Метод слайдов и световой микроскопии

Препарат «раздавленная капля». На предметное стекло стеклянной палочкой помещают каплю водопроводной воды. В неё стерильной петлей вносят небольшое количество культуры бактерий или дрожжей, эмульгируют и накрывают покровным стеклом. Избыток влаги, который возникает из–под покровного стекла, собирают фильтровальной бумагой. Если исследуют водяные культуры, то на предметное стекло наносят каплю культуры.

 

 

Рисунок 3 - Дрожжи S. cerevizial (40*10)

 

Препарат «висячая капля». Этот препарат используют при длительном наблюдении за развитием и размножением микроорганизмов.

Небольшую каплю суспензии микроорганизмов наносят бактериологической петлей на стерильное покровное стекло. Стекло каплей вниз накладывают на лунку специального предметного стекла. Капля должна свободно висеть в лунке, не касаясь краёв и дна. Для образования влажной камеры и предохранения препарата от высыхания края лунки смазывают вазелином.

 

Рисунок 4 - Грибы Aspergillus niger (9*10)

Техника приготовления мазка. На чистое и обезжиренное предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В неё бактериологической петлей помещают культуру микроорганизмов, эмульгируют и полученную микробную суспензию равномерно распределяют по стеклу. Препарат высушивают при комнатной температуре, затем фиксируют.

Цель фиксирования препарата: а) умертвить микроорганизмы; б) прикрепить их к стеклу и тем самым сберечь от смывания; в) повысить восприимчивость клеток к окраске.

Наиболее распространенным методом фиксирования является фиксирование нагревом. Для этого препарат проносят над пламенем горелки 3-4 раза, держа мазок вверх.

Техника окраски простыми методами. Фиксированный препарат помещают на параллельные рейки над кюветой. На мазок наносят 1 %-ый водный раствор фуксина или метиленового синего. Окраску производят на протяжении 2- 3 минут. Следят за тем, чтобы раствор красителя на мазке не подсыхал. После окончания окраски препарат промывают водой до того момента, пока стекающая вода не станет прозрачной. Затем препарат высушивают, промакивая фильтровальной бумагой, наносят на окрашенный мазок каплю иммерсионного масла и микроскопируют с иммерсионной системой.

Окраска бактерий по методу Грамма. Существует несколько методов окраски бактерий по методу Грамма. Наиболее часто используются следующие: полный (традиционный) и экспресс-метод.

Согласно с полным методом окраски бактерий, мазок на предметном стекле фиксируют трехразовым проведением через пламя горелки. На препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают карболовый раствор генциана фиолетового на 0,5-1 минут, снимают бумагу, наливают раствор Люголя на 0,5-1 минут, сливают раствор Люголя и стекло прополаскивают в этиловом спирте на протяжении 0,5-1 минуты, пока не перестанет отделяться краска. Потом стекло тщательно промывают водой и докрашивают от 1 до 2 минут фуксинами Тиля, разведенного (1:10) дистиллированной водой. После промывания и просушивания препарата мазок микроскопируют.

Согласно с экспресс-методом, на обезжиренное предметное стекло наносят тиглем одну каплю дистиллированной воды (при приготовлении препаратов с колонией на плотных средах) или одну каплю бульонной культуры. В каплю дистиллированной воды вносят небольшое количество микробных клеток с анализируемой колонии или газона чистой культуры на плотных средах. Потом в каплю вносят петлёй одну каплю реактива №1, размещают смесь на стеле и подсушивают мазок при комнатной температуре. Фиксируют в пламени горелки, промывают водой, просушивают фильтрованной бумагой и наносят реактив №2, накрывая им всю поверхность стекла, на 1-5 минут (продолжительность окраски не влияет на ее результат). Тщательно и быстро переполаскивают препарат водой, просушивают фильтрованной бумагой, микроскопируют. При приготовлении на одном стекле нескольких мазков на стекло наносят восковым карандашом линии, которые разделяют поверхность стекла на необходимое количество квадратов [7],[13].

 

 

 

Рисунок 5 - Бактерии B. Subtilis (90*10)