Студопедия — ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ 6 страница
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ 6 страница






В том случае, если контрольные мыши и получившие смесь токсина с сывороткой типа А пали, следует ставить развернутую реакцию нейтрализации с сыворотками C. perfringens типов В, D, Е. Для выявления штаммов типов D и Е следует проводить активацию протеолитическими ферментами неактивных прототоксинов, вырабатываемых штаммами типов D и Е. Способ приготовления рабочих растворов протеолитических ферментов изложен в главе 11 настоящей Инструкции.

Приготовленный 4% рабочий раствор панкреатина добавляют к надосадочной жидкости в соотношении 1 мл панкреатина к 3 мл надосадочной жидкости.

Для активации также можно пользоваться трипсином; для этого 1% рабочий раствор трипсина добавляют к надосадочной жидкости до концентрации 0,1% (на 1 мл надосадочной жидкости берут 0,1 мл рабочего раствора трипсина).

Смесь токсина с ферментом помещают в термостат при 37° на 1 час, после чего разводят в 3 раза и ставят развернутую реакцию нейтрализации с культуральной жидкостью после активации ферментами для обнаружения токсинов типов D и Е.

Кроме того, ставят реакцию нейтрализации с неактивированной культуральной жидкостью, разведенной в 2 раза для выявления токсинов типов В и С.

Метод постановки развернутой реакции нейтрализации. В пять пробирок разливают исследуемую надосадочную жидкость: в первую и вторую пробирки - по 1,5 мл без активации, в третью, четвертую и пятую - по 1,5 мл жидкости после активации. Добавляют по 0,75 мл антитоксические диагностические сыворотки: в первую пробирку - типа В, в третью - типа D и четвертую - типа Е.

Вторая и пятая пробирки являются контрольными на присутствие токсинов, в них добавляют по 0,75 мл физиологического раствора.

Смеси выдерживают 30 минут при 370С и вводят внутривенно по 0,75 мл двум белым мышам из каждой пробирки. Результаты учитывают через сутки. При наличии токсинов C.perfringens гибнут мыши, получившие раствор из контрольной пробирки. Выживают мыши, получившие смесь токсина с гомологичной сывороткой. Так, если в исследуемом материале находится токсин типа В или типа С, выживут мыши, получившие смесь исследуемой культуры с сывороткой типа В, контрольные мыши падут. При обнаружении токсина нейтрализующегося сывороткой типа В следует считать, что в исследуемом материале содержится C.perfringens типа В либо типа С. Присутствие одного из токсинов типов В, С, D, Е в исследуемом материале в сочетании с характерной клинической картиной дает основание считать, что пищевое отравление вызвано штаммами одного из указанных типов C.perfringens.

Выделение чистой культуры. Чистую культуру C.perfringens необходимо выделять и исследовать в случае нечеткого результата реакции нейтрализации, при наличии в первичных посевах исследуемого материала (т.е. во флаконах) смешанной культуры, где, наряду с C.perfringens, присутствует посторонняя микрофлора.

Чистую культуру C.perfringens можно получить путем пересева на мясные среды в пробирках отдельных характерных колоний (черные на среде Вильсон - Блер, а также окруженные зоной гемолиза, или перламутрового преципитата - на кровяном или желточном агарах). Колонии на плотных средах выростают нa 2-й день исследования при изучении обсемененности материала. Колонии, характерные для C. perfringens, высевают (по 3-5 колоний из посева каждого образца исследуемого материала) на мясные среды в пробирках (см. 2-й день исследований).

Через 18-20 часов в выросших посевах определяют методом микроскопирования наличие однородной культуры с морфологией, характерной для C.perfringens. Пробирки с культурами хранят при 4-100С и используют в дальнейшем для изучения чистой культуры.

