Условия определения

колонка, неподвижная фа­за, температура колонки

капиллярная 25мх0,32 мм; полиметилфенилсилоксан; температура от 150 до 220 °С (изотермический режим - линейный градиент - изо­ термический режим)

 

внутренний стандарт

 

 

диэтиланилин

 

2-этилгексано-вая кислота

насадочная; 2мх2 мм; по-лиметилфенилсилоксан (3%); 120 °С

мм; 2-

капиллярная 10мх0,53 макрогол 20000 нитротерефталат; темпера­тура от 40 до 200 °С (изо­термический режим - ли­нейный градиент - изотер­ мический режим)

азот

 

 

гелий

ДИП

°С

ДИП

300 °С

нафталин

 

 

3- циклогек-

силпропионовая

кислота

метиленхлорид

насадочная; 1,5мх4 мм;

макрогол 1000 (10%); 60 °С

азот

ДИП

этиленхлорид

 

 

2.5.3. Количественное определение

 

Основным методом количественного определения (РЬ.Еиг. 4, ВР, ЕГ8Р) пенициллинов является ВЭЖХ. Разделение проводят на колонках с октадецилсиликагелем (в ЕГ8Р для оксациллина используется фенил-силикагель). Подвижные фазы представляют собой смеси водных фос­фатных буферных растворов и метанола или ацетонитрила (табл. 11). Детекция - спектрофотометрическая.

Метод ВЭЖХ позволяет провести не только количественное опре­деление основного вещества (допустимые содержания для различных пенициллинов показаны в табл. 9), но и родственных соединений, вы­ступающих в роли примесей. До возникновения данного метода количе­ственное определение пенициллинов проводилось, например, следую­щим образом (согласно ГФ X) - методом иодометрического титрования определялась сумма пенициллинов, а затем другим методом (гравимет­рия, УФ-спектрофотометрия) определялось содержание конкретного пенициллина.

Таблица 11

Условия количественного определения пенициллинов методом ВЭЖХ согласно ЕР 2004 (оксациллин -Ц8Р 24)

Вещество

 

БП

натриевая и калиевая соли

 

 

БП

новокаиновая соль

 

 

бензатина

БП ФМП

Подвижная фаза, скорость

 

Смесь А и В в соотношении 70:30, где (А) -смесь ФБР (КН2РО4 + Н3РО4, рН 3,5), метано­ла и воды (10:30:60); (В) - смесь ФБР (КН2РО4 + Н3РО4, рН 3,5), метанола и воды (10:50:40)

(1 мл/мин) _____________________________________

смесь (250:250:500; рН смеси 7,2) ацетонитри-ла, воды и водного раствора, содержащего 14 г/л КН₂РО₄ и 6,5 г/л [(С₄Н₉)₄ИГ], доведенного до рН 7,0 1 М раствором КОН (1,75 мл/мин) Смесь (10:35:55) ФБР (рН 3,5), метанола и во­ ды; 40 °С (1 мл/мин)

Смесь А и В в соотношении 60:40, где (А)

Детекция, нм

 

 

та же

 

 

смесь

ФБР (рН 3,5), метанола и воды (10:30:60); (В) - смесь ФБР (рН 3,5), метанола и воды (10:35:45) (1 мл/мин)

КЦ

динатриевая соль

Смесь А и В в соотношении 85:15, где (А) -смесь водного раствора ИаН₂РО₄ (15,6 г/л; рН 4,3) и ацетонитрила 980:20; (В) - смесь водно­го раствора ИаН₂РО₄ (15,6 г/л; рН 4,3) и аце- тонитрила 600:400 (1 мл/мин)

АМП

тригидрат и натриевая соль

Смесь А и В в соотношении 85:15, где (А) -смесь 0,5 мл разведенной уксусной кислоты, 50 мл 0,2 М КН2РО4 и 50 мл ацетонитрила, разбавленная до 1000 мл водой; (В) - смесь 0,5 мл разведенной уксусной кислоты, 50 мл 0,2 М КН2РО4 и 400 мл ацетонитрила, разбав­ ленная до 1000 мл водой (1 мл/мин)

АМО

тригидрат и натриевая соль

смесь А и В в соотношении 92:8, где (А) -смесь (1:99) ацетонитрила и фосфатного бу­ферного раствора (рН 5,0); (В) - смесь (20:80) ацетонитрила и ФБР (рН 5,0) (1 мл/мин)

