Методические указания к практической работе

6. О.А. Нерушев, Г.И.Сухинин "Кинетика образования фуллеренов при электродуговом испарении графита ". ЖТФ,1997,т 67,№2,с 41-42.;A.L.Alexandrov, V.A.Schweigert “A kinetic model of carbon growth including pelycyclie rings and fullerence formation. Physics letters ”, 1996,v.263,551-558.

Методическая разработка практического занятия №1 для учащихся отделения «Лечебное дело» по дисциплине

Бактериологическая лаборатория предназначена для проведения микробиологических исследований в профилактических и диагностических целях. В структуру бактериологической лаборатории входят следующие помещения: гардероб для персонала, лабораторные комнаты (для проведения микробиологических исследований), боксы для работы с отдельными группами бактерий и вирусов, средоварочная (для приготовления питательных сред), стерилизационная (для стерилизации различных объектов и обеззараживания отработанного материала), моечная (для мытья лабораторной посуды), материальная, термальная (для выращивая микроорганизмов), может быть виварий (для содержания экспериментальных животных). Методы исследования, используемые в микробиологической практике: микроскопический, бактериологический, серологический, аллергический, биологический, молекулярно-генетический. В качестве исследуемого материала используют биоматериал от больного, который зависит от места локализации патологического процесса (кровь, моча, СМЖ, испражнения, мокрота, гной и т.д.).

Правила работы в бактериологической лаборатории:

1. К работе допускаются лица, прошедшие специальный инструктаж о правилах работы в баклаборатории.

2. Каждый сотрудник должен иметь индивидуальную спецодежду (халат, шапочку)

3. Запрещено выходить из лаборатории в спецодежде и надевать поверх неё верхнюю одежду

4. Обязательное выполнение правил личной гигиены

5. Не допускается прием пищи и курение в баклаборатории

6. Хранение личных вещей должно быть организовано в комнате для медперсонала

7. После окончания работы обязательно проводится влажная уборка всех помещений с применением дезрастворов

8. При загрязнении патогенным материалом необходимо: а) мебель обработать дезраствором, б) лабораторную посуду стерилизовать, в) руки сначала обработать дезраствором, а затем тщательно вымыть с мылом.

9. Не допускать лишних хождений, резких движений, посторонних разговоров.

Правила работы с культурой патогенных микроорганизмов:

1. Доставлять инфицированный материал в лабораторию и переносить его из одной лаборатории в другую на территории учреждения нужно в специально приспособленной посуде (металлических биксах, ящиках, баках)

2. Весь материал, поступивший в баклабораторию, должен рассматриваться как инфицированный

3. При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность. Банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезраствором и ставят на подносы или кюветы.

4. О случаях аварии с посудой, содержащей патогенный материал, следует немедленно сообщить зав. лабораторией и немедленно провести обеззараживание объектов и обеззараживание рук, других частей тела и спецодежду.

5. При работе с культурой патогенных микроорганизмов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приемы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом:

- с инфицированным материалом работают только с помощью инструментов (пинцеты, петли, корнцанги),

- прикасаться руками к исследуемому материалу и конденсату в засеянных чашках запрещается,

- перед работой тщательно проверяют целостность стеклянной посуды, проходимость игл и надежность поршней шприцев,

- при посеве материала делают надпись на пробирках, чашках Петри, колбах, флаконах с указанием номера анализа (культуры) и даты посева,

- в пробирки и чашки Петри материал высевают вблизи от огня горелки с обжиганием петли, шпателя, краев пробирки,

- растворы, содержащие патогенные микроорганизмы, набирают пипеткой с помощью резинового баллона,

- насасывать ртом и переливать растворы из сосуда в сосуд через край нельзя

- по окончанию работы запрещается оставлять на рабочих столах нефиксированные мазки, чашки Петри, пробирки и другую посуду с инфицированным материалом

6. Заразный материал и отработанные культуры подлежат обязательному уничтожению. Инструменты, используемые в работе с заразным материалом и рабочее место дезинфицируют, руки после дезинфекции моют с мылом

