Хроматографические методыВпервые хроматографическое разделение сложной смеси (хлорофилла) было осуществлено М.С. Цветом в 1903 г. Хроматографические методы разделения, идентификации и количественного определения основаны на различных скоростях движения отдельных компонентов в потоке подвижной фазы ПФ вдоль слоя неподвижной фазы НФ, причем анализируемые вещества находятся в обеих фазах. Эффективность разделения достигается за счет многократно повторяющихся циклов сорбция- десорбция. При этом компоненты по-разному распределяются между ПФ и НФ в соответствии с их свойствами, в результате чего и происходит разделение. Собственно хроматографические методы служат лишь средством для разделения многокомпонентных смесей, но они не позволяют установить химическую природу компонентов анализируемой смеси, выходящих из колонки. Для этой цели используют систему детектирования, состоящей из трех элементов – детектора, усилителя и регистратора. В качестве детекторов чаще всего используют спектрофотометрические (регистрируют поглощение в УФ- и видимой области спектра) и рефрактометрические (измеряют разность показателей преломления стандартной и исследуемой проб). В табл. 1.7.5 приведена классификация хроматографических методов по принципу разделения.
Таблица 1.7.5. Классификация хроматографических методов по принципу разделения
Все более широкое применение находит метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Это – метод разделения веществ на зернистых сорбентах с размером частиц менее 15 мкм при повышенном давлении. ВЭЖХ основывается на распределительном, адсорбционном, ионообменном, аффинном принципах разделения.
Хроматограф для ВЭЖХ Хроматограф для ВЭЖХ «Милихром – 6» «Стайер»
Рис.1.7.5. Приборы для ВЭЖХ Хроматографические методы используются для качественного и количественного анализа смеси, препаративного выделения веществ, а также определения физико-химических характеристик. Возможность анализа малых количеств вещества и его концентраций обусловливает применение метода в исследовании биологических объектов. Выбор хроматографического метода для решения конкретной задачи зависит от природы анализируемых веществ, их агрегатного состояния, физических и химических свойств. Сочетание хроматографического метода разделения и анализа смеси веществ с другими современными методами изучения их свойств, такими, как, например, масс-спектрометрия, ИК-спектрометрия, ЯМР- и ЭПР-спектроскопия, делает этот метод исключительно важным и практически универсальным средством исследования.
|
