I II III IV

28

18

Рис. 9. Схема расположения аминокислот на хроматограмме:

I - смесь № I; II - смесь № 2; 1У - смесь №3; Ш - стандартная

смесь аминокислот

Очерченные участки бумага вырезают и помещают в пробирки, номера которых должны соответствовать номерам пятен на хроматограммах. В каждую пробирку наливают из бюретки по 10 мл 75 %-ного раствора этилового спирта, насыщенного сульфатом меда (к 500 мл этилового спирта добавляют 0, 2 мл насыщенного раствора сульфата меди). Пробирку закрывают пробкой и, периодически перемешивая, добиваются полного перехода кирпично-красной окраски (медной соли сине-фиолетового Руэмана) с бумаги в раствор. На это уходит 15-20 мин. Абсорбцию (оптическая плотность) стандартного и испытуемого растворов измеряют на фотоэлектрокалориметре с зеленым светофильтром (540 нм). В поток сравнения устанавливают кювету с 75%-ным раствором этилового спирта с сульфатом меди.

Количественное содержание аминокислот в исследуемом растворе рассчитывают по соотношению экстинкций исследуемой и стандартной проб.

Пример расчета. Допустим, что в стандартной смеси содержится 1, 8 мг глицина в I мл, на стартовую полосу нанесено 0, 02 г этого стандартного раствора. Следовательно, на хроматограмму поступило (1, 8× 0, 02) = 0, 036 мг глицина. Условимся далее, что абсорбция окрашенных растворов составила 0, 288 для стандарта и 0, 336 для неизвестной смеси. Тогда содержание глицина в исследуемой смеси, нанесенной на хроматограмму, составит (36´ 0, 336): 0, 288=42 мкг. Если далее принять, что исследуемая смесь нанесена на хроматограмму в количестве, например 0, 0250 г, то содержание глицина в 1 мл исследуемого раствора составит (42: 0, 0250) = 1680 мкг, или 1, 68 мг/мл.

Оформите результаты собственного эксперимента, сделайте по ним выводы.

Лабораторная работа №15

Разделение ионов Fe³⁺, Co ²⁺, Ni ²⁺