Занятие № 30

 

ТЕМА. ОБЩАЯ СХЕМА ИСТОЧНИКОВ И ПУТЕЙ УТИЛИ-ЗАЦИИ АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ. КАТЕПСИНЫ. СПЕ-ЦИФИЧЕСКИЕ ПУТИ ОБМЕНА НЕКОТОРЫХ АМИНОКИСЛОТ. ПАТОЛОГИЯ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКТОВ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ.

 

Цель занятия: 1.Изучить специфические пути обмена отдельных аминокислот.

2.Знать физиологическое значение метаболитов - производных аминокислот.

3.Ознакомиться с патологией азотистого обмена.

4.Овладеть методами определения продуктов азотистого обмена в крови и моче.

Исходный уровень знаний:

- химия аминокислот;

- заменимые и незаменимые аминокислоты;

- универсальные пути катаболизма аминокислот;

- витамины РР, В_С: строение, биологическая роль.

Содержание занятия.

I.2. Обмен глицина и серина: взаимопревращения, роль ТГФК.

Обмен серосодержащих аминокислот: взаимопревращения, особенности дезаминирования, синтез креатинина, глутатиона.

Обмен фенилаланина и тирозина: распад до фумаровой и ацетоуксусной кислот, синтез катехоламинов, тиронинов, меланина.

Обмен триптофана: серотониновый и кинурениновый пути.

Схема утилизации дикарбоновых аминокислот.

Врожденные и вторичные нарушения азотистого обмена.

 

II.1. Работа № 1. ОТКРЫТИЕ КРЕАТИНИНА В МОЧЕ.

 

Креатинин образуется из креатина или фосфокреатина путем отщепления фосфорной кислоты и выделяется с мочой в количестве около 2 г/сут.

Принцип метода.

Наиболее характерными реакциями для креатинина являются реакция образования нестойкого нитрозокреатинина (красного цвета) и реакция образования хорошо растворимой соли пикрата креатинина, окрашенной в оранжево-красный цвет.

 

Порядок выполнения работы.

а) Нитропруссидная проба.

К 1 мл мочи добавить 0,5 мл 10% раствора едкого натра и 0,5 мл нитропруссида натрия. Отметить окраску. После добавления уксусной кислоты окраска быстро исчезает.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

б) Реакция с пикриновой кислотой.

К 1 мл мочи добавить 10 кап 10% раствора пикриновой кислоты и столько же 10% раствора едкого натра.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

Работа № 4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРЕ-

АТИНИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (БИОТЕСТ).

Принцип метода.

В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски, которую измеряют фотометрически. Определение в сыворотке крови проводят после депротеинирования, в моче - после разведения водой. Определение не совсем специфично

Порядок выполнения работы.

 

Реактивы (мл)	Проба	Контроль	Эталон
Сыворотка крови	0,5	-	-
Дистиллированная вода	1,0	1,5	1,0
Калибровочный раствор	-	-	0,5
Реактив 3 (ТХУ) -осторожно!	0,5	0,5	0,5
	Перемешать, отцентрифугировать пробу при 1500 об/мин – 10 мин.
Надосадочная жидкость	1,0	1,0	1,0
Реактив 4 (пикриновая кислота)	0,5	0,5	0,5
Реактив 5 (NaOH)	0,5	0,5	0,5

 

Перемешать и точно через 20 мин измерить оптическую плотность пробы (А₁) и эталона (А₂) против контрольного раствора при длине волны 500-510 нм, кювета 1 см.

 

РАСЧЕТ: Количество креатинина (Х) рассчитать по формуле

А₁

Х = 177 • мкмоль/л

А₂

NB. Определение не совсем специфично, т.к. интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, напр., глюкоза.

Физиологические значения.

В норме показатель у мужчин составляет 61-115 мкмоль/л,

у женщин - 58- 97 мкмоль/л.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

 

Работа № 3. ОБНАРУЖЕНИЕ АММОНИЙНЫХ СОЛЕЙ В МОЧЕ.

 

Принцип метода.

При добавлении в пробирку с мочой раствора слабой щелочи жидкость приобретает запах аммиака вследствие разложения присутствующих в моче аммонийных солей.

2NH₄Cl + Ca(OH)₂ →2NH₄OH + CaCl₂

Слабые щелочи типа гидроксида кальция не разлагают азотсодержащие органические вещества (мочевину, креатинин и др.) и разрушают только аммонийные соли.

 

Порядок выполнения работы.

В пробирку налить 1-2 мл мочи и столько же раствора Ca(OH)₂. Опустить в жидкость влажную красную лакмусовую бумажку. Через 1-2 мин отметить изменение окраски бумажки. Пробирку можно закрыть ватой.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

III.2. Контрольные вопросы.

Какие продукты азотистого обмена определяются в моче здоровых людей?

Сколько за сутки выделяется креатинина с мочой?

Сколько в норме креатинина в сыворотке крови?

Какие цветные реакции используются для определения креатинина?

Специфичен ли БИОТЕСТ на креатинин? Почему?

 

Материал для самоподготовки. а)1 с.451-468, 567-579; II, III