ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ 2 страница

На среде Плоскирева колонии бесцветны, но более плотные и несколько меньших размеров.

На среде Эндо (Мак-Конки) сальмонеллы растут в виде круглых, бесцветных или слегка розоватых прозрачных нежных колоний.

На ЭМС-агаре колонии прозрачные, слабо-розовые или розово-фиолетовые.

На SS-агаре, на XLD-агаре сальмонеллы образуют колонии красного цвета с черным центром, за счет образования H₂S.

Посевы на висмут-сульфит агаре просматривают дополнительно через 48 часов.

Производят высев из среды обогащения на плотные питательные среды.

Из посевов желчи в бульон и из исходной желчи, содержащихся в термостате, производят высев на чашки со средами Эндо, Плоскирева и висмут-сульфит агаром.

Из посева крови в 10-20% желчный бульон или среду Рапопорт производят высев на чашку со средой Эндо, а исходный посев крови снова помещают в термостат, высевы повторяют на 3-4-6 и 10 сутки.

Третий день. Производят идентификацию культур, высеянных на комбинированую среду. По совокупности биохимических свойств, выявленных на комбинированной среде, делают предварительное заключение о возможной принадлежности культуры к роду сальмонелла, а также подбирают необходимый минимум дифференциальных тестов для определения рода и производят посевы на соответствующие среды, согласно приложению 4 к настоящей Инструкции. На этом этапе также проводят ориентировочную серологическую пробу в реакции агглютинации на стекле с поливалентными сыворотками (АВСДЕ и редких групп).

Типичными для бактерий рода Salmonellа являются культуры, ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, образующие сероводород. Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположительные бактерии, или бактерии не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.

На третий день исследования производят также просмотр чашек с посевами из сред обогащения, и подозрительные колонии отсевают на комбинированную среду.

Если при первичном посеве и при высеве из сред обогащения подозрительных колоний не обнаружено, может быть выдан ответ об отрицательном результате исследования.

Посевы на висмут-сульфит агаре (из среды обогащения) независимо от результатов просмотра оставляют в термостате еще на 24 часа.

В этот же день просматривают чашки с первым высевом из флакона с засеянной кровью и дуоденальным содержимым, подозрительные колонии пересевают на комбинированную среду.

На третий день также производят посев выделенной культуры для испытания ее на чувствительность к сальмонеллезному О-фагу, являющемуся высокоспецифичным для этих бактерий, он лизирует 97,5 % штаммов сальмонелл. Для этого две капли четырех- или восемнадцати-часовой бульонной культуры испытуемого штамма наносят тонкооттянутой пастеровской пипеткой или петлей (диаметр 0,4-0,5 мм) на хорошо подсушенный слабощелочной агар в чашки Петри. После подсыхания на одну из капель, петлей или пастеровской пипеткой меньшего диаметра, наносят О-бактериофаг, а на другую, в качестве контроля - каплю бульона. Фаг наносят в рабочем разведении, указанном на этикетке. Чашки с нанесенными культурами и О-бактериофагом помещают в термостат при 37°С на 18-20 часов, после чего учитывают результаты. Появление на месте нанесения фага четко очерченной зоны сливного лизиса или большего или меньшего числа негативных колоний, отчетливо видимых невооруженным глазом, свидетельствует о чувствительности культур к бактериофагу. При отсутствии лизиса в местах нанесения фага будет сплошной рост культуры, как в контроле. О-фаг может быть использован для предварительного испытания культуры из колонии с чашки с дифференциальной средой.

Культура, лизировавшаяся О-фагом, является подозрительной на сальмонеллу и может быть прямо с чашки испытана в реакции агглютинации со смесью сальмонеллезных О-сывороток. Атипичные сальмонеллезные культуры в большинстве случаев чувствительны к О-фагу, в то время, как культуры, лишь сходные с сальмонеллами по биохимическим свойствам (например, лактозонегативные E.coli), как правило, не лизируются этим фагом.

Четвертый день. Производят учет результатов, биохимических тестов, выделенных культур. После подтверждения биохимическими тестами принадлежности культуры к роду Salmonellа, проводят окончательную серологическую идентификацию. Для идентификации используют культуру выросшую на слабощелочном питательном агаре.

