Опыт 3. Определение неорганического фосфора в сыворотке крови по восстановлению фосфорно-молибденовой кислоты
Фосфор в организме находится в виде неорганических солей и органических соединений (фосфорные эфиры углеводов, фосфопротеины, нуклеиновые кислоты, АМФ, АДФ, АТФ, фосфолипиды и др.). Из неорганических солей в плазме и сыворотке крови содержатся преимущественно однозамещенные и двузамещенные фосфаты. Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови взрослого человека в норме 2-4 мг% (0, 65-1, 3 ммоль/л), у ребенка оно выще (1, 29-2, 26 ммоль/л). Гипофосфатемия наблюдается при рахите, при гиперфункции паращитовидных желез. Гиперфосфатемия наблюдается при передозировке витамина D, при недостаточной функции паращитовидных желез, при почечной недостаточности. К 1 мл сыворотки крови прибавляют 4 мл дистиллированной воды, 5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, оставляют на 10 минут. Выпадает осадок белков. Сыворотку центрифугируют 10 минут. К 5 мл центрифугата добавляют 1 мл 5% раствора молибдата аммония, 0, 2 мл раствора эйконогена и 1, 8 мл дистиллированной воды. Смесь оставляют на 20 минут при комнатной температуре, затем измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре против контроля при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр). Контроль готовят одновременно с опытной пробой. К 2, 5 мл трихлоруксусной кислоты приливают 2, 5 мл воды, 1 мл раствора молибдата аммония, 0, 2 мл раствора эйконогена, 1, 8 мл воды. Оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Расчет производят по калибровочному графику. Построение калибровочного графика. Из рабочего стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице 6. Таблица 6. Состав смесей для калибровочного графика.
После 20-минутного стояния пробы измеряют как опытные против контроля. На основании полученных данных строят калибровочный график, откладывая на оси ординат найденные величины оптической плотности, а на оси абсцисс - соответствующие им количества фосфора. Контрольные вопросы 1. В чем разница понятий «минеральный обмен» и «водно-солевой обмен»? 2. Перечислите основные неорганические компоненты крови. 3. Укажите причины гиперфосфатемии и гипофосфатемии. 4. В каких случаях может развиваться гипохлоремия и гиперхлоремия? 5. Какие гормоны регулируют водно-солевой обмен в организме? Работа 7. Биохимия мочи
|
