Работа 4. Влияние температуры на проницаемость клеточных мембран для бетацианинаЦель работы: Определить влияние температуры на проницаемость мембран для бетацианина по степени выделения его в различные инкубационные среды. Объекты, реактивы, оборудование: корнеплод столовой свеклы; 0, 5 М раствор сахарозы; пробковое сверло диаметром 5 мм; лезвие, линейка; воронка Бюхнера; пробирки; пипетки; термостаты с температурой 35 и 45° С, ФЭК или спектрофотометр.
Краткие сведения: Пигмент столовой свеклы б етацианин — относительно большая, хорошо растворимая в воде молекула, находящаяся в клеточном соке. Чтобы попасть во внешнюю среду, молекула бетацианина должна пройти через тонопласт, основной цитоплазматический матрикс и плазмалемму. Диффузия бетацианина из вакуоли в среду может проходить достаточно быстро при действии различных факторов или агентов, вызывающих изменение проницаемости мембраны. Измеряя оптическую плотность инкубационной среды через определенный промежуток времени, можно оценить степень воздействия данного фактора на проницаемость мембран. Этот простой и быстрый метод, использующийся обычно в прикладных исследованиях при изучении действия какого-либо вещества или фактора на биологические объекты. Ход работы: Из корнеплода столовой свеклы сверлом вырезают столбики ткани диаметром 5 мм, с помощью лезвия и линейки разрезают их на миллиметровые кусочки, отбирая одинаковые по цвету. Отсчитывают 60 дисков, которые для удаления остатков клеточного сока течение 15—20 мин промывают водопроводной водой на воронке Бюхнера. В три пробирки наливают по 10 мл воды, в три другие — по 10 мл сахарозы. В каждую пробирку помещают по 10 дисков свеклы. Две пробирки (одна с водой, другая с сахарозой) оставляют при комнатной температуре, две другие помещают на водяную баню с температурой 35°С, остальные также помещают на водяную баню при 45° С и фиксируют время. В течение 1 ч через каждые 10—15 мин в пробирках измеряют выход бетацианина в раствор. Для этого из опытной пробирки пипеткой отливают раствор в чистую пробирку и после измерения оптической плотности выливают раствор в ту же опытную пробирку, стараясь не терять жидкость. Измерение плотности проводят на ФЭКе с зеленым светофильтром (кюветы 0, 5 см) или спектрофотометре λ = 535 нм. Полученные результаты заносят в итоговую таблицу.
Таблица 1
Постройть график зависимости оптической плотности раствора от времени. Сделайте выводы.
|