Серологическую идентификацию (определение серовара) сальмонелл начинают с испытания их в реакции агглютинации на стекле с поливалентной адсорбированной О-сывороткой к сальмонеллам групп ABCDE. При отсутствии реакции с указанной смесью, культуру испытывают с поливалентной сывороткой, включающей антитела к антигенам сальмонелл редких групп (11, 13, 15, 19, 22, 23 и др.). При получении положительных результатов с поливалентной сывороткой ABCDE культуру испытывают с отдельными О-сыворотками, для определения принадлежности ее к одной из О-групп.

После установления принадлежности культуры к какой-либо О-группе (A,B,C,D,E) определяют полную структуру ее О-антигена, а затем испытывают культуру с монорецепторными Н-сыворотками, сначала первой фазы, а затем – второй и таким образом устанавливают антигенную формулу выделенной культуры, т.е. ее серовар в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта

Для агглютинации с О-сыворотками культуру следует брать с верхней части роста на скошенном агаре, для агглютинации с Н-сыворотками - из самой нижней части роста культуры или из конденсата, где располагаются особи с наиболее развитым Н-антигеном.

При серологической идентификации культуры возможны трудности в выявлении Н-антигена или одной из его фаз. Для выявления отсутствующей фазы Н-антигена используют феномен роения по Свену - Гарду. Принцип его заключается в том, что на неплотном агаре (0,9-1%) роятся все подвижные микробы.

Если добавить к агару 1-2 капли сыворотки известной нам фазы, т.е. той фазы, которая была определена, то она свяжет выявленный антиген, а особи микробов, богатые другим, неизвестным антигеном будут бурно роиться. Этот антиген легко может быть выявлен при испытании культуры, взятой с края макроколонии, в реакции агглютинации. Для приготовления 1,0% агара к 15 мл 2% агара добавляют 15 мл мясопептонного бульона. Охлаждают до 45⁰С, выливают в чашку Петри, подсушивают в термостате при 37⁰С – 15-20 мин. В центр чашки на агар наносят 1-2 капли сыворотки, соответствующей выявленной фазе Н-антигена. После того, как сыворотка впитается в агар, на то же место петлей наносят испытуемую культуру (18-часового роста на скошенном агаре), диаметром 3-4 мм. Чашки инкубируют при 37⁰С в течение 18-20 часов. На следующий день с края микроколонии берут культуру и испытывают ее в реакции агглютинации на стекле с соответствующими монорецепторными Н-сыворотками.

В этот же день производят просмотр чашек со вторым высевом дуоденального содержимого из бульона и третий высев из последнего на плотные среды. При отрицательных результатах первых двух высевов из желчного бульона с посевом крови, высевы повторяются на 5-й и 10-й дни.

При идентификации культур, подозрительных на сальмонеллы, чаще всего вызывают затруднение бактерии биохимически сходные с сальмонеллами, но не агглютинирующиеся сальмонеллезными сыворотками, либо дающие агглютинацию, но отклоняющиеся по биохимическим свойствам.

В таких случаях, прежде всего, необходимо убедиться в чистоте культуры, для чего следует произвести ее рассев на чашку со средой Эндо, отобрать наиболее типичные колонии и подвергнуть их дополнительному изучению.

В случае выделения культур, агглютинирующихся смесью О-сывороток редких групп, но не агглютинирующихся ни одной из О-сывороток, входящих в смесь, необходима постановка дополнительных биохимических тестов. Тесты с помощью которых проводят дифференциацию бактерий рода Salmonellа с другими представителями других родов семейства Enterobacteriaceae, согласно приложению 5 к настоящей Инструкции.

Исследование пищевых продуктов.

Неселективное предварительное обогащение. Навеску продукта, в массе (объеме) которой нормативно-технической документацией на анализируемый продукт предусматривается отсутствие бактерий рода Salmonellа, засевают в забуференную пептонную воду. Соотношение массы (объема) продукта и забуференной пептонной воды 1:9. При посеве жидких высококислотных продуктов рН продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2. При посеве твердых высококислотных продуктов доводят рН до 7,0±0,2 в посевах. Доведение рН проводят асептически при помощи стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной кислоты. Посевы инкубируют при температуре 37⁰С в течение 18-20 часов.

