Лабораторная работа 3. Проведение проб на коллоидоустойчивость белков сыворотки крови

Проведение проб на коллоидоустойчивость
белков сыворотки крови

Устойчивость белков сыворотки крови зависит от их заряда и наличия гидратной оболочки. Нарушение коллоидной устойчивости белков под влиянием различных агентов проявляется сначала склеиванием (коагуляцией) белковых молекул, а затем выпадением их в осадок. При этом в первую очередь осаждаются более крупные и менее заряженные белки – глобулины.

Осадочная проба Вельтмана в модификации Тайфля

Принцип

При добавлении к сыворотке крови раствора СаСl₂ снижается коллоидная устойчивость белков вследствие уменьшения электрического заряда частиц при действии электролита. Вследствие этого при нагревании первыми выпадают в осадок g-глобулины (иммуноглобулины).

Реактивы

0, 5% р-р CaCl₂.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Проведение анализа

В химическую пробирку добавляют 0, 1 мл сыворотки, 4, 9 мл дистиллированной воды и 0, 1 мл 0, 5% раствора CaCl₂. Встряхивают, нагревают в кипящей водяной бане или на спиртовке до однократного закипания и охлаждают.

Если хлопья в пробирке не обнаруживаются, то в нее добавляют еще 0, 1 мл 0, 5% раствора CaCl₂ и раствор вновь нагревают до кипения. Процедуру повторяют до выпадения хлопьевидного осадка. Учитывают объем СaCl₂, пошедший на образование хлопьевидного осадка сывороточных белков, и определяют состояние по коагуляционной ленте Вельтмана по схеме:

N пробы
CaCl2, мл	1, 0	0, 9	0, 8	0, 7	0, 6	0, 5	0, 4	0, 3	0, 2	0, 1
	Сдвиг влево. Обусловлен увеличением содержания сывороточных a- и b-глобулинов		Сдвиг вправо. Обусловлен повышением содержания g‑ глобулинов
Клинико-диагностическое значение	Ревматизм, активный туберкулез, перитонит, нефроз, острые инфекции, опухоли, сахарный диабет	Фиброзы, гемолиз, повреждения печени (гепатит, цирроз, дист­рофия), пневмония, плеврит, туберкулез, остеомиелит

Нормальные величины

Сыворотка крови

0, 4-0, 5 мл р-ра CaCl2

Тимоловая проба

Принцип

Сывороточные b‑, g‑ глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7, 55 тимоловым реактивом вследствие образования глобулин-тимол-липидного комплекса.

Реактивы

Тимоловый буфер, рН 7, 55‑ 7, 60.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Проведение анализа

	Опыт, мл
Сыворотка крови Тимоловый буфер	0, 05 3, 0
	Перемешивают и оставляют стоять 15 минут при комнатной температуре. Снова перемешивают и сравнивают с калибровочными пробами. Результат выражают в единицах помутнения S‑ H (по авторам: Shank‑ Haagland)