Для выделения чистой культуры из трупного материала, который не изучается на обсемененность C.perfringens, следует использовать культуры первичных посевов во флаконах (см. 2-й день исследования, определение токсинов). Для выделения отдельных колоний используют среду Вильсон - Блер, а также кровяной или желточный агары в чашках Петри, куда стерильно вносят 1-2 капли культуры, затем производят рассев на 2-3 чашки шпателем.

Посевы в чашках Петри выращивают в анаэростатах в течение 24 ч при 370С. Выросшие отдельные колонии пересевают на мясную среду.

Для определения типовой принадлежности выделенных штаммов C.perfringens посевной материал из пробирок с мясной средой пересевают в объеме 2-3 мл на одну из жидких питательных сред (Китт-Тароцци) во флаконах.

В выросшей культуре устанавливают присутствие специфических токсинов C.perfringens методом реакции нейтрализации с типовыми антитоксическими диагностическими противоперфрингенс сыворотками типов А, В, D, Е (см. 2-й день исследований).

 

ГЛАВА 13

CAMPYLOBACTER

Кампилобактерии – извитые бактерии рода Campylobacter. Обнаруживаются в ЖКТ, в полости рта и гениталиях человека и животных.

Известны более 10 видов возбудителей, из них наибольшее значение в патологии человека имеют C. jejuni, C. coli, C. Fetus (типовой вид). Упрощенная классификация кампилобактерий, согласно приложению 31 к настоящей Инструкции.

Кампилобактериоз – типичная зоонозная инфекция. Важнейшим источником инфекции для человека являются сельскохозяйственные животные и домашние птицы, среди которых лидирующее положение занимают коровы и куры. Возможно также заражение от кошек, собак, декоративных птиц. Заболевания человека, при которых в роле этиологического агента выступают бактерии рода Campylobacter подразделяют на 4 группы: поражения пищеварительного тракта (диарея, гастроэнтерит, энтероколит); генерализованные и/или локализованные некишечные формы инфекции (артрит, септический тромбофлебит, менингит, септицемии); перинатальные инфекции; заболевания ротовой полости. Наибольшее значение кампилобактерии имеют как возбудители диарейных заболеваний.

Заражение от человека к человеку происходит редко, главным образом при несоблюдении правил личной гигиены. Кампилобактериоз регистрируется как в виде спородических заболеваний, так в виде вспышек. Ведущую роль при этом играют пищевой и водный пути передачи. Наибольшее значение среди факторов передачи кампилобактериозной инфекции имеют мясопродукты. Роль молока, как возможного фактора передачи при кампилобактериозной инфекции подтверждена многочисленными эпидемиологическими данными. К роду Campylobacter относятся грамотрицательные спирально изогнутые вокруг длинной оси извитые формы, длиной 0,5-5,0 мкм и шириной 0,2-0,5 мкм, существующие в виде одиночных, так и попарно расположенных, не разошедшихся после деления клеток, напоминающих «крылья чайки». Не образуют спор и капсул, обладают одним, двумя полярно расположенными жгутиками, обеспечивающими высокую подвижность «шпорообразным» характером движения, каталазопозитивные. Микроэрофилы растут в атмосфере, богатой СО2, с пониженным содержанием кислорода. Оптимальная атмосфера инкубации 5-7% О2, 10% СО2, 83-85% N2. Микроаэрофильные условия могут быть созданы с помощью газогенерирующих, каталитических газогенерирующих и безкаталитических газогенерирующих пакетов, анаэростатов, «свечного сосуда». Аэротолерантность кампилобактеров повышается при введении в состав питательных сред, добавок связывающих супероксид-ион и другие активные формы кислорода. К ним относятся кровь, активированный уголь, FBP – добавки. FBP – добавка: железа II сульфат, натрия пируват, натрия метабисульфит в концентрации 0,25% каждой из солей.

Культуральные свойства: на жидких средах – легкое помутнение среды. На полужидких - диск на расстоянии 3-5 мм от поверхности. На плотных средах два типа колоний, колонии первого типа – крупные, неправильной формы, влажные, блестящие («капли конденсата»), колонии второго типа – мелкие, округлые, приподнятые с ровными краями.