Селективное обогащение. Культуры полученные после инкубирования пересевают в две среды для селективного обогащения. Для этого 10 см³ культуры переносят в 100 см³ магниевой (селенитовой) среды и в 100 см³ тетратионатной среды. Посевы инкубируют в течение 24-48 часов на магниевой (селенитовой) среде при температуре 37⁰С, а на тетратионатной среде - (43±1)°С.

Выделение и идентификация культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах. Культуры через 24-48 часов пересевают со сред обогащения на дифференциально-диагностические питательные среды (висмут-сульфит агар, среду Плоскирева, среду Эндо (или Левина)), инкубируют при 37⁰С в течение 24-48 часов.

После 24 часов инкубирования проводят предварительный учет результатов, а после 48 часов - окончательный. Отмечают рост колоний характерных для бактерий рода Salmonellа на дифференциально-диагностических средах. Характеристика колоний описана выше. При наличии характерных колоний проводят их дальнейшее изучение. Проводят высев со сред обогащения через 48 часов инкубирования на дифференциально-диагностические среды.

Проводят окончательный учет результатов. При отсутствии в посевах характерных для бактерий рода Salmonellа колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonellа в анализируемой навеске продукта. При наличии характерных колоний проводят их дальнейшее изучение как описано выше.

Для уменьшения риска получения ложно отрицательных результатов существуют многочисленные методы выделения сальмонелл.

Одним из таких методов является метод в соответствии с ISO-6579 стандартом. При выделении сальмонелл из пищевых продуктов и испражнений проводится предварительное обогащение на неселективной питательной среде больших порций образца и селективное обогащение с использованием двух селективных сред. Объем образца определяет чувствительность исследования, чем больше объем исследуемого образца, тем выше чувствительность исследования. Важно, что соотношение между объемом образца и бульоном предобогащения должно составлять 1:9.

Первый день. Неселективное предобогащение. К 25 г пищевого продукта или испражнений добавить 225 мл забуференной пептонной воды (соотношение объема образца и воды 1:9), перемешать, инкубировать при 37⁰С 16-20 часов.

Второй день. Селективное обогащение. Поместить 1 мл предобогащенной смеси в 10 мл тетратионатного бульона (Мюллер-Кауфмана), инкубировать при 37⁰С 18-24 часа, 0,1 мл предобогащенной смеси поместить в 10 мл Рапопорт-Вассилиадис соево- пептонного бульона, инкубировать при 41,5⁰С 18-24 часа.

Третий день. Посев образцов на элективные питательные среды. Образцы из тетратионатного бульона и Рапопорт-Вассилиадис соево- пептонного бульона высеять петлей на XLD-агар и агар с бриллиантовым зеленым (BGA-агар), инкубировать при 37⁰С 18-24 часа.

Четвертый день. Регистрация результатов посева на XLD-агаре и BGA-агаре. На XLD-агаре колонии типичные для рода сальмонелла имеют красную периферическую зону с черной центральной частью. Иногда периферическая часть колоний может быть розового цвета. На BGA-агаре цвет колоний варьирует от розово-серого до красного. Отсев подозрительных колоний на простой питательный агар для дальнейшей биохимической идентификации и серотипирования.

Пятый день. Биохимическое подтверждение и серотипирование сальмонелл.

Колонии выделенной чистой культуры, выращенной на питательном агаре инокулировать на: TSI-агар, агар с мочевиной, L – лизин-декарбоксилазный тест, тест на β – галактозидазу, реакцию Фогес-Проскауэр, тест на индол. Инкубировать при 37⁰С 18-24 часа. Серотипирование сальмонелл выполяется путем идентификации О-антигена и Н-антигенов как описано выше.

Шестой день. Регистрация результатов биохимической идентификации. Биохимические свойства бактерий рода сальмонелла согласно приложению 6 к настоящей Инструкции.

 

ГЛАВА 4

БАКТЕРИИ РОДА SHIGELLA

Шигеллы – бактерии, относящиеся к семейству Enterobacteriaceae, роду Shigella. Род состоит из 4-х видов (подгрупп): A- S.dysenteriae (типовой вид); B-S.flexneri; C - S.boydii и D – S.sonnei, которые вызывают бактериальную дизентерию (шигеллез) – антропонозную кишечную инфекционную болезнь с преимущественным поражением толстой кишки. Разделение на виды основано на определении биохимических характеристик и антигенного строения. (Классификация бактерий рода Shigella согласно приложению 7 к настоящей Инструкции).

