Выполнение работы. На стандартном листе хроматографической бумаги (11×11 см) вырезают от края к центру полоску шириной не более 1 см (“хвостик”) и укорачивают его на 1,5

На стандартном листе хроматографической бумаги (11× 11 см) вырезают от края к центру полоску шириной не более 1 см (“хвостик”) и укорачивают его на 1, 5 см (рис. 10).

Пробу исследуемого раствора в 2-3 приема наносят в центр листа у основания “хвостика” с помощью микрошприца. После каждого нанесения пробы пятну дают подсохнуть. Диаметр пятна на листе не должен превышать 3 мм. На дно чашки Петри наливают 10-15 см³ подвижного растворителя, лист хроматографической бумаги с нанесенной пробой кладут на чашку Петри, отпустив “хвостик” (не перегибая его) в растворитель, и накрывают лист такой же чашкой Петри.

 

Рис. 10. Круговая хроматография на бумаге:

а, б, в – зоны разделенных компонентов смеси (а - Fe³⁺, б - Co ²⁺, в - Ni ²⁺); 1 – квадрат хроматографической бумаги; 2 – вырезанная полоска (“хвостик”), спускаемая в подвижную фазу; 3 – проба разделяемой смеси; 4 – чашка Петри.

 

Растворитель по “хвостику” поднимается на лист и пере двигается по бумаге радикально. Движение зон разделяемых веществ также происходит радикально, при этом зоны приобретают форму расширенных дуг. Когда растворитель пройдет по бумаге 2/3 пути до стенок чашки Петри, хроматографирование приостанавливают, хроматограмму вынимают и высушивают в вытяжном шкафу. Для проявления хроматограммы ее окрашивают из пульверизатора насыщенным ацетоновым раствором роданида аммония. При этом зона железа (III) окрашивается в красно-бурый цвет, а кобальта (II) – в голубой цвет. После полсушивания хроматограммы измеряют R_f - индекса для железа и кобальта.

Далее с помощью кисточки смачивают аммиачным раствором диметилглиоксима участок бумаги между зоной кобальта (II) и стартовой линией (ближе к зоне кобальта, стараясь не задеть его синюю зону). Проявляется зона никеля (II), окрашенная в малиновый цвет. Хроматограмму подсушивают и измеряют R_f – индекс для Ni ²⁺.

Расчет результатов анализа

Результаты измерений высоты поднятия центра хроматографической зоны (пятна) данного компонента, высоты поднятия фронта растворителя заносят в таблицу, рассчитывают величины R_f – индексов анализируемых веществ и проверяют полученные данные у преподавателя (лаборанта).

 

Вопросы к отчету по теме «Бумажная хроматография»

1. На чем основано разделение веществ методом хроматографии на бумаге?

2. Какие существуют виды бумажной хроматографии?

3. Каковы этапы качественного анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге?

4. Какова методика количественного определения аминокислот с помощью хроматографии на бумаге?