Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Занятие № 30




 

ТЕМА. ОБЩАЯ СХЕМА ИСТОЧНИКОВ И ПУТЕЙ УТИЛИ-ЗАЦИИ АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ. КАТЕПСИНЫ. СПЕ-ЦИФИЧЕСКИЕ ПУТИ ОБМЕНА НЕКОТОРЫХ АМИНОКИСЛОТ. ПАТОЛОГИЯ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКТОВ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ.

 

Цель занятия: 1.Изучить специфические пути обмена отдельных аминокислот.

2.Знать физиологическое значение метаболитов - производных аминокислот.

3.Ознакомиться с патологией азотистого обмена.

4.Овладеть методами определения продуктов азотистого обмена в крови и моче.

Исходный уровень знаний:

- химия аминокислот;

- заменимые и незаменимые аминокислоты;

- универсальные пути катаболизма аминокислот;

- витамины РР, ВС: строение, биологическая роль.

Содержание занятия.

I.2. Обмен глицина и серина: взаимопревращения, роль ТГФК.

Обмен серосодержащих аминокислот: взаимопревращения, особенности дезаминирования, синтез креатинина, глутатиона.

Обмен фенилаланина и тирозина: распад до фумаровой и ацетоуксусной кислот, синтез катехоламинов, тиронинов, меланина.

Обмен триптофана: серотониновый и кинурениновый пути.

Схема утилизации дикарбоновых аминокислот.

Врожденные и вторичные нарушения азотистого обмена.

 

II.1. Работа № 1. ОТКРЫТИЕ КРЕАТИНИНА В МОЧЕ.

 

Креатинин образуется из креатина или фосфокреатина путем отщепления фосфорной кислоты и выделяется с мочой в количестве около 2 г/сут.

Принцип метода.

Наиболее характерными реакциями для креатинина являются реакция образования нестойкого нитрозокреатинина (красного цвета) и реакция образования хорошо растворимой соли пикрата креатинина, окрашенной в оранжево-красный цвет.

 

Порядок выполнения работы.

а) Нитропруссидная проба.

К 1 мл мочи добавить 0,5 мл 10% раствора едкого натра и 0,5 мл нитропруссида натрия. Отметить окраску. После добавления уксусной кислоты окраска быстро исчезает.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

б) Реакция с пикриновой кислотой.

К 1 мл мочи добавить 10 кап 10% раствора пикриновой кислоты и столько же 10% раствора едкого натра.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

Работа № 4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРЕ-

АТИНИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (БИОТЕСТ).

Принцип метода.

В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски, которую измеряют фотометрически. Определение в сыворотке крови проводят после депротеинирования, в моче - после разведения водой. Определение не совсем специфично

Порядок выполнения работы.

 

Реактивы (мл) Проба Контроль Эталон
Сыворотка крови 0,5 - -
Дистиллированная вода 1,0 1,5 1,0
Калибровочный раствор - - 0,5
Реактив 3 (ТХУ) -осторожно! 0,5 0,5 0,5
  Перемешать, отцентрифугировать пробу при 1500 об/мин – 10 мин.
Надосадочная жидкость 1,0 1,0 1,0
Реактив 4 (пикриновая кислота) 0,5 0,5 0,5
Реактив 5 (NaOH) 0,5 0,5 0,5

 

Перемешать и точно через 20 мин измерить оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против контрольного раствора при длине волны 500-510 нм, кювета 1 см.

 

РАСЧЕТ: Количество креатинина (Х) рассчитать по формуле

А1

Х = 177 •мкмоль/л

А2

NB.Определение не совсем специфично, т.к. интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, напр., глюкоза.

Физиологические значения.

В норме показатель у мужчин составляет 61-115 мкмоль/л,

у женщин - 58- 97 мкмоль/л.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

 

Работа № 3. ОБНАРУЖЕНИЕ АММОНИЙНЫХ СОЛЕЙ В МОЧЕ.

 

Принцип метода.

При добавлении в пробирку с мочой раствора слабой щелочи жидкость приобретает запах аммиака вследствие разложения присутствующих в моче аммонийных солей.

2NH4Cl + Ca(OH)2 →2NH4OH + CaCl2

Слабые щелочи типа гидроксида кальция не разлагают азотсодержащие органические вещества (мочевину, креатинин и др.) и разрушают только аммонийные соли.

 

Порядок выполнения работы.

В пробирку налить 1-2 мл мочи и столько же раствора Ca(OH)2. Опустить в жидкость влажную красную лакмусовую бумажку. Через 1-2 мин отметить изменение окраски бумажки. Пробирку можно закрыть ватой.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

III.2. Контрольные вопросы.

Какие продукты азотистого обмена определяются в моче здоровых людей?

Сколько за сутки выделяется креатинина с мочой?

Сколько в норме креатинина в сыворотке крови?

Какие цветные реакции используются для определения креатинина?

Специфичен ли БИОТЕСТ на креатинин? Почему?

 

Материал для самоподготовки. а)1 с.451-468, 567-579; II, III

 







Дата добавления: 2015-09-15; просмотров: 486. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.004 сек.) русская версия | украинская версия