Шигеллы – прямые грамотрицательные неподвижные палочки с закругленными концами (0,7-1,0 х 1-3мкм), оксидазоотрицательные, каталазоположительные, не образуют спор. Хемоорганотрофы, обладающие дыхательным и бродильным типами метаболизма. Факультативные анаэробы, оптимальная температура роста 37°С.

Пищевые продукты, содержащие бактерии рода Shigella могут быть причиной заболеваний, протекающих по типу пищевых бактериальных отравлений. Среди продуктов, которые могут вызвать массовые заболевания, протекающие клинически по типу пищевой токсикоинфекции, чаще всего регистрируются молоко и молочные продукты, изделия из отварного мяса (паштеты, мясные салаты).

Шигеллы довольно устойчивы во внешней среде: на ткани и бумаге сохраняются до 1 месяца, в высохших испражнениях до 5 месяцев, в почве-3-4 месяца, в воде до 15 дней. На овощах и фруктах остаются живыми не более 2 недель, в молоке и молочных продуктах - несколько недель. При 60°С погибают в течение 15-20 минут, при кипячении-мгновенно.

Биохимические свойства бактерий рода Shigella, согласно приложению 8 к настоящей Инструкции, свидетельствуют о малой биохимической активности этих бактерий. Ряд реакций характерен для представителей всего рода. Так, все шигеллы неподвижны, не образуют сероводорода из неорганических соединений серы, не гидролизуют мочевину, не утилизируют малонат натрия, цитрат в среде Симонса как единственный источник углерода и D-тартрат, не продуцируют ацетоин в реакции Фогес-Проскауэра, не обладают фенилаланиндезаминазой, лизиндекарбоксилазой и желатиназой, не вызывают щелочения среды Кристенсена, не растут в присутствии KCN, не ферментируют адонит и инозит, но дают положительную реакцию с метиловым красным. Образование индола вариабельно.

Шигеллам отдельных видов присущи свои биохимические особенности, согласно приложению 9 к настоящей Инструкции.

Характерным для S.dysenteriae является их слабая ферментативная активность, они ферментируют глюкозу без газообразования. Поскольку они не разлагают маннит, а другие виды его ферментируют, они также известны как маннитнегативные шигеллы.

Более биохимически активны S.flexneri сероваров 1-5 и варианты X и Y, которые постоянно ферментируют маннит, трегалозу, а вариабельно-мальтозу, сорбит, арабинозу, рафинозу, рамнозу и некоторые штаммы-замедленно сахарозу. Своеобразна способность S. flexneri 6 сбраживать или не сбраживать маннит и образовывать газ в глюкозе.

S.boydii также относятя к маннитположительным видам. По большинству биохимических реакций они вариабельны. К числу отрицательных относят реакции в средах с лактозой, сахарозой и орнитином (кроме серовара 13.).

Наиболее активны по ферментативным свойствам S.sonnei. Они способны, хотя и замедленно ферментировать лактозу и сахарозу, постоянно ферментируют маннит, рамнозу, мальтозу, арабинозу, трегалозу, обладают арнитиндекарбоксилазой и β-галактозидазой, вариабельны по утилизации муката и сбраживанию ксилозы, рафинозы, глицерина, целлобиозы; постоянно отрицательны в отношении дульцита, индола.

Антигенная структура шигелл представлена О- и К-антигенами. Термолабильные оболочечные К-антигены обнаружены у всех шигелл (за исключением S. flexneri и S. sonnei). Они способны маскировать О-антигены и тем самым блокировать агглютинацию бактерий О-антисыворотками (действие снимают кипячением в течение 1 часа). Термостабильные соматические О-антигены разделяют на типовые и групповые. Соответственно шигеллы разделяют на подгруппы (виды). Вид S.dysenteriae (подгруппа А) представлен 12 сероварами, в своем большинстве серологически обособленными. Вид S.flexneri (подгруппа В) имеет 13 сероваров и подсероваров, перекрестно реагирующих между собой за счет мночисленных групповых антигенов. Вид S.boydii (подгруппа С) представлен 18 сероварами, не имеющим между собой заметного антигенного родства, за исключением тесно связанных сероваров 10 и 11. Вид S.sonnei (подгруппа Д) серологически однороден.

