Определение редуктазы с помощью резазурина

Эта проба служит для определения количества бактерий в молоке (по ГОСТ 9225 – 84) спустя 2 ч после его выдаивания.

Приготовление раствора резазурина. 100 мг резазурина растворить в 200 мл прокипяченной, охлажденной до 25 ± 2⁰С дистиллированной воды. Срок хранения основного раствора в склянках из темного стекла не более 30 сут при температуре 8-10⁰С. Из основного раствора готовят рабочий. Для приготовления рабочего раствора основной раствор разбавляют прокипяченной охлажденной дистиллированной водой при температуре 25 ± 2⁰С в соотношении 1: 2, 5 (к 10 мл основного раствора прибавить 25 мл воды). Содержание резазурина в рабочем растворе 0, 014 %. Срок хранения рабочего раствора в холодильнике в склянке из темного стекла – не более трех суток.

Техника определения:

1) В стерильную пробирку отмерить пипеткой 1 мл рабочего раствора резазурина и 10 мл молока.

2) Закрыть пробирку резиновой стерильной пробкой, медленно переворачивая ее 3 раза, размешать содержимое и поставить в водяную баню при температуре 37 ± 1⁰С. Уровень воды в редуктазнике после погружения пробирки должен быть несколько выше уровня жидкости в пробирке (предохранять пробирки от прямых солнечных лучей).

3) Время погружения пробирки в водяную баню считать началом анализа. Через 20 мин и через 1 ч, не встряхивая и не переворачивая пробирку, установить изменение окраски.

4) Пользуясь нормативом, определить качество молока и установить его класс. Появление окрашивания молока при вынимании пробирки из водяной бани и при встряхивании не учитывают.

Определение примеси анормального молока в сборном с использованием препарата «мастоприм». Молоко с примесью стародойного (полученное за 7 дн перед запуском коровы), молозива, маститного считается анормальным. В анормальном молоке увеличивается число соматических клеток, изменяются химический состав, технологические и биологические свойства. В 1 мл анормального молока число соматических клеток более 500 тыс., в сборном молоке здоровых коров – 500 тыс. и менее. Добавление анормального молока в молоко здоровых коров увеличивает в нем число соматических клеток.

Приготовление 2, 5 %-ного раствора «мастоприм». В мерную колбу на 100 мл поместить 2, 5 г препарата «мастоприм» (ГОСТ 23455-79), долить до метки дистиллированной водой (температура 30-35⁰С), размешать. Продолжительность хранения раствора – 1 сут при температуре 10-30⁰С.

Техника определения:

1. В углубление пластинки (рис. 18) внести 1 мл 2, 5 %-ного раствора препарата «мастоприм» и 1 мл молока, затем шпателем в течение 10 с тщательно перемешать смесь.

2. Смесь из углубления пластинки неоднократно поднимать шпателем на высоту 5-7 см и в течение не более одной минуты по изменению консистенции смеси определить примесь анормального молока.