления клетки на стадии метафазы добавлением колхицина.

4. Обработка клеток гипотоническим раствором NaCl, вследствие чего разрушается клеточная оболочка и получается «россыпь» хромосом.

5. Окрашивание хромосом специфическими красителями.

6. Микроскопирование и фотографирование хромосом.

7. Составление идиограммы и ее анализ.

Метод позволяет:

· диагностировать геномные и хромосомные мутации;

· определить генетический пол организма.

Биохимические методы. Причиной большинства наследственных моногенных заболеваний являются дефекты обмена веществ, связанные с ферментопатиями (нарушениями структуры ферментов, участвующих в реакциях об-мена). При этом в организме накапливаются промежуточные продукты обмена, поэтому, определяя их или активность ферментов с помощью биохимических методов, можно диагностировать наследственные болезни обмена веществ (генные мутации). Количественные биохимические методы (нагрузочные тесты) позволяют выявить гетерозиготное носительство патологического рецессивного гена.

Дерматоглифический анализ — это изучение гребешковой кожи человека (кожи подушечек пальцев, ладонной стороны кистей и подошвенной стороны стоп), где сильно выражен сосочковый слой дермы.

Метод применяется:

а) для установления зиготности близнецов;

б) как экспресс-метод диагностики врожденного ком понента некоторых наследственных заболеваний.

Обычно при геномной патологии отмечается сочетание некоторых показателей: радиальные петли на 4 и 5 пальцах, четырехпальцевая борозда, главный ладонный угол от 60° до 80° и др.

Химические методы основаны на качественных цветных химических реакциях. Используются для предварительной диагностики наследственных болезней обмена веществ. Как скрининг-тест диагностики фенилкетонурии используется метод смачивания мочой ребенка полосок бумаги, пропитанной 10% раствором РеС1₃или 2,4 динитрофенил-гидразина. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты появляется зеленоватое окрашивание фильтровальной бумаги.

Определение Х- и У- полового хроматина. Для исследования используются клетки буккального эпителия или лейкоциты. А'-хроматин определяется при окрашивании препарата ацеторсеином, а У-хроматин — при окрашивании акрихинипритом. Эти методы позволяют выявить число половых хромосом в кариотипе (число А'-хромо-сом всегда на одну больше, чем число глыбок А¹-хроматина, число У-хромосом равно числу глыбок У-хрома-тина); установить генетический пол особи, диагностировать хромосомные болезни пола (в комплексе с другими методами).

Методы пренатальной (дородовой) диагностики наследственных болезнейпозволяют установить наследственные дефекты плода на ранних стадиях беременности. С их помощью возможно задолго до рождения ребенка определить заболевание, и если необходимо прервать беременность.

Основными показателями к проведению пренатальной диагностики являются:

· Точно установленное наследственное заболевание в семье.

· Возраст матери выше 35 лет, отца — от 40 лет.

· Наличие в семье заболевания, сцепленного с полом.

· Наличие структурных перестроек хромосом у одного из родителей (особенно транслокаций и инверсий).

· Гетерозиготность обоих родителей по одной паре аллелей при аутосомно-рецессивном заболевании.

· Наличие в анамнезе беременной длительной работы на вредных для здоровья производствах или проживания в местах с повышенным радиационным фоном и др.

· Повторные спонтанные прерывания беременности или рождение ребенка с врожденными пороками развития, сахарный диабет, эпилепсия, инфекции у беременной, лекарственная терапия.

Методы пренатальной диагностики можно разделить на:

1) Просеивающие: позволяют выделить женщин, имеющих повышенный риск рождения ребенка с врожден­ной патологией или наследственной болезнью. Методы доступны для широкого применения и относительно недороги. К просеивающим методам относят:

—определение концентрации α-фетопротеина (АФП);

—определение уровня хорионического гонадотропина человека (ХГЧ);

—определение уровня несвязанного эстриола;

—выявление ассоциированного с беременностью плазменного белка А;

—выделение клеток или ДНК плода из организма матери.

2) Неинвазивные: методы обследования плода без оперативного вмешательства. В настоящее время к ним относится ультразвуковое исследование плода (УЗИ). УЗИ можно применять как при просеивающем, так и при уточняющем методах. Накопленные данные показывают, что УЗИ не приносит вреда плоду. В некоторых странах УЗИ проводят всем беременным. Это позволяет предупредить рождение 2— 3-х детей с серьезными врожденными пороками развития на 1 000 новорожденных, что составляет примерно 30% всех детей с такой патологией.

3) Инвазивные:методы основанные на анализе генетического материала клеток или тканей плода. Проводятся по строгим показаниям. К инвазивным методам относят:

- биопсия хориона и плаценты (для цитогенетических, биохимических исследований и анализа ДНК);

- амниоцентез (забор амниотической жидкости плода для диагностики генных, хромосомных и геномных мутаций);

- кордоцентез (взятие крови из пуповины с целью ранней диагностики наследственных болезней крови);

- фетоскопия (введение фиброоптического эндоскопа в полость амниона с целью осмотра плода, плаценты, пуповины и др);