Питательными основами для выращивания кампилобактер являются: агар Мюллера-Хинтона, Колумбийский агар, триптозный агар для бруцелл, эритрит агар и др.

При проведении идентификации используют температурный тест: 250С, 370С, 420С, каталазный и оксидазный тест, окраску по Грамму кристаллвиолет или 1% раствор фуксина, гидролиз гиппурата, индоксилацетата, резистентность к цефалотину и налидиксовой кислоте.

Лабораторная диагностика кампилобактериоза.

Принципы микробиологической диагностики включают бактериоскопические, бактериологические и серологические методы. Материалом для исследования являются: испражнения, кровь, вода, молоко и различные пищевые продукты. Основным методом лабораторной диагностики является бактериологический метод.

Сбор и транспортировка исследуемого материала.

По уровню чувствительности к дезифектантам кампилобактеры близки к кишечной палочке. Натрия гипохлорид в концентрации 1,25мг/л, 0,15% фенольных соединений, йодоформ в в концентрации 10мг/л, 70% этиловый спирт, 0,125% глютаровый альдегид вызывают гибель C. jejuni в течение 1мин, поэтому предметы ухода за больными, откуда осуществляется забор образцов нативных фекалий (подкладные судна, горшки и др), после дезинфекционный обработки следует тщательно промыть водой.

При острых кишечных инфекциях для исследования на кампилобактериоз забирают нативные испражнения, или содержимое прямой кишки с помощью ректальной петли. Исследоване испражнений, полученных путем естественной дефекации, является предпочтительным, так как объем материала больше, чем при использовании ректальной петли, что способствует лучшему сохранению кампилобактеров. Если доставка материала производится в течение 1 ч можно обойтись без транспортных питательных сред. Если более 1 ч необходимо использовать транспортные среды (Кэри-Блэра, Амиса), соотношение материала к среде 1:3-1:5.

Забор материала следует проводить в возможно ранние сроки от начала заболевания, до начала антибактериальной терапии, а также на протяжении заболевания для контроля эффективности лечения. Применение транспотртных сред при использовании ректальных петель обязательно. Микроскопическое исследование тонкого мазка, окрашенного 1% раствором фуксина в течение 10-30 с или окраска кристаллическим фиолетовым позволяет быстро обнаруживать спиралевидные или S - образные бактерии. Возможно применение фазово-контрастной микроскопии суспензий фекалий в жидкой среде.

Выделение Campylobacter из фекалий. Протокол выделения Campylobacter их фекалий согласно приложению 32 к настоящей Инструкции.

Пробу фекалий 1 мл или 1 г эмульгируют в 9 мл физиологического раствора. Затем производят посев на селективную среду (кровяной эритрит-агар (далее КЭА), угольный эритрит-агар (далее УЭА)) и др. коммерческие среды. Инкубируют при 420С от 1 до 5 дней в микроаэрофильных условиях с ежедневным учетом роста. На средах без крови: колонии серые и коричневые с металлическим блеском или без него. На средах с кровью: серые или коричневые. Из подозрительных колоний готовят мазки и окрашивают по Граму, изучают подвижность методом «раздавленной и висячей» капли, проводят тест на оксидазу, каталазу, тест на КОН, гидролиз гиппурата, индоксилацетата. Обнаружение в мазках типичной для кампилобактерий морфологии является основанием для пересева материала на поверхность селективной среды для накопления чистой культуры. Посевы инкубируются при 420С в течение 48 часов в микроаэрофильных условиях. Из материала выделенных культур готовят мазки и окрашивают их по Граму, затем изучают подвижность культуры методом «раздавленной или висячей» капли. Кампилобактериям свойственна высокая подвижность, движение его носит стремительный, мечущийся из стороны в сторону характер, «шпорообразно» ввинчивающийся в окружающую среду.