та же

ПЦ

и его соль натриевая

Смесь А и В в соотношении 88:12, где (А) -смесь 576 мл воды, 200 мл 31,2 г/л раствора ИаН₂РО₄ и 24 мл 80 г/л раствора тетрабути-ламмония гидроксида (рН 5,5) и 200 мл ацето-нитрила; (В) - смесь 126 мл воды, 200 мл 31,2 г/л раствора ИаН₂РО₄ и 24 мл 80 г/л раствора тетрабутиламмония гидроксида (рН 5,5) и 650 мл ацетонитрила (1 мл/мин)

ОКС

натриевая соль

118Р - Смесь 700 мл водного раствора
КН₂Р0₄ (1,9 г/700 мл), 300 мл ацетонитрила и
100 мл метанола ________________________________

Согласно 1Р III количественное определение пенициллинов прово­дят спектрофотометрическим методом по реакции с имидазола ртути (II) хлоридом. Продуктом реакции является соль имидазола и ком­плексного соединения ртути (II) с пеницилленовой кислотой:

Максимум поглощения данного вещества находится при 325 нм.

В некоторой НД для количественного определения полусинтети­ческих пенициллинов используется реакция образования медной соли пеницилленовой кислоты. Продукт реакции имеет максимум поглоще­ния при 320 нм (в водно-спиртовом растворе - при 330 нм).

 

Литература

1. Арзамасцев А.П. Ультрафиолетовые и инфракрасные спектры лекарствен­ных веществ. - М.: Медицина, 1981.

2. Беталактамные соединения. Взаимосвязь структуры и биологической ак­тивности / П.С. Ныс, В.Б. Курочкина, А.В. Скляренко, Г.А. Вейнберг // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - Т. 45, № 11. - С. 36 - 42.

3. Иваницкая Л.П. Направленный поиск природных беталактамных антибио­тиков // Антибиотики. - 1983. - Т. 28, № 2. - С. 37 - 56.

4. Курочкина В.Б., Ныс П.С. Новые беталактамные структуры. Проблемы конструирования // Антибиотики и химиотерапия. - 2002. - Т. 47, № 2. - С. 29 - 37.

5. Либинсон Г.С. Проблемы стандартизации антибиотиков. Устойчивость пенициллинов и цефалоспоринов в растворах // Антибиотики. - 1983. - Т. 28, № 2. -

С. 56 - 75.

Как это выглядит

Лекция

 

1. Общая характеристика и классификация

 

Цефалоспоринами (цефемами) называют антибиотики, являю­щиеся производными 7-аминоцефалоспорановой или 7-амино-дезацетоксицефалоспорановой кислоты.

 

т

О

О

8.

г

СНз

СООН

7-АДЦК

Открытие антимикробного действия цефалоспоринов относится к 1945 году, когда итальянский учёный Джузеппе Бротзу (профессор университета Сардинии) выделил из пробы морской воды в Сардинии у места слива в море сточных вод гри­бок СерЪсйозроттт асгетотит и установил, что продукты, выделяемые данных ор­ганизмом, обладают антимикробной активностью. В 1953 году один из этих продук­тов (цефалоспорин С) был идентифицирован. Содержание данного вещества в про­дуктах жизнедеятельности грибка было невелико (по ходу исследования оно было названо «микропримесью к микропримеси»), оно не было пригодно для практиче­ского применения, не было найдено фермента цефалоспориназы аналогичного пе-нициллиназе, поэтому многие учёные (например, Э. Чейн) считали нецелесообраз­ным получение полусинтетических цефалоспоринов на основе цефалоспорина С. Заслуга в «продвижении» цефалоспоринов принадлежит английскому учёному Эд-вардсу Абрахаму (Оксфорд). В 1962 году на рынок был выпущен цефалотин. Затем появились цефалоридин, цефалексин и т.д. Во второй половине 1970-х годов в каче­стве лекарственных средств стали применяться цефалоспорины второго и третьего поколений: цефуроксим, цефотаксим, цефтриаксон и др. В настоящее время в кли­нической практике применяют около 40 цефалоспоринов.

Кроме цефемов («истинных цефалоспоринов») к антибиотикам данной группы также цефамицины (7-метоксицефалоспорины), оксаце-фемы и карбацефемы

*1

Н

Г

I ОСН₃ N. ' ³

зг

А4

А

 

8.

