Выделение анаэробных клетчаткоразрушающих бактерий

 

Для получения накопительной культуры анаэробных клетчаткоразрушающих бактерий используют питательную среду Имшенецкого. Состав среды (г/л дистиллированной воды):

NaNH₄HPO₄ – 1, 0

KH₂PO₄ – 0, 5

K₂HPO₄ – 0, 5

MgSO₄ – 0, 4

NaCl – 0, 1

MnSO₄

- 1 капля 1%-ного раствора

FeSO₄

пептон – 5, 0

СаСО₃ – 2, 0

фильтровальная бумага – 15, 0

рН среды – 7, 0-7, 4

 

Питательную среду разливают высоким слоем в большие пробирки и в каждую пробирку нарезают 2-3 полоски фильтровальной бумаги длиной 6-8 см, шириной 0, 5 см. Пробирки с питательной средой стерилизуют в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20 минут. Пробирки заражают комочком почвы или навоза. Часть пробирок помещают в термостат при температуре 30-35^оС для выделения мезофильных форм, остальные выдерживают в термостате при 60-65^оС для накопления термофильных клетчаткоразрушающих бактерий.

 

 

Рисунок 4 - Анаэробные клетчаткоразрушающие бактерии. Clostridium оmеlianskii. Среда Имшенецкого. Карбо­ловый фуксин.

 

При 60^оС через 3-4 суток в пробирках бурно начинается процесс разрушения клетчатки, жидкость пенится, выделяются газы. Полоски фильтровальной бумаги желтеют, ослизняются, постепенно превращаясь в аморфную массу, и оседают на дно. Брожение заканчивается на 8-10-е сутки. При температуре 30-35^оС клетчатка разрушается медленнее, и процесс заканчивается через 2-3 недели.

Разрушенные массы клетчатки подвергают микроскопическому анализу. Микробиологической петлёй разрушенную клетчатку переносят на предметное стекло в каплю жидкости из пробирки и делают мазок.

Мазок окрашивают фуксином или генцианвиолетом и микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90.В поле зрения микроскопа видны длинные палочки, спорулирующие клетки типичной плектридиальной формы и свободнолежащие споры.