Критерии диагностики. Доказательством этиологической роли возбудителя является выделение в очаге шигелл определенного серовара (подсеровара) от больных, подозреваемых источников инфекции (больных или бактерионосителей), из продуктов питания, смывов и т. д., идентичных по биовару о другим эпидемиологическим маркерам.

Для выявления источника инфекции и подтверждения клинического диагноза у больных возможно проведение серологических исследований (РПГА) с целью обнаружения в сыворотке крови обследуемых специфических антител,.

Бактериологические исследования.

Первый день. Обнаружение шигелл в исследуемом клиническом материале и пищевых продуктах проводят параллельно с обнаружением сальмонелл в тех же посевах и на тех же средах, описание которых приведено в главе 3 настоящей Инструкции. В качестве среды обогащения для шигелл применяют селенитовый бульон.

Второй день. Просматривают чашки с посевами. На диффернциально-диагностических средах шигеллы образуют небольшие (1-1,5 мм), круглые, слегка выпуклые, с ровными краями, бесцветные колонии, блестящей поверхностью, полупрозрачные, легко снимающиеся петлей с поверхности агара. Одновременно могут находиться колонии гладкой, шероховатой и переходной формы. Колонии отсевают на комбинированную среду (Клиглер, Олькеницкого и др). С селенитовой среды накопления производят пересев на среды Плоскирева, Эндо, SS-агар. Все посевы инкубируют при 37⁰С 18-20 часов.

Третий день. Просматривают чашки с пересевами из селенитовой среды обогащения и отсевают подозрительные колонии на комбинированную среду, инкубируют при 37⁰С 18-20 часов.

Проводят идентификацию культур высеянных накануне на комбинированную среду.

Для дальнейшего изучения отбирают культуры грамотрицательных палочек с характерными свойствами для шигелл: не расщепляющие лактозу и мочевину, не образующие сероводород, не образующие газ при ферментации глюкозы (исключая газообразование подвида S. flexneri), неподвижные. Среди S. sonnei встречаются биохимические варианты, ферментирующие лактозу до кислоты. На этом этапе изучаемые культуры подвергают дальнейшей биохимической идентификации, с использованием тестов минимального дифференцирующего ряда согласно приложению 4 к настоящей Инструкции, проводят ориентировочную серологическую пробу с основной поливалентной сывороткой, содержащей антитела к S.flexneri 1-6 и S. sonnei.

Четвертый день. Производят окончательную идентификацию культур по биохимическим свойствам и серологическую идентификацию.

При идентификации выделенных культур могут возникнуть некоторые затруднения: выделение культур шигелл с отклонениями от типичной характеристики по ферментативной активности, например, встречаются маннитнегативные варианты S.sonnei и S.flexneri, маннитферментирующие разновидности S.dysenteriae серовары 3-7, ксилозоферментирующий вариант S. flexneri, лактозоферментирующий вариант S.boydii; выделение инагглютинабильных дизентерийных культур: из-за наличия поверхностного антигена «К», в этом случае прогревание культуры в течение 1-1,5 часов при 100⁰С разрушает термолабильный К-антиген и агглютинация с О-сывороткой восстанавливается; из-за утраты типоспецифического антигена S.flexneri, селекционирование отдельных колоний с питательного агара, обладающих полным антигенным комплексом, позволяет выяснить истинный серовар культуры; выделение атипичных представителей семейства Enterobacteriaceae, обнаруживающих сходство по биохимическим и серологическим свойствам с шигеллами. Дифференциальные биохимические признаки некоторых представителей наиболее часто встречающихся родов семейства Enterobacteriaceae, представлены в приложении 5 к настоящей Инструкции.

Серологическую идентификацию шигелл начинают с основной поливалентной сыворотки, содержащей антитела S.flexneri 1-6 и S.sonnei. При положительном результате используют поливалентные сыворотки к S.flexneri и S.sonnei. Определение серовара S.flexneri начинают с применения сероварспецифических (типовых) сывороток (I, II, III, IV, V, VI,), а затем групповых (3, 4; 6; 7; 8), выявляющих подсеровар. Иногда свежевыделенные штаммы слабо агглютинируются. Необходимо провести 1-2 пассажа 4-часовой бульонной культуры с высевом на питательный агар, проверить чистоту культуры. При отсутствии агглютинации в основной поливалентной сыворотке штамм необходимо испытывать с поливалентными сыворотками к S. dysenteriae. Сбраживающие маннит штаммы с поливалентными сыворотками к S. boydii. Штаммы, обладающие культуральными и биохимическими свойствами, типичными для шигелл, но не агглютинирующиеся шигеллезными сыворотками, следует испытывать с сыворотками провизорных сероваров.