 

*1

Н

I ОСН₃

I А4

зг

А

 

О

СООН

цефамицины

СООН

оксацефемы

Как и в случае 6-аминопенициллановой кислоты структуру ами-ноцефалоспорановых кислот можно описывать двумя видами формул и для данного вещества, а также его производных, используются два спо­соба нумерации.

6

Н Н 1

О

СНз

СООН

При использовании второго способа нумерации, принятого в Ев­ропейской, Британской и многих других фармакопеях, 7-АЦДК имеет название (6А,7А)-7-амино-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло [4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота. Цефалопорины отличаются друг от друга заместителями расположенными в з-м и 7-м положениях цефемного яд­ра.

В зависимости от химической структуры различают следующие группы цефалоспоринов (формулы веществ - см. табл. 2)

• цефалоспорины - кислоты (цефазолин, цефалотин)

Г

А' А

-К

 

8.

Соон

аминоцефалоспорины (цефалексин)

г

8.

Кз>

 

Г

 

 

8.

О

-К

К2

СООН

иминоцефалоспорины (цефотаксим, цефуроксим, цефтриаксон, цефтазидим и др.)

_Яд--А⁸з

^О^ДК2

СООН

Фармакологическая классификация цефалоспоринов

Фармакологическая классификация. В зависимости от отноше­ния к грамположительной и грамотрицательной микрофлоре, выделяют 4 поколения цефалоспоринов (табл.1).

МНН, структурная формула и
химическ ое название ________

1________________

Цефазолина натриевая соль

(СеГахоНп 8оПшт)

Н I

К.

X

I

Синонимы и формы выпуска

_________ 2________

Кефзол

Лизолин

Оризолин

Цефамезин

Цефезол

Порошок для инъ­екций во флаконах по 0,25; 0,5; 1 и 2 г

СООКа

натрия (6К, 7Л)-3-[[5-метил-1,3,4-тиадиазолил-2)-тио]метил]-8-оксо-7-[(1/7-тетразолил-1-ацетил)амино]-5 -тиа-1-азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-2-карбоксилат

Цефалотина натриевая соль

(СеШоПп 8оПшт)

Н I

К.

Кефлин

Порошок для инъ­екций во флаконах

по 0,5; 1 и 2 г

СООКа

О

натрия (6Л,7Л)-3-[(ацетилокси)метил1]-8-оксо-7-[[2-(2-тиофенил)ацетил]амино]-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0] окт-2-ен-2-

карбоксилат

Цефалексин (СеШехш)

 

КН₂ Н I ² I К.

/

О

 

г

-К

 

8.

 

 

Н2О

Кефлекс

Цепорекс

Таблетки, покры­тые оболочкой, и капсулы по 0,25 г и 0,5 г; порошок для приготовления сус­пензий по 2,5 г

СООН

(6/?,7К)-7-[(К)-2-амино-2- фенилацетамидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота (моногидрат)

Продолжение табл. 2
1 I 2

Цефоперазона натриевая соль (СеГорегагопе 8ойшт) 1 Т т 3 Лд о У-к^^Хх СООКа натрия (6А7Д)-7-[[(2Д)-2-[[(4-этил-2,3-диоксо-1-пиперазинил)карбонил]амино]- 2-(4- гидроксифе-нил)ацетил] амино]-3- [[(1-метил-1 /7-5-тетразолил)тио] метил]-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоксилат	Цефобид Цефоперабол Порошок для инъ­екций во флаконах по 0,5; 1 и 2 г
Цефотаксима натриевая соль (СеГо1ах1те 8ойшт) /ОСН3 К Н II 1 аУггА Хг О,Ак.А\/О\/СН3 Н2/ 0 т т Н2К СООКа О натрия (6К,7К)-3-[(ацетилокси)метил]-7-[[(2)-2-(2-амино-1,3-тиазолил-4)-2-(метиксиимино)ацетил]амино]-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоксилат	Клафоран Лифоран Тарцефоксим Цефабол Порошок для инъ­екций во флаконах по 1 и 2 г
Цефуроксима натриевая соль (СеГигохппе 8оПшт) РСН3 N Н II 1 Ат А СООКа О натрия (6/?,7К)-3-[(карбамоилокси)метил]-7-[[0-(2-фуранил)-2-(метоксиимино)ацетил]аамино]-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2- карбоксилат	Зинацеф Кетоцеф Суперо Цефурабол Порошок для инъ­екций во флаконах по 0,25; 0,75 и 1,5 г

Окончание табл. 2

Д_

_2_

^кн2

^. о о' о о

т х

н₃с о сн₃

(1Й$)-1-(ацетокси)этил (6^,7^)-3-[(карбамоилокси)метил]-7-[[(^)-(2-фуранил)-2-(метоксиимино)ацетил]аамино]-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоксилат

сн3 I -3

Цефтриаксона натриевая соль (СеЙпахопе 8ойшт)

дсн3

n н

" А д.