Тест на оксидазу. Нанести колонию на влажный диск (для определения оксидазы), помещенный на стекло. Появление синей окраски в течение 10 секунд расценивается как положительный результат.

Тест на каталазу. Растереть несколько колоний на предметном стекле, добавить 1-2 капли 3% перекиси водорода, перемешать. Появление пузырьков свидетельствует о продукции каталазы. Снимая колонию с агара, содержащего кровь, во избежание ложноположительной реакции постараться не касаться агара.

Метод тяжа (тест с КОН). Каплю 3% раствора КОН смешать с колонией микроорганизма на предметном стекле, затем потянуть петлю снизу вверх. Появление длинных нитей, тянущихся вслед за петлей означает положительную реакцию.

Тест на резистентность к налидиксовой кислоте, цефалотину. Материал суточной культуры исследуемого штамма, выращенного на среде без антибиотиков, инокулируется (посев штрихом или бляшкой) на поверхность эритрит-агара с 5% крови, FBР добавками с 30мг/л налидиксовой кислоты (цефалотина). Посевы инкубируются при 370С в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях. Наличие роста в зоне инокуляции свидетельствует о резистентности культуры к налидиксовой кислоте (цефалотину). Тест можно реализовать при наличии стандартных дисков с цефалотином и налидиксовой кислотой (концентрация по 30мкг на диск).

Температурный тест. При постановке этого теста определяется способность штамма к росту 25, 37, 420С. Постановка температурного теста возможна как на плотной, так и на полужидкой среде. Посев культуры производят в столбик полужидкого агара, в 3 пробирки, после чего одну инкубируют при 250С, вторую при 370С, третью при 420С. Посевы инкубируют в микроаэрофильных условиях в течение 48 часов.

Тест на гидролиз гиппурата. Взять несколько колоний 18-24 часовой культуры, проэммульгировать в пробирке с раствором гиппурата, чтобы получить чистую суспензию. Хорошо перемешать и инкубировать при 370С в течение 2 ч на водяной бане. Вновь перемешать и затем по стенке пробирки осторожно наслоить на поверхность питательной среды 200мл 3,5% раствора нингидрида, вновь инкубировать 10 мин при 370С на водяной бане и учесть реакцию.

Тест на гидролиз индоксилацетата. Приготовленную заранее сухую бумажную полоску, пропитанную индоксилацетатом смочить стерильной дистиллированной водой, избыток воды удалить стерильным ватным тампоном, затем нанести на полоску колонию Campylobacter. Появление в течение 5-10 мин сине-зеленой окраски указывает на положительнкю реакцию.

Биохимическая характеристика видов Campylobacter представлена в приложении 33 к настоящей Инструкции.

Метод фильтров. Метод основан на активной подвижности Campylobacter в полужидких средах. Используются мембранные, ацетатно-целлюлозные с порами 0,45 или 0,65 μм ядерные, трековые фильтры.

Первый день. Приготовить чашку Петри со средой КЭА, Мюллер-Хинтон с добавлением 5% крови, положить стерильный фильтр (0,45 или 0,65 мм) на поверхность свежеприготовленного агара и оставить его для пропитывания. Нанести пипеткой 6 капель суспензии (1:10 пробы фекалий в физиологическом растворе). Выдержать посев при 370С 30-45 мин (для пассивной фильтрации). Осторожно убрать фильтр и инкубировать в микроаэрофильных условиях в течение 5 суток при 370С с ежедневным учетом роста.

Второй день. Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму. Подозрительные колонии пересевают на Колумбия агар с 5% кровью и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 420С в течение суток. Дальнейшая идентификация проводится как описано выше.

Выделение Campylobacter из продуктов и воды, согласно приложению 34 к настоящей Инструкции.

