Ход работы. А. Приготовление рабочих растворов

А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.

Б. Приготовления калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.

В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0, 9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0, 1 мл крови (или 0, 45 мл и 0, 05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.

Для проведенения анализа на КФК в пробирки внести 2, 0 мл рабочего раствора и добавить по 0, 2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10мм, и по 0, 4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5мм.

При использовании FP-901 в кюветы внести 0, 7 мл рабочего раствора и 0, 1 мл надосадочной жидкости.

Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37⁰С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25⁰С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.

После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10мм при длине волны 500 (490-540)нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации.

Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:

где С – концентрация глюкозы, моль/л; Е_О – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; Е_СТ – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; 10 – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л.