Задание 1. Провести выделение токсических веществ из биологического объекта.

Измельченный растительный материал (картофель, лук, капуста, зелень и др.) в количестве 2-10 г помещают в диализационный цилиндр (стеклянную трубку с мембраной). Отмеривают 100 мл дистиллированной воды в стакан и помещают туда диализационный цилиндр с биоматериалом, предварительно смочив его несколькими миллилитрами дистиллированной воды из первоначального объема воды в стакане. Воды приливают столько, чтобы она хорошо смочила пробу. Проводят диализ в течение 1,5 - 2 часов.

Не вынимая диализационного цилиндра из стакана, пипеткой отбирают 10 мл диализата для анализа на нитриты и 5 мл для анализа на нитраты.

Количественное определение нитритов.

К 10 мл диализата, помещенного в пробирку добавляют 1 мл реактива Грисса, встряхивают содержимое пробирки. Через 15 мин. определяют оптическую плотность полученного раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

Количественное определение нитратов.

К 5 мл диализата, помещенным в пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно помещают 0,3 г сухого восстановителя, приливают 5 мл 12% уксусной кислоты, закрывают пробирку пробкой и энергично встряхивают ее в течение точно 2 мин.

В параллельную пробирку помещают 0,3 г сухого восстановителя и приливают 10 мл 12% уксусной кислоты, закрывают ее пробкой и встряхивают в течение 2 мин. ("холостой" раствор).

Через 10 мин. переливают содержимое пробирок в центрифужные пробирки и центрифугируют при 5 - 6 тыс. об./мин. в течение 5 мин. После этого определяют оптическую плотность исследуемого раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют "холостой" раствор - раствор уксусной кислоты, обработанный сухим восстановителем.

По калибровочным графикам находят содержание нитратов (нитрат - иона) и нитритов (нитрит – иона) и рассчитывают их концентрацию в исходном биологическом материале по формуле:

,

Где: C_калиб – концентрация нитрит-иона (нитрат-иона), найденная по калибровочному графику, мкг;

V_диал – объем диализата, мл;

V_аликв – объем аликвоты, взятой для анализа, мл;

m – масса навески биоматериала, г.

В том случае, если в пробах устанавливается наличие большого содержания нитритов - свыше 20 мкг (интенсивная окраска в пробирке), их следует удалять, так как они несколько завышают результаты определения нитратов. Для удаления нитритов к диализату в стакане, соответственно 50 или 100 мл, прибавляют 2 - 4 мл 1-процентного раствора сульфаминовой кислоты, перемешивают раствор стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После этого отбирают 5 мл диализата для анализа на нитраты и проводят анализ, как описано выше. При расчетах учитывают увеличение общего объема пробы.

Построение калибровочных кривых

1. Построение калибровочной кривой для определения нитритов.

В 11 химических пробирок помещают рабочий раствор нитрита натрия в количествах, указанных в таблице. Объем в пробирках доводят дистиллированной водой до 10 мл. Приливают по 1 мл реактива Грисса и энергично встряхивают.

Таблица: Данные для приготовления стандартных растворов для определения нитритов.

№ пробирки	Количество рабочего раствора NaNO2, мл	Содержание NO2
мг	мкг
	0,1	0,0005	0,5
	0,2	0,0010	1,0
	0,4	0,0020	2,0
	0,6	0,0030	3,0
	0,8	0,0040	4,0
	1,0	0,0050	5,0
	1,2	0,0060	6,0
	1,4	0,0070	7,0
	1,6	0,0080	8,0
	1,8	0,0090	9,0
	2,0	0,0100	10,0

 

Для построения калибровочной кривой через 15 мин. определяют оптическую плотность полученных растворов при λ = 540 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

 

2. Построение калибровочной кривой для определения нитратов.

В 7 пробирок с притертыми пробками или в 7 центрифужных пробирок с притертыми пробками последовательно прибавляют по 0,3 г реактива для восстановления нитратов, затем приливают рабочий раствор и 12% уксусную кислоту в количествах, указанных в таблице (общий объем составляет 10 мл).

Таблица: Данные для приготовления стандартных растворов для определения нитратов.

№ пробирки	Количество рабочего раствора NaNO2, мл	Содержание NO2	Кол-во 1% уксусной кислоты, мл
мг	мкг
	0,0	0,0	-	10,0
	1,0	0,010		9,0
	2,0	0,020		8,0
	4,0	0,040		6,0
	6,0	0,060		4,0
	8,0	0,080		2,0
	10,0	0,100		0,0

 

Затем пробирки или центрифужные пробирки закрывают пробками и энергично встряхивают в течение ровно 2 мин. Через 10 мин. пробы центрифугируют в центрифужных пробирках при 5 - 6 тыс. об./мин. в течение 5 мин. После этого определяют оптическую плотность исследуемого раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют "холостой" раствор - раствор уксусной кислоты, обработанный сухим восстановителем

 

Вопросы для самоконтроля.

 

1. Каковы особенности исследования на наличие минеральных кислот в биоматериале и биожидкости?

2. Какие предварительные испытания на вещества, изолируемые настаиванием с водой, вы знаете?

3. Какие объекты следует направлять на исследования при остром отравлении минеральными кислотами?

4. Какие объекты следует направлять на исследования при остром отравлении едкими щелочами?

5. Какие существуют методы изолирования и очистки извлечений при отравлениях минеральными кислотами, едкими щелочами?

6. Как проводится химико-токсикологический анализ на наличие серной кислоты?

7. Как проводится химико-токсикологический анализ на присутствие азотной кислоты?

8. Каковы особенности проведения исследования на наличие хлористоводородной кислоты?

9. Токсикологическое значение минеральных кислот, симптомы отравления, первая помощь при отравлении ими.

10. В чем заключается особенность обнаружения аммиака в биологическом материале? Интерпретация результатов исследования на наличие аммиака.

11. Как проводится химико-токсикологический анализ на наличие натрия гидроксида?

12. Химико-токсикологический анализ на присутствие солей азотной и азотистой кислот (нитритов и нитратов).

13. Как отличить едкую щелочь от растворов карбонатов (гидрокарбонатов)?

14. Как отличить минеральные кислоты от органических?