Чистая культура микроорганизмов. Способы выделения аэробных и анаэробных микроорганизмов

Чистая культура – это популяция опред вид мкÒ, по на­личию которого в организме больного человека и животного можно под­твердить поставленный диагноз инфекционного заболевания.

При получении ЧК нужно иметь в виду, что в материалах возбудитель находится в ассоциации с банальной (посторонней) мкФ Þ для его изоляции гной, мокроту, осадки мочи, испражнения и прочие экскреты необходимо засеять так, чтобы получить колонии. Существуют следующие МЕТОДЫ:

1) МЕХАНИЧЕСКОЕ РАЗОБЩЕНИЕ

– метод серийных разведений в жидких пит средах (Пастер)

– метод пластических разведений на плотных пит средах (Кох)

– метод рассева материала по поверхности плотных пит сред.

В результате ## располагаются на расстоянии др от др и при делении образуют отдельные колонии.

2) ФИЗИЧЕСКИЙ – для выделения спорообразующих мкÒ материал обрабатывают t°=70-80°С, при этом вегетативные формы погибают, остаются только споры.

3) ХИМИЧЕСКИЙ – материал обрабатывается кислотой, все мкÒ кроме кислотоустойчивых (tbc) гибнут. К этому же методу относятся элективные (селективные) среды (солевые – стафилококк).

4) БИОЛОГИЧЕСКИЙ – используются гиперчувствительные к опред виду мкÒ Ж!!. При введении в Ò т/го Ж! 1-2 ## начинается быстрый рост и размножение мкÒ, они заселяют все его органы и ткани.

5) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ – протей.

6) АНТИБИОТИКОУСТОЙЧИВОСТЬ – добавление АБ и ингибиторов роста.

После получения колоний, их изучают и пересевают на скошенные и жидкие среды для накопления биомассы (при этом исследуют культуральные свойства). Окончательное заключение делают только после изучения БХ и культуральных свойств; серологических реакций, фагочувствительности культуры и ее патогенности для экспериментальных животных.

При по­лучении ЧК аэробных и анаэробных бактерий есть различия.

АЭРОБОВ выращивают в обычных условиях кислородной сре­ды при температуре 37°С в термостате. Полученный материал микроскопируют и высева­ют на плотную среду (иногда – в жидкую среду обо­гащения), при этом механически разобщают мкÒ (разведением). Посевы помещают в термостат на 24-48ч при температуре 37°С. Затем на чашках Петри с по­севами изучают специфические признаки колоний (размеры, форму, прозрачность колоний, поверхность, характер краев, структуру…). Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения ЧК в достаточном количестве – культивируют в термостате 24-48 ч при температуре 37 °С. Изучают морфологические, тинкториальные, БХ, серологические свойства.

АНАЭРОБОВ выращивают при ↓ содержании О₂, облигатные – при полном его отсутствии (материал→ внутрь жидкой или полутвердой пит среды) Чаще используют жидкую среду Китта–Тароцци (обогащения, состоит из концентрированного МПБ, глюкозы и агара). На дно помещают кусочки печени или фарша (для адсорбции О₂). Перед посевом среду кипятят для удаления воздуха, затем быстро охлаждают, после посева заливают стерильным вазелиновым маслом. Посевы на поверхности плотных сред, разли­тых в чашки Петри, культивируют в макро– или микроанаэростате.

Макроанаэростат представляет – двухстенный аппарат с крышкой, между стенками – вода, терморегулятор обеспечивает постоянную t°С (37°С). Аппарат герметически закрывают крышкой, соединяют с вакуум–насосом и выкачивают воздух. Имеются также портативные анаэростаты.

Особенности выделения анаэробов:

1. день – материал микроскопируют и высевают в среду Китта–Тароцци, прогревают при температуре 80°С в течение 30 мин, заливают вазелиновым маслом и посевы помещают в термостат.

2. день – помутневшую (часто вспенившуюся) среду набирают пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла до дна пробирки. Выделенную культуру микроскопируют и пересевают на плотные пи­тательные среды (в чашки Петри с кровяно–сахарным агаром или в столбики расплавленных и остуженных сахарных агаров).

3. сутки – изучают выросшие на чашках Петри колонии, делают из них мазки, высевают на среду Китта–Тароцци для обогащения чистой культуры.

Устанавливают видовую принадлежность культуры = изучение морфологических, тинкториальных, культуральных и БХ свойств (ряд Гисса).

 

Цели и задачи мед бактериологии, вирусологии, иммунологии............................................................................................ 1

Систематика микроорганизмов. Основы систематики и таксономические группы микроорганизмов............... 1

Морфология, ультраструктура бактерий......................................................................................................................................... 1

Морфология, ультраструктура микоплазм...................................................................................................................................... 3

Морфология, ультраструктура хламидий........................................................................................................................................ 3

Морфология, ультраструктура риккетсий....................................................................................................................................... 4

Морфология, ультраструктура спирохет.......................................................................................................................................... 4

Морфология, ультраструктура актиномицетов............................................................................................................................. 5

Морфология, ультраструктура грибов.............................................................................................................................................. 5

10. Химический состав Грам «+» и Грам «–» бактерий. Механизмы окраски по Граму................................................... 6

Структура липополисахарида и механизмы его биологического воздействия на макроорганизмы.................... 6

Дифференциально-диагностические среды, их состав и механизм действия................................................................. 7

Дыхание бактерий. Методы создания анаэробных условий.................................................................................................. 7

Питание бактерий. Клсф питательных сред, их состав............................................................................................................ 8

15. Периодические и хемостатные культуры........................................................................................................................................... 9

Биология и морфология вирусов. Их взаимоотношения с клеткой хозяина................................................................... 9

Клеточные культуры, их происхождение. Способы выявления вирусов в клеточных культурах....................... 10