Ход работы. А. Приготовление раствора серной кислоты

А. Приготовление раствора серной кислоты. В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают около 300 мл дистиллированной воды и при постоянном помешивании добавляют 50 мл серной кислоты. После охлаждения доливают водой до метки. Раствор устойчив.

Б. Приготовление раствора реакционной смеси. В мерную колбу вместимостью 100 мл количественно переносят содержимое пробирки сухой реакционной смеси и растворяют его примерно в 60 мл дистиллированной воды при нагревании 40-50⁰С. После охлаждения добавляют 1 мл раствора соли железа трехвалентного и доливают водой до метки. Раствор стабилен при комнатной температуре в течение 2 недель. Наличие небольшого количества нерастворимого осадка не мешает определению.

В. Приготовление рабочего раствора. Приготовляют смешением 1 доли раствора реакционной смеси с 1 долей раствора серной кислоты. Ежедневно готовят свежий рабочий раствор.

Г. Приготовление раствора ТХУ 50 г/л (для депротеинирования). 10г ТХУ растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Раствор устойчив.

Д. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови (без депротеинирования). Образцы: сыворотка (плазма) крови. В пробирки внести реактивы по следующей схеме:

 

	Холостая проба, мл	Калибровочная проба, мл (DК)	Опытная проба, мл (D0)
Сыворотка (плазма) крови	–	–	0, 01
Калибровочный раствор мочевины	–	0, 01	–
Рабочий раствор	2, 00	2, 00	2, 00

 

Содержимое пробирок тщательно перемешивают, отверстия закрывают алюминиевой фольгой и пробирки помещают точно на 10 минут в кипящую водяную баню. Затем пробирки быстро охлаждают в потоке холодной воды и измеряют оптическую плотность при 510нм (490-540нм, зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 1, 0 или 0, 5см. Параллельно обрабатывают калибровочный раствор. Окраска устойчива в течение 15 минут.

Е. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови (с депротеинированием). Образцы: сыворотка (плазма) крови липимическая или гемолизированная, цельная кровь.

В пробирки внести реактивы по следующей схеме:

 

	Холостая проба, мл	Калибровочная проба, мл (DК)	Опытная проба, мл (D0)
Раствор ТХУ	0, 1	0, 5	0, 5
Сыворотка (плазма) крови	–	–	0, 05
Калибровочный раствор мочевины	–	0, 05	–
Перемешать и центрифугировать 10 минут при 3000 об/мин
Надосадочная жидкость	–	0, 1	0, 1
Рабочий раствор	2, 0	2, 0	2, 0

 

Далее проводят определение, как при анализе без депротеинирования.

Содержания мочевины производят по формуле:

,

где: С – содержание мочевины в опытной пробе, ммоль/л; D₀ – оптическая плотность опытной пробы; D_К – оптическая плотность калибровочной пробы; 8, 0 – содержание мочевины в калибровочном раствора, ммоль/л.

Примечания: при содержании мочевины в крови свыше 17 ммоль/л пробу следует развести дистиллированной водой и анализ провести повторно. Результат умножить на разведение.

При использовании кюветы другого объема расход реактивов может быть пропорционально изменен при сохранении соотношения проба/рабочий раствор 1: 100.