Зиннат

Таблетки по 0,25 и

0,5 г

Порошок для при­готовления суспен­зии

 

Лендацин

Лифаксон

Лонгацеф

Офрамакс

Роцефин

Цефтриабол

Порошок для инъ­екций во флаконах

по 0,25; 0,5; 1 и 2 г

Цефтазидим (СеЙагШте)

^Н3^С\/^СН3

О СООН

N Н

О 2—N

¹ N.

^Н2^{К 0} СОО⁰

 

•5Н20

Вицеф Тазицеф Фортум Цефтидин

Порошок для инъ­екций во флаконах по 1 г

(6К,7К)-7-[[(2)-2-(2-амино-1,3-тиазолил-4)-2-[(1-карбокси-1-метилэтокси)имино]ацетил1]амино]-8-оксо-3-[(1-пиридинио)метил]-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоксилат пентагидрат

2. Связь структуры и действия

 

В отличие от природных пенициллинов природный цефалоспорин обладает незначительной антибиотической активностью и не может быть использован в качестве лекарственного средства. В основе полу­синтетических цефалоспоринов, как уже отмечалось выше, лежит структура 7-аминоцефалоспорановой или 7-аминодезацетоксицефало-спорановой кислоты. Биологической активностью обладают соедине­ния, у которых 6-й и 7-й атомы в остатке 7-АЦК (7-АДЦК) имеют К-конфигурацию (антибиотики, у которых в 7-м положении содержится метоксигруппа, имеют ^-конфигурацию данного атома)

Соон

В табл. 3 показано влияние изменения структуры цефемного ядра на биологическую активность цефалоспоринов.

 

Влияние изменения структуры остатка 7-АЦК (7-АЦДК) кислоты на активность цефалоспоринов

Окончание табл. 3

1 | 2

8(5)	Образование сульфоксидов приводит к уменьшению биологической активности, замена серы на кислород или углерод повышает её СООКа Н ОСНз А ^ХуКА/СХ КуЖсн3 уХх о Хк^^Хх но О у СООКа моксалактама динатриевая соль 1 2 1 КЭ 0 Д^с: СООН лоракарбеф
С(6)	Введение заместителей в данное положение приводит к полной по­тере антибактериальных свойств цефалоспорина
С(7)	Модификация ]Ч-ацильного заместителя в 7Р-положении явля­ется основным способом модификации фармакологических свойств антибиотика и используется для получения полусинтети­ческих цефалоспоринов. Введение метокси- (цефамицины) или К-формиламиногруппы в 7-е положение повышает устойчивость соединения в отношении в- лактамаз Н 0СН3 0 Т Т СООКа О цефокситина натриевая соль

 

Важнейшими представителями цефалоспоринов являются имино-цефалоспорины. Одним из факторов, влияющих на антибактериальную активность данных соединений, является конфигурация двойной связи С=К: 2-изомеры (син-изомеры) более активны, чем А-изомеры (анти­изомеры). Например, в случае цефотаксима

ОСНз

 

К Н

Н2К

^-изомер

(старшие заместители расположены по одну сторону относительно плоскости связи)

Н2К

Е-изомер

(старшие заместители расположены по разные стороны относительно плоскости связи)

 

3. Способы получения

 

Цефалоспорины являются полусинтетическими антибиотиками. Исходным веществом для их синтеза является 7-АЦК, которую в свою очередь, получают из цефалоспорина С, синтезируемого биотехнологи­ческим способом. В отличие от 6-АПК 7-АЦК сложно получить фер­ментативным гидролизом природного антибиотика, поэтому основным методом получения 7-АЦК является химическое дезацилирование це-фалоспорина С. Вначале цефалоспорин С окисляют до иминолактона, который затем гидролизуют до 7-АЦК.