7. Работники баклаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех заболеваний, возбудители которых могут встречаться в исследуемых объектах

Для обнаружения микроорганизмов и изучения их морфологических свойств используют световые, бинокулярные, люминесцентные, фазово-контрастные, электронные микроскопы. Микроскоп состоит из оптической, осветительной системы и механической части. Механическая часть представлена основанием, тубусодержателем, предметным столиком, микровинтом и макровинтом, тубусом с револьвером. Оптическая система состоит из объектива и окуляра. Осветительная система включает в себя конденсор (обеспечивает фокусировку света в области рассматриваемого препарата), диафрагму (регулирует поток световых лучей) и зеркало (направляет свет от осветителя в конденсор). Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения окуляра и объектива.

Правила микроскопирования:

Работа с микроскопом требует строгого соблюдения правил работы с ним. При микроскопировании в качестве источника света используется естественное освещение и искусственные источники света. При рассматривании неокрашенных препаратов пользуются суженой диафрагмой и опущенным конденсором. Окрашенные препараты микроскопируют при поднятом конденсоре и открытой диафрагме.

1. С помощью зеркала, конденсора и диафрагмы обеспечивают хорошее освещение.

2. Помещают препарат на предметный столик микроскопа и, используя объектив х8, получают четкое изображение

3. После смены объектива х8 на х90 (иммерсионный объектив) и под контролем глаза с боку, осторожно отпускают его до прикосновения с покровным стеклом

4. Глядя в окуляр, медленно с помощью макровинта поднимают тубус микроскопа до получения четкого изображения, после чего с помощью микровинта (пол-оборота в одну сторону или другую) добиваются наилучшего изображения.

РЕКОМЕНДУЕТСЯ во избежание утомления зрения оба глаза держать открытыми.

5. По окончании микроскопирования поднимают тубус и снимают препарат. Мягкой чистой салфеткой вытирают иммерсионный объектив, в случае засыхания масла линзу вытирают спиртом или бензином. Конденсор опускают. Микроскоп покрывают чехлом или хранят в футляре для защиты его от света, пыли, влаги. Необходимо бережно обращаться с объективом и другими оптическими частями. При работе с микроскопом нельзя применять большие усилия, нельзя пальцами касаться линз. РАЗБИРАТЬ И СОБИРАТЬ ОБЪЕКТИВЫ ЗАПРЕЩЕННО!

 

Изучение морфологии микроорганизмов в окрашенном состоянии является наиболее распространенным в микробиологии методом. Этот метод имеет много достоинств:

- позволяет изучить морфологические особенности микроорганизмов и дает возможность в некоторых случаях точно определить изучаемый микроорганизм.

- удобен в практической работе, так как значительно легче производить исследования, пользуясь убитыми микроорганизмами, чем живыми.

- легко доступен, благодаря технике окрашивания

Приготовление окрашенного препарата включает:

1. приготовление мазка; 2. высушивание мазка; 3. фиксация мазка; 4. окраска

Для того чтобы приготовить мазок из микробных культур с жидкой питательной среды необходимо бактериальной петлей маленькую каплю исследуемой культуры нанести на обезжиренное предметное стекло и круговыми движениями петли распределить равномерным слоем в виде кружка диаметром в 1-2-копеечную монету. Чтобы приготовить мазок из культуры, выращенной на плотной питательной среде, необходимо на середину стекла нанести каплю физ. раствора или дистиллированной воды, после чего внести в неё бактериальную культуру (петлю с небольшим количеством микробной культуры) так, чтобы капля стала слегка мутноватой. После этого излишек микробного материала на петле сжигают в пламени горелки и готовят мазок по описанному выше способу.

Высушивание проводят при комнатной температуре.

Фиксация препарата преследует следующие цели:

- убить микроорганизмы и сделать безопасной работу с ними

- прикрепить мазок к стеклу, чтобы он не смывался при дальнейших манипуляциях

- сделать микроорганизмы более восприимчивыми к окраске, так как убитые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые