ТЕМЫ ДЛЯ РЕФЕРАТИВНЫХ СООБЩЕНИЙ. 1. Возрастная динамика белковых фракций

1. Возрастная динамика белковых фракций. Эмбриоспецифические белки и их диагностическое значение.

Остаточный азот: его основные компоненты. Динамика уровня фракций остаточного азота в постнатальный период.

Лабораторная работа 1

Количественный метод определения содержания
остаточного азота крови по методу Аселя

Остаточный азот является суммарным показателем безбелкового азота крови. Он складывается из мочевины (около 50%), аминокислот (около 25%), эрготионеина (около 8%), креатина и креатинина (до 7, 5%), пептидов, нуклеотидов и азотистых оснований (около 5%), мочевой кислоты (до 4%), аммиака и индикана (0, 5%). Так как показатель включает различные низкомолекулярные азотсодержащие вещества, более информативным является определение отдельных фракций остаточного азота.

Принцип

Сжигание небелкового фильтрата с концентрированной серной кислотой дает переход азота органических веществ в сульфат аммония, который с реактивом Несслера образует продукты желто-оранжевого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации азота.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Реактивы

1) Реактив Несслера (щелочной раствор йодистых солей ртути и калия), 2) 5% р-р NaOH, 3) лакмусовая бумага.

Стандартный раствор (NH₄)₂SO₄, 26 ммоль/л.

Оборудование

Колбы Кьельдаля, песчаная баня, фотоэлектроколориметр.

Проведение анализа

1. Подготовительный этап (выполняет лаборант):

Осаждение белков: в центрифужную пробирку, содержащую 1, 8 мл дистиллированной воды, вносят 0, 2 мл сыворотки крови, приливают 1, 0 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют или фильтруют через смоченный бумажный фильтр.

Для минерализации 1, 0 мл надосадка переносят в термостойкую пробирку, приливают 3 капли концентрированной H₂SO₄ и 3 капли Н₂О₂. Осторожно упаривают и нагревают до получения бесцветного минерализата.

2. Цветная реакция

	Опыт, мл	Стандарт, мл
Минерализат	1, 0	––
Стандартный раствор (NH4)2SO4	––	1, 0
Раствор NaOH	Проверяя величину рН по лакмусовой бумажке, добавляют по каплям до тех пор, пока рН не станет нейтральной – в нейтральной среде лакмус синеет. N.B. Излишек щелочи вызывает помутнение раствора
Дистил. вода Реактив Несслера	8, 0 2, 0	8, 0 2, 0
	Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрация остаточного азота, ммоль/л = , где

Е_оп и Е_ст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_ст – концентрация стандартного раствора

Клинико‑ диагностическое значение

Остаточный азот является показателем состояния белкового обмена.

Увеличение фракций остаточного азота (гиперазотемия) по своему характеру может быть абсолютной, связанной с действительным накоплением этих компонентов в крови, и относительной, связанной с дегидратацией. В свою очередь, абсолютная гиперазотемия может быть ретенционная (почечного и внепочечного происхождения) и продукционная:

ретенционная азотемия возникает в результате задержки выведения азотсодержащих веществ и различается на азотемии почечного происхождения (заболевания клубочков – нефриты, туберкулез почек, нефросклероз и др.) и внепочечного происхождения. Внепочечные гиперазотемии подразделяются на надпочечные (результат нарушения гемодинамики и падения фильтрационного давления при сердечно-сосудистой недостаточности, снижении артериального давления) и подпочечные (при гипертрофии или аденоме простаты, почечно-каменной болезни);

продукционная азотемия выявляется при всех состояниях, связанных с увеличением распада белков, от ретенционной ее отличает повышение содержания аминокислот в крови, а также одновременное накопление азотистых компонентов в крови и моче.

Уменьшение концентрации остаточного азота возникает при снижении содержания мочевины, аминокислот или других фракций.