Н I

К.

 

КаСЮ/НСООН СН3

В некоторых странах используется ферментативная биокаталити­ческая технология получения 7-АЦК, состоящая из двух стадий. На первой стадии под действием оксидазы И-аминокислот микроорганизма Тпдопорш мапаЫШ цефалоспорин С превращается в глутарил-7-АЦК,

который на второй стадии гидролизуется глутарилацилазой Рзеийото-паз 8р. до 7-АЦК.

При дальнейшем получении различных цефалоспоринов проводят ацилирование 7-АЦК по аминогруппе и модификацию ацетилоксиме-тильной группы. Например, для получения цефазолина используют сле­дующие реакции

 

(СНз)зСООН

 

сн3

сн3

О

\ — зЛ " ¹¹

КА О О

ангидрид тетразолилуксусной и триметилуксусной кислот

н₃с

5-метил-1,3,4-тиадиазол-

2-меркаптан § _у N

Уд У

 

 

сООн О

гГД У

Н I

А

N.

II I

о

Соон

4. Физико-химические и химико-аналитические свойства 4.1. Внешний вид и растворимость

Для некоторых цефалоспоринов разработана технология биоката­литического ацилирования.

Большинство цефалоспоринов представляют собой натриевые со­ли соответствующих кислот. Данные вещества являются белыми или почти белыми порошками (некоторые могут быть желтоватыми), кото­рые легко растворимы в воде (табл. 4). Некоторые цефалоспорины (осо­бенно цефазолина натриевая соль) гигроскопичны. Цефалексин и на­триевые соли цефтриаксона и цефтазидима являются кристаллогидра­тами.

Кислотные формы цефалоспоринов (цефалексин, цефтазидим) и эфиры (цефуроксима аксетил) мало растворимы в воде. В этиловом спирте как солевые, так и кислотные формы антибиотиков данной груп­пы растворяются хуже, чем в воде. Все формы цефалоспоринов практи­чески нерастворимы в хлороформе и эфире.

 

4.2. Спектральные свойства

У О

ЯГ

 

Поглощение УФ-излучения. Цефалос-
$ порины значительно лучше, чем пенициллины,

ух2 СООН

поглощают электромагнитное излучение ближнего УФ-диапазона, что обусловлено присутствием в молекулах данных веществ хромофора, состоящего из двойной связи С=С, сопряжённой с амидной группой. Максимум поглощения такого хромо­фора находится в диапазоне 260 - 270 нм (величина молярного коэффи­циента поглощения достигает 10000)

е*10-3|

230 250 270 290 310 Я, нм

На рис. 1 показаны спектры поглощения цефазолина натриевой соли в кислой и щелочной среде, а в табл. 5 приведены значения макси­мумов поглощения и удельных показателей поглощения при Я_макс для некоторых цефалоспоринов.

Таблица 5

Поглощение ИК-излучения. Как и у пенициллинов важнейшие полосы поглощения цефалоспоринов в ИК-спектре находятся в диапа­зоне 1800 - 1500 см^-1. Например, в ИК-спектре цефалексина имеются полосы поглощения при 1730 см^-1 (поглощение лактамного кольца), 1670 см^-1 - колебания карбоксильной группу, 1550 см^-1 - валентные ко­лебания связи С=С.

Оптическая активность. В отличие от пенициллинов цефалоспо-рины могут быть как правовращающими, так и левовращающими веще­ствами (табл. 6). Так натриевые соли цефалотина, цефотаксима, цефу-роксима, а также цефалексин вращают плоскость поляризации плоско-поляризованного света вправо, в то время как натриевые соли цефазо-лина и цефтриаксона - влево. Абсолютные величины удельного враще­ния у цефалоспоринов меньше, чем у пенициллинов.