Дополнительно целесообразно исследовать чувствительность выделенных культур к поливалентному дизентерийному фагу. Для этого используют следующую методику: на хорошо подсушенную чашку со слабо щелочным агаром (рН 7,6) наносят пастеровской пипеткой каплю смыва 18-20 часовой агаровой культуры. На подсохшие капли пастеровской пипеткой наносят дизентерийный бактериофаг, после подсушивания чашки инкубируют при 37⁰С в течение 18-20 часов. При положительном результате наблюдается задержка роста культуры на чашках с бактериофагом.

В затруднительных случаях при идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae рекомендуется применить кератоконъюктивальную пробу на морских свинках. При постановке этой пробы полную петлю (диаметром 5 мм) суточной агаровой культуры вносят в конъюктивальный мешок глаза морской свинки под нижнее веко. Подавляющее большинство свежевыделенных дизентерийных бактерий вызывает у морских свинок специфический кератоконъюнктивит на 2-5 сутки: конъюнктива гиперимирована, роговица мутная, набухшая, с белесоватым оттенком, обильное гнойное отделяемое.

Кроме шигелл кератоконъюнктивит могут вызывать патогенные кишечные палочки серотипа 0124:В17 и очень редко некоторые сальмонеллы (например - S. typhimurium), но эти энтеробактерии легко дифференцируются от шигелл по их биохимическим свойствам.

Для установления эпидемиологической метки (маркера-штамма) существует ряд методов.

Метод определения биовара основан на вариабельной способности различных штаммов шигелл ферментировать некоторые углеводы, или образовывать индол.

Метод определения биоваров S.sonnei основан на неодинаковой активности в отношении ксилозы, рамнозы и мальтозы, что позволяет подразделить их на 7 стабильных биоваров согласно приложению 10 к настоящей Инструкции.

Для определения биоваров S.flexneri 6 используют неодинаковую ферментацию ими глюкозы, маннита и дульцита, что позволяет выявить среди них 3 различных биовара согласно приложению 11 к настоящей Инструкции. Определение биоваров S. flexneri 1-5 Х- и Y-variant основано на биохимической активности в отношении мальтозы, арабинозы, сорбита и рамнозы, что позволяет разделить их на 15 биоваров согласно приложению 12 к настоящей Инструкции.

Установление биоваров S.boydii основано на неодинаковой активности их в отношении сорбита, глицерина, ксилозы, дульцита, что позволяет дифференцировать их на 8 биоваров согласно приложению 13 к настоящей Инструкции.

 

ГЛАВА 5

БАКТЕРИИ РОДА ESCHERICHIA

Эшерихии – палочковидные бактерии, относящиеся к семейству Enterobacteriaceae, роду Escherichia, который состоит из 5 видов: E.coli, E.fergusonii, E.hermanii, E.vulneris, E.blattae.

Род образуют подвижные или неподвижные прямые палочковидные бактерии c закругленными концами, размером 0,6-1х2,0-6,0 мкм, многие имеют капсулу или микрокапсулу. Грамотрицательные, в мазках располагаются одиночно или парами. Факультативные анаэробы. Температурный оптимум для роста 37⁰С, ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа, оксидазоотрицательны и каталазоположительны.

Особенность рода состоит в том, что непатогенные разновидности эшерихий являются постоянными обитателями кишечника человека, животных, птиц и широко распространены в природе. Эшерихии – основная факультативно-анаэробная микрофлора кишечника человека. Основное медицинское значение имеет кишечная палочка (Escherichia сoli), являющаяся типовым видом рода Escherichia. Наряду с кишечными палочками, обладающими непатогенными свойствами, имеются серовары обладающие свойствами патогенных возбудителей, они являются возбудителями эшерихиозов у человека.