Проба продукта или воды 1 г или 1 мл (10г-10мл; 25г или 25мл). Соотношение количества пробы к объему среды обогащения должно составлять 1:9, чем большее количество посевного материала, тем большая вероятность выделения кампилобактер.

Первый день. Гомогенизируют пробу в бульоне Престона. Затем пробирки (флаконы) инкубируют (обогащение) при 420С в микроаэрофильных условиях 24 часа.

Второй день. Проводят пересев со среды обогащения на селективную среду (КЭА, УЭА) и инкубируют при 420С в микроаэрофильных условиях 1-5 суток с ежедневным просмотром результатов.

Дальнейшая идентификация проводится с помощью фенотипических тестов и биохимических характеристик.

Серологическая диагностика заболеваний вызываемых кампилобактером.

Антигенная структура кампилобактерий представлена Н-Аг и О-Аг, а также кислоторастворимыми белковыми фракциями, имеющими ведущее значение в серотипировании. Н-Аг – термолабильные, разрушаются нагреванием при 75-1000С, О-Аг- термостабильные – выдерживают кипячение в течение 2,5ч. В практике используется реакция непрямой гемагглютинации, коагглютинации, иммунноферментный анализ, иммунноэлектрофорез, латекс-агглютинация. Экспресс-диагностика включает постановку РИФ со специфическими люминесцентными сыворотками. Молекулярная идентификация основана на ПЦР и позволяет выявить многие виды Campylobacter редко встречающие или плохо культивируемые. Преимуществом ПЦР над методами культивирования является прямое выявление и идентификация вида микроорганизма из пробы, но этот метод не позволяет провести серотипирование или определить чувствительность к антибиотикам.

 

ГЛАВА 14

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЯМИ

С целью улучшения диагностики заболеваний, вызываемых энтеробактериями, а также при проведении эпидемиологического анализа и выявления источников инфекции, следует применять серологические исследования и, в частности, определять в сыворотке крови антитела к антигенам соответствующих возбудителей. Наибольшее значение серологические исследования приобрели в диагностике брюшного тифа, паратифов и других сальмонеллезов, в меньшей степени - при дизентерии. В случае выделения условно-патогенных энтеробактерий (далее УПЭ) серологические исследования могут иметь определенное значение при оценке этиологической роли выделенных микробов.

Наиболее специфичным и чувствитель­ный методом титрования антител является реакция пассивной (непря­мой) гемагглютинации (РПГА). Для постановки РПГА с целью выявления антител к О-антигенам возбудителей брюшного тифа, паратифов, других сальмонеллезов и дизентерии применяют коммерческие стабильные эритроцитарные диагностикумы. При отсутствии эритроцитарных О-диагностикумов, а также для выявления Н-антител применяют реакцию агглюти­нации (типа Видаля) с соответствующими коммерческими О- и Н-диагностикумами. Для серологической диагностики инфекций, вызываемых УПЭ (Esherichia, Yersinia, Citrobacter, Proteus и др.), коммерческие препараты не выпускают, поэтому реакцию агглютинации ставят с аутоштаммами.

При постановке любой из указанных серологических реакций следует учитывать одно принципиально важное обстоятельство, человеческий организм в течение жизни многократно встречается с различными энтеробактериями и их антигенами, поэтому в крови многих практически здоровых людей могут присутствовать (иногда в значительных титрах) антитела к этим антигенам. Вследствие этого понятие «диагностический» титр определяемых антител носит лишь весьма условный ориентировочный характер. Следует учитывать и то, что для разных районов страны (в связи с особенностями эпидемической ситуации и др.) величина «диагностического» титра будет различной. Ее устанавливают в результате титрования сывороток от 100-200 здоровых лиц. Существенно большее диагностическое значение имеет нарастание уровня антител в динамике заболевания, для чего сыворотку нужно брать сразу после выявления больного, а затем в конце первой или в начале второй недели болезни. В более поздние сроки заболевания титр антител к специфическому антигену снижается, что также может служить диагностическим признаком.