Таблица 6

Удельное вращение цефалоспоринов (согласно РН.ЕЦК 4)

 

Вещество	Растворитель (концентрация, г/л)
ЦЗ	вода (50)	от -15° до -24°
ЦТА	вода(10)	от-155° до -170°
ЦТ	вода (50)	от +124° до +134°
ЦЛ	фталатный БР рН 4,4 (5)	от +149° до +158°
ЦТМ	вода (10)	от +58° до +64°
ЦФМ	ацетатный БР рН 4,6 (20)	от +59° до +66°

 

4.3. Химические свойства

 

Цефалоспорины проявляют примерно такие же химические свой­ства, что и пенициллины. Они обладают кислотными свойствами за счёт карбоксильной группы, величина рК_а которой находится в диапазоне 2 - 3 (табл. 6). В кислотно-основные свойства некоторых цефалоспоринов вносят вклад радикалы, находящиеся в 3-м (К₂) и 7-м (К₁) положениях цефемного ядра. Например, в ацильном остатке К₁ у цефалексина со-

Кислотно-основные свойства пенициллинов

держится аминогруппа, поэтому в целом цефалексин является амофли-том. У цефтазидима в ацильном остатке имеется карбоксильная группа - у данного цефалоспорина преобладают кислотные свойства (карбок­сильная группа, связанная с цефемным ядром, образует внутреннюю соль с пиридиниевым ионом, находящимся в радикале К₂). Цефтриаксон является динатриевой солью (кислотными свойствами обладает гетеро­циклический остаток К₂).

Как и пенициллины цефалоспорины вступают в реакции 8м - гид­ролиз, образование гидроксамовых кислот и т.д. В кислой и щелочной средах продукты гидролиза цефалоспоринов (цефалоспороиновые ки­слоты) подвергаются изомеризации, декарбоксилированию ти и другим превращениям.

За счёт дигидротиазинового фрагмента цефалоспорины проявляют восстановительные свойства. При окислении данных веществ образу­ются окрашенные продукты, поэтому окислительно-восстановительные реакции могут быть использованы для идентификации цефалоспоринов. Так, при действии 1% раствором азотной кислоты в 80%-ной серной ки­слоте на цефалексин появляется жёлтое окрашивание, не цефалотина натриевую соль - оливково-зелёное, переходящее в красновато-коричневое и т.д.

Как и пенициллины цефалопорины образуют окрашенные продук­ты при взаимодействии с реактивом Марки. Реакцию цефалопоринов с данным реактивом проводят следующим образом. В пробирку длиной 150 мм и диаметром 15 мм помещают 2 мг исследуемого вещества, сма­чивают 0,05 мл воды и затем добавляют 2 мл раствора формальдегида в концентрированной серной кислоте. Отмечают окраску сразу и после нагревания в течение 1 минуты на водяной бане (табл. 8).

Таблица 8

Аналитические эффекты реакции цефалоспоринов с реактивом Марки

 

Вещество	Окраска продукта реакции
	без нагревания	нагревание
ЦЗ	бледно-жёлтая	жёлтая
ЦЛ	бледно-жёлтая	тёмно-жёлтая
ЦТМ	ярко-жёлтая	коричневая
ЦФМ	бледно-коричневая	красновато-коричневая
ЦТА	зеленовато-жёлтая	жёлтая

5. Фармакопейный контроль качества 5.1. Идентификация

 

Основными методами идентификации цефалоспоринов, согласно РЬ.Еиг. 4, являются ИК-спектроскопия и, в случае натриевых солей, про­ба на присутствие катиона натрия.

Идентификацию некоторых цефалоспоринов в РЬ.Еиг. 4 (и более широко в ВР 2001) проводят методом ТСХ. В качестве неподвижной фазы используется силанизированный силикагель, содержащий флуо­ресцентный индикатор. Подвижная фаза - смесь органического раство­рителя (ацетонитрил, ацетон, тетрагидрофуран, метилацетат) и водного раствора ацетата аммония (150 г/л), доведенного до рН 6,2 с помощью 5 М СН3СООН (табл. 9). Обнаружение пятен веществ проводят с помо­щью УФ-лампы (254 нм).

Таблица 9

Подвижные фазы, используемые для идентификации цефалоспоринов методом ТСХ

 

Вещества	Органический растворитель и его соотношение (по объёму) с раствором ацетата аммония
ЦЗ ЦЛ, ЦТМ ЦФМ ЦТА	ацетонитрил (15:85) ацетон (15:85) тетрагидрофуран (10:90) метилацетат (10:90)

 

При идентификации некоторых цефалоспоринов используются также реакция с реактивом Марки (см. табл. 8) и индивидуальные реак­ции, характерные для определённых цефалоспоринов (например, при действии на цефалексин сульфатом меди (II) в щелочной среде образу­ется комплексное соединение оливково-зелёного цвета).

5.2. Испытания на чистоту

Величины рН растворов, содержание воды и действующего вещества в субстанциях цефалоспоринов (согласно Рк.Еиг. 4)

При испытаниях на чистоту у цефалоспоринов определяются та­кие же показатели (и таким же образом), как и у пенициллинов: про­зрачность и цветность, рН, удельное вращение, оптическая плотность, родственные соединения, содержание остаточных растворителей (Ы,]4-диметиланилин, 2-этилгексановая кислота), вода, стерильность, бакте­риальные эндотоксины, сульфатная зола и тяжёлые металлы. В табл. 10 показаны допустимые значения некоторых характеристик цефалоспо-ринов. Так, растворы большинства цефалоспоринов имеют слабокислую или нейтральную среду (наименьшее допустимое значение рН у цефта-зидима натриевой соли, в структуре которого имеется дополнительная карбоксильная группа; наибольшее - у цефуроксима натриевой соли), содержание воды минимально у цефуроксима аксетила, максимально -цефтазидима натриевой соли.

5.3. Количественное определение

 

Как и в случае пенициллинов главным методом количественного определения цефалоспоринов как в субстанции, так и в готовых лекар­ственных средствах является ВЭЖХ (табл. 11). В качестве неподвижной фазы при определении цефалоспоринов данным методом используется

октадецилсиликагель (большинство цефалоспоринов), а также гексил-силикагель (цефуроксим, цефиазидим) и триметилсилилсиликагель (це-фуроксим аксетил). Подвижные фазы представляют собой смеси ацето-нитрила или (и) метанола и водных буферных растворов (фосфатный, ацетатный, цитратный). Детекция - спектрофотометрическая.

Условия количественного определения цефалоспоринов методом ВЭЖХ согласно Рк.Еиг. 4

Для количественного определения цефалоспоринов используются также УФ-спектрофометрия (может быть использована прямая спек-трофотометрия, так как цефалоспорины достаточно интенсивно погло­щают УФ-излучение), кислотно-основное титрование в неводных сре­дах (количественное определение цефалексина в ГСО) и т.д.

Литература

1. Беталактамные соединения. Взаимосвязь структуры и биологической ак­тивности / П.С. Ныс, В.Б. Курочкина, А.В. Скляренко, Г.А. Вейнберг // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - Т. 45, № 11. - С. 36 - 42.

2. Иваницкая Л.П. Направленный поиск природных беталактамных антибио­тиков // Антибиотики. - 1983. - Т. 28, № 2. - С. 37 - 56.

3. Курочкина В.Б., Ныс П.С. Новые беталактамные структуры. Проблемы конструирования // Антибиотики и химиотерапия. - 2002. - Т. 47, № 2. - С. 29 - 37.

4. Либинсон Г.С. Проблемы стандартизации антибиотиков. Устойчивость пенициллинов и цефалоспоринов в растворах // Антибиотики. - 1983. - Т. 28, № 2. -С. 56 - 75.

5. Ныс П.С., Бартошевич Ю.Э. Основы разработки биокаталитических про­цессов трансформации и синтеза беталактамных антибиотиков // Антибиотики и

химиотерапия. - 1999. - Т. 44, № 12. - С. 19 - 36.

6. Бекггшпайоп оГ сНззослайоп сопзЫгйз оГ серЬакзроппз Ьу сарШагу гопе е1ес1горЬоге818 / У. МгеМат, К. ЛеиЬег!, А. Мипк, М. Шезе // I. СЬгоша1о§г. А. - 1998. - Уо1. 803. - Р. 273 - 278.

7. Орйгшгайоп оГ зерагайоп апсС гшдгайоп ЬеЬауюг оГ серЬакзроппз т сарП-1агу гопе е1ес1горЬоге818 / С.Е. Ып, НАУ. Скеп, Е.С. Ып е1 а1 // I. СЬготаШдг. А. -2000. - Уо1. 879. - Р. 197 - 210.

8. Рёкоищ Р., Чаггу С. Бекгттайоп оГ ЙпгсС-депегайоп серЬа1о8ропп8 Ьу Ы§Ь-регГогшапсе НдшсС сЬгоша1о§гарЬу т соппесйоп рЬагтасоктейс 81псНе8 // I. СЬготаЮ§г. А. - 1998. - Уо1. 812. - Р. 159 - 178.

Как это выглядит ♦ Цефалоспорины для парентерального применения