Выделение чистых культур бактерий, дрожжей и спор грибов

Получение чистых культур путем разобщения клеток в питательных средах. Для разобщения клеток аэробных микроорганизмов используют следующие методы:

– посев методом Коха на поверхность плотной среды в одной чашке Петри. Для получения изолированных колоний элективную культуру следует развести. Делают посев разведений ;

– посев методом Коха на плотные среды в трех чашках Петри. Этот способ дает наилучшие результаты при высеве смешанных культур;

– посев истощающим штрихом. Этот метод выбирают в том случае, когда есть уверенность в том, что требуемый организм находится в элективной культуре в достаточно высокой концентрации.

Для получения изолированных колоний анаэробов выбирают:

– глубинный посев. Для посева в одной чашке Петри требуется произвести разведение культуры. Делают посев разведений ;

– разведение суспензий в плотных питательных средах. Этот метод используется для облигатных анаэробов. В пробирки для разведения элективной культуры вместо физического раствора вносят расплавленную агаризованную среду, охлаждают до 45 – 46 ºС. Делают 6 – 10 последовательных разведений с шагом 10. Затем среду в пробирках быстро охлаждают и заливают поверхность слоем стерильной смеси парафина и вазелинового масла для предотвращения проникновения воздуха.

Для выделения культур, которые не формируют колоний на плотной среде, используют метод последовательных разведений в жидкой среде. Этот способ удается реализовать только в том случае, когда требуемый микроорганизм преобладает в смешанной популяции. Разведение следует производить с тем учетом, чтобы при внесении аликвот в серию пробирок с питательной средой среднее число клеток составляло бы менее 0,05 на пробирку.

Получение чистых культур прямым выделением клеток при микроскопировании. Методы данной категории требуют специального лабораторного оборудования и не применимы для выделения очень мелких клеток и неклеточных существ.

Капельный метод Линдера. Разводят элективную культуру в стерильной питательной среде с тем расчетом, чтобы в 0,01 мл содержались одиночные клетки. На стерильную поверхность покровных стекол наносят бактериологической петлей микрокапельки разведенной суспензии. Готовят препарат «висячая капля» и просматривают под микроскопом. Отбирают те препараты, в которых присутствует по одной клетке, и инкубируют их во влажных камерах 12 – 24 часа. Затем вновь микроскопируют и растущие культуры бактериологической петлей переносят в жидкие или твердые питательные среды.

Также можно осуществлять выделение клеток с помощью микроманипулятора [12].