Значительную помощь для постановки более обоснованного диагноза оказывает определение не только общего (суммарного) титра антител без дифференциации их на классы иммуноглобулинов, но и антител, относящихся к классу иммуноглобулинов G (IgG). Нормальные (так называемые неспецифические), анамнестические и прививочные антитела, особенно к О-антигенам бактерий, принадлежат в основном к иммуноглобулину М (IgM) и могут содержаться в довольно высоком титре у многих здоровых людей.

Определение относительного содержания в сыворотках IgG - антител основано на том, что эти антитела устойчивы к обработке некоторыми редуцирующими веществами и, в частности, цистеином, тогда как IgM - антитела активируются этими реагентами.

РПГА в диагностике брюшного тифа, паратифов, других сальмонеллезов и дизентерии.

Кровь берут с соблюдением правил асептики из пальца с помощью оспопрививательных игл или шприцом из вены в стерильную пробирку. После образования сгустка его отделяют от стенок стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой и ставят пробирку в холодильник. Не дозднее чем через 24 часа после взятия крови отсасывают сыворотку. Если сыворотка содержит примесь эритроцитов, ее центрифугируют.

Для постановки РПГА удобно использовать пластмассовые планшеты с лунками, в которых готовят последовательные двукратные разведения исследуемых сывороток. С этой целью вначале в лунки планшета наливают по 0,5 мл ИXH. Отдельно разводят в 50 раз исследуемую сыворотку (например, 0,1 мл сыворотки + 4,9 мл ИХH), 0.5 мл сыворотки в этом разведении вносят в первую лунку. Содержимое лунки тщательно перемешивают градуированной пипеткой и 0,5 мл переносят во вторую лунку, а из второй после перемешивания - в третью и т.д. Обычно достаточно таким способом приготовить ряд из 5-6 разведений (до разведения 1:1600-1:3200). Из последней лунки 0,5 мл содержимого выливают и вносят во все лунки чистой пипеткой по 0,25 мл необходимого эритроцитарного диагностикума, ампулу с которым тщательно взбалтывают до полного исчезновения осадка эритроцитов. С целью экономии диагностикумов их можно вносить по 3 капли (не по 0,25 мл, а 0,15 мл). Пластины осторожно несколько раз встряхивают до получения гомогенной взвеси эритроцитов и ставят на 2-3 часа в термостат при 370С или на ночь при комнатной температуре, после чего учитывают результат.

Контролями диагностикумов служат: постановка реакции со стандартной иммунной сывороткой, вложенной в каждую упаковку диагностикума, - реакция должна быть положительной до разведения, указанного на ампуле с сывороткой; постановка реакции с 0,5 мл ИХН в 2-х лунках – реакция должна быть отрицательной.

Реакция гемагглютинации считается положительной в том случае, если эритроциты полностью агглютинировались и расположены равномерно по дну лунки, либо наряду с равномерно расположенными небольшая часть эритроцитов оседает в центре лунки в виде донного колечка или «пуговки». Иногда при положительной реакции края агглютината в лунках могут слегка сползать, и он принимает вид «зонтика». При отрицательном результате агглютината нет, а эритроциты оседают в центре лунки виде «пуговки» или ровного колечка.