E. сoli имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закругленными концами. На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S - колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре), либо сухи плоские R - колонии с неровными краями. В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадков. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактозоположительные эширихии образуют фуксиновокрасные колонии с металлическим блеском, лактозоотрицательные – бесцветные, на среде Плоскирева - соответственно красные с желтым оттенком. Биохимические свойства E. сoli согласно приложению 18 к настоящей Инструкции.

Эшерихии ферментируют углеводы с кислотообразованием: постоянно - глюкозу (с газом или без него), маннит; обычно ферментирует лактозу (иногда замедленно), не ферментирует адонит и инозит (крайне редко наблюдаются положительные реакции): другие углеводы и многоатомные спирты сбраживают вариабельно; не образуют сероводород на средах с хлоридом железа; обычно не утилизируют цитрат, малонат: не имеют фенилаланиндезаминазы, уреазы, желатиназы: утилизируют ацетат, дают положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную Фогес-Проскауэра; постоянно имеют лизиндекарбоксилазу и не постоянно - орнитиндекарбоксилазу и аргининдегидролазу. Не растут в средах с КСN. По первым шести тестам, указанным в приложении 18 к настоящей Инструкции можно определить принадлежность выделенной культуры к E. сoli.

По морфологическим, ферментативным и культуральным свойствам патогенные и непатогенные кишечные палочки не отличаются друг от друга, их дифференцировка основана на различиях в структуре антигена. Антигенная структура E. сoli весьма сложная. Для построения антигенно-диагностических схем и серологической идентификации, наиболее важное значение имеют липополисахаридные (О-), жгутиковые белковые (Н-), капсульные полисахаридные (К-) антигены.

У эшерихий известно более 170 вариантов О-антигена, более 100 разновидностей К-антигена и около 60 разновидностей Н-антигена. О-антиген термостабилен, Н-антиген - термолабилен. К-антиген по чувствительности к прогреванию подразделяется на 3 типа: А, В и L. При проведении серологических исследований для определения О-антигена необходимо иметь в виду своеобразие О-агглютинабельности, которое у штаммов, содержащих К-антиген, обычно обнаруживается после прогревания, когда разрушаются поверхностные антигены. Этот феномен получил название О-инагглютинабельности.

L и В антигены термолабильны. Прогревание при 100⁰С в течение 1 часа приводит к полной инактивации L-антигена и бактерии, содержащие такой антиген, хорошо агглютинируются О-сывороткой, не агглютинируются соответствующей L-сывороткой и не способны связывать L-антитела. Аналогичная обработка эщерихий, имеющих В-антиген, также делает бактерии агглютинабильными в О-сыворотке, но не лишает способности связывать соответствующие В-антитела и в отдельных случаях агглютинироваться В-сывороткой.

А-антиген термостабилен. Агглютинабильность бактерий, обладающих А-антигеном в О-сыворотке достигается только лишь после прогревания их при 120⁰С в течение 2,5 часов.

У человека кишечная палочка вызывает кишечные инфекции, поражения мочевыводящих путей, бактериемии, менингиты и др.

Этиологической причиной пищевых отравлений из числа E. сoli обычно бывают разновидности, являющие возбудителями энтеральных эшерихиозов.

E.сoli, вызывающие диарею, разделяют на пять типов: энтеротоксигенные E.сoli, ЕТКП - возбудители диареи путешественников, холероподобной диареи у детей и взрослых; энтероинвазивные E. сoli, ЕИКП - возбудители поражений, напоминающие бактериальную дизентерию; энтеропатогенные E. сoli, ЕПКП - основные возбудители диарей у детей 1-го года жизни; энтерогеморрагические E. сoli, ЕГКП - возбудители геморрагического колита и гемолитико- уремического синдрома (наиболее частыми возбудителями бывают серовары О157:Н7 и О26:Н11); энтероагрегирующие E.сoli, ЕАКП – возбудители диарей у детей. Серовары E. сoli наиболее часто вызывающие кишечные инфекции, согласно приложению 19 к настоящей Инструкции. Кроме перечисленных в приложении сероваров возбудителями кишечных инфекций могут быть эшерихии других серологических групп. Антигенно-диагностическая схема сероваров E.сoli, наиболее часто вызывающих кишечные инфекции прдставлена в приложении 20 к настоящей Инструкции.