При необходимости определения IgG -антител следует использовать L - или DL - цистеин как солянокислый, так и «свободный». Препарат должен быть чистым и содержать золу в виде сульфатов не более 0,2%, аммиак - не более 0,05%. Этим требованиям отвечает венгерский цистеин. Непосредственно перед обработкой сывороток готовят раствор цистеина (7 мг на 1 мл растворителя для L - цистеина и 20 мг для DL -цистеина). При этом солянокислый цистеин растворяют в 0,1 N растворе едкого натрия с таким расчетом, чтобы рН готового раствора был равен 7,0-7,2. «Свободный» цистеин сначала растворяют в половинном количестве ИХН, затем доводят рН до 7,0 - 7,2 0,1 N раствором едкого натрия и вновь доливают до нужного объема ИХН, т.к. «свободный» цистеин значительно слабее, чем солянокислый сдвигает рН раствора в кислую сторону. Допустимо использование отечественного цистеина который предварительно должен быть проверен, причем эталоном может служить венгерский или другой проверенный цистеин. С целью проверки рН применяют индикаторную бумагу. Раствор цистеина не может храниться длительное время, поэтому следует вначале приготовить необходимое разведение сыворотки.

Исследуемую сыворотку в разведении 1:5 смешивают с равным объемом цистеина, помещают в небольшие пробирки шли флаконы и плотно закрывают их резиновыми пробками (лейкопластырем). Объем пробирок (флаконов) должен быть таким, чтобы между содержимым и пробкой оставалось минимальное свободное пространство во избежание инактивации цистеина кислородом воздуха. Пробирки с сыворотками, обработанными цистеином, выдерживают в течение 18-20 часов в термостате при 37 С. В таких же условиях выдерживают вторую часть исследуемой сыворотки (без цистеина), разведенную 1:10 с применением ИХН. На следующий день обе части сыворотки титруют, начиная с разведения 1:20. В качестве основы для титрования сывороток, обработанных цистеином, необходимо использовать забуференный ИХН (фосфатный буфер рН 7,0-7,2), однако предпочтительней готовить ИХН на нормальной, прогретой при 560С в течение 30 минут сыворотке (кроличьей, лошадиной, крупного рогатого скота). Нормальную сыворотку добавляют из расчета 1 мл на 100-200 мл ИХН (рН 7,0-7,2) при условии, что в принятом разведении нормальной сыворотки отсутствуют антитела к применяемым диагностикумам. Это про­веряют предварительно для каждой новой серии нормальной сыворотки.

С целью диагностики брюшного тифа и паратифов сыворотки следует титровать с помощью О-диагностикумов серогрупп А, В и D, а также Н-диагностикумов 1 фазы а, b, d и vi - диагностикума. Четкое нарастание в динамике болезни титра суммарных антител к определенным антигенам и особенно увеличение уровня IgG - антител, устойчивых к цистеину, дает веские основания для подтверждения клинического диагноза. Необходимо учитывать, что при паратифе А титры 0 - антител на протяжении заболевания могут быть ниже чем при брюшном тифе и паратифе В.

В случае позднего поступления больного в стационар (в разгар болезни) условно диагностическим титром суммарных О - и Н - антител следует считать дополнительный результат в разведении не ниже 1:640, а для vi - антител 1:80-1:100. Минимальным условно диагностическим титром IgG О- и Н-антител считают разведение 1:80, а для IgG vi-антител 1:40 (при паратифе А «диагностические титры могут быть в 2 раза ниже).

При позднем серологическом обследовании больного и отсутствии бактериологического подтверждения диагноза целесообразно исследовать сыворотку в периоде реконвалесценции, чтобы выявить снижение общего титра антител и уменьшение удельного содержания цистеинустойчивых IgG –антител, что также может помочь поставить правильный диагноз.

С целью диагностики сальмонеллезов сыворотки вначале титруют с комплексным диагностикумом (серогрупп А, В, C1, C2, D и Е). При нарастании уровня антител или достаточно высоком титре (для взрослых не ниже 1:400, для детей до полугода - 1;100, для детей от 6 месяцев до 1 года - 1:200), следует повторить исследование сыворотки со всеми групповыми 0-диагностикумами и повторить РПГА с цистеиновой пробой. Это необходимо для уточнения этиологии заболевания и потому, что комплексный диагностикум недостаточно специфичен. Условно диагностическим титром суммарных антител считают положительный результат реакции в разведении 1:400, а цистеинустойчивых IgG -антител 1:80 (для детей до 1 года 1:20).

С целью диагностики дизентерии сыворотки титруют с эритро-цитарными диагностикумами Флекснера (из S.flexneri 1-5) Зонне (из S.sonnei), Ньюкастл (из S.flexneri 6) Григорьева-Шига (из S.dysenteriae 1) и Штуцера-Шмитца (из S.dysenteriae 2). Минимальным условно-диагностическим титром к диагностикуму Флекснера для взрослых считают положительный результат реакции в разведении 1:400, для детей до 3 лет - 1:100, старше 3 лет - 1:200; для остальных диагностикумов - 1:200. В связи с большим числом неспецифических положительных результатов этой реакции, в особенности в отношении диагностикумов Флекснера и Зонне, достоверным положительным результатом следует считать не менее чем четырехкратное нарастание титра в динамике заболевания, а также наличие титра цистеинустойчивых антител 1:80 и выше.

РПГА с цистеином может оказаться полезной для постановки правильного диагноза в случаях смешанной инфекции и при выделении двух или нескольких представителей энтеробактерий, этиологическая роль каждого из которых не ясна. При истинной микст-инфекции антитела и особенно цистеинустойчивые будут нарастать к каждому из предполагаемых возбудителей. Если же к какому-то из предполагаемых возбудителей, нарастание антител, и в том числе IgG, не будет выявлено, и при этом отсутствуют клинические симптомы заболевания, то можно считать, что выделение возбудителя носит случайный, транзиторный характер.

В случае формирования острого и особенно затяжного бактерионосительства (при брюшном тифе, паратифах, реже при сальмонеллезах и других инфекциях) характерно выраженное нарастание IgG -антител, при этом основное значение имеет не абсолютный титр антител, а относительное содержание в сыворотке цистеиноустойчивых антител. Если обработка цистеином не снижает титр, либо снижает его только на одно, максимум на два разведения, это свидетельствует о значительном содержании в сыворотке IgG-антител, у такого обследованного следует заподозрить острое или хроническое бактерионосительство (при отсутствия клинических проявлений).

При длительном бактерионосительстве титр О-антител может быть и низким (иногда 1:20 - 1:40), но эти антитела практически целиком определяются IgG - антителами. Для хронических носителей тифозных бактерий характерны довольно высокие титры vi - антител (в большинстве случаев выше 1:80) и Н - антител (1:320 и выше), которые почти не снижаются при обработке цистеином.

Отмеченная закономерность может нарушаться у хронических носителей тифозных бактерий, инвазированных описторхами. Это необходимо принимать во внимание при обследования населения территорий, на которых распространен описторхоз.







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 539. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...

Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...

Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

ТЕОРИЯ ЗАЩИТНЫХ МЕХАНИЗМОВ ЛИЧНОСТИ В современной психологической литературе встречаются различные термины, касающиеся феноменов защиты...

Этические проблемы проведения экспериментов на человеке и животных В настоящее время четко определены новые подходы и требования к биомедицинским исследованиям...

Классификация потерь населения в очагах поражения в военное время Ядерное, химическое и бактериологическое (биологическое) оружие является оружием массового поражения...

Билиодигестивные анастомозы Показания для наложения билиодигестивных анастомозов: 1. нарушения проходимости терминального отдела холедоха при доброкачественной патологии (стенозы и стриктуры холедоха) 2. опухоли большого дуоденального сосочка...

Сосудистый шов (ручной Карреля, механический шов). Операции при ранениях крупных сосудов 1912 г., Каррель – впервые предложил методику сосудистого шва. Сосудистый шов применяется для восстановления магистрального кровотока при лечении...

Трамадол (Маброн, Плазадол, Трамал, Трамалин) Групповая принадлежность · Наркотический анальгетик со смешанным механизмом действия, агонист опиоидных рецепторов...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.015 сек.) русская